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    小量細菌克隆的雜交法篩選實驗

    實驗方法原理 主瓊脂板上和覆蓋于另一塊瓊脂板表面的硝酸纖維濾膜或尼龍膜上的細菌克隆可以被定位, 經過一段時間,已經在濾膜上生長的克隆可以被原位裂解以備雜交之用。同時,主瓊脂板可置于 4℃ 保存,直到篩選的結果出來為止。 實驗材料 E.coli 試劑、試劑盒 LB 或 SOB 瓊脂板 儀器、耗材 硝酸纖維素膜 注射器 針頭 防水黑色墨汁 木制牙簽或接種環 ......閱讀全文

    細菌學診斷新技術

     隨著現代科學技術的不斷發展,特別是免疫學、生物化學、分子生物學的不斷發展,新的細菌診斷技術和方法已廣泛用于食品微生物的鑒別。傳統的細菌分離、培養及生化反應,已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學的研究。近年來國內外學者不斷努力,已創建不少快速、簡便、特異、敏感、低耗且適用的細菌學診斷方法

    抑制細菌轉錄終止檢測技術篩選RNA結合蛋白實驗

    一種通過篩選重組 cDNA 文庫研究多肽與 RNA 相互作用的細菌抗轉錄終止檢測系統。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法原理一種通過篩選重組 cDNA 文庫研究多肽與 RNA 相互作用的細菌抗轉錄終止檢測系統。實驗材料N-表達質粒E.coil N567 感受態細菌試劑、試劑盒儲

    細菌學診斷中的新技術

    隨著現代科學技術的不斷發展,特別是免疫學、生物化學、分子生物學的不斷發展,新的細菌診斷技術和方法已廣泛用于食品微生物的鑒別。傳統的細菌分離、培養及生化反應,已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學的研究。近年來國內外學者不斷努力,已創建不少快速、簡便、特異、敏感、低耗且適用的細菌學診斷方法,

    國家藥監局印發食品安全檢驗機構技術裝備等基本標準

    關于印發餐飲服務食品安全檢驗機構技術裝備基本標準和現場快速檢測設備配備基本標準的通知 國食藥監食[2011]130號 各省、自治區、直轄市及新疆生產建設兵團食品藥品監督管理局:   為貫徹落實《食品安全法》、《食品安全法實施條例》以及《餐飲服務食品安全監督管理辦法》,逐步建立

    PCR簡介及污染的處理 高速離心機

    何謂PCR,簡單的說,PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制.目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。 PCR的要素基本的PCR須具備1.要被復制的DNA模板 Template 2

    PCR技術綜述

    前言      一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Po

    PCR簡介及污染的處理

    PCR技術簡介  前言 一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reacti

    定位候選克隆

    當前,人類基因組研究的重心正在由“結構”向“功能”轉移,一個以基因組功能研究為主要內容的所謂“后基因組時代”(post-genomics),也即功能基因組(functional genomics)時代,即將到來。如何獲取基因的功能信息,即與人類重大疾病和重要生理功能相關的基因信息,就擺在了我們面前。

    Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗

                實驗方法原理 Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫(融合蛋白的 N 端由載體序列編碼,C 端由克隆到載體的 cDNA 文

    昆蟲病原線蟲發育相關基因的鑒定

    實驗概要本實驗構建了昆蟲病原線蟲全長的cDNA文庫,構建的cDNA文庫分別與誘導和未誘導的處理下提取的 mRNA 制備的探針進行雜交,獲得差異表達的基因。主要試劑1. 酶類及分子量標準   1)  高保真酶Easy-A high fidelity c

    啟動子克隆方法研究進展(5)

    2 討論  以上介紹的幾種方法基本代表了現有的啟動子克隆方法,它們分別具有不同的特點和適用范圍。  利用啟動子探針載體篩選啟動子時,不需要知道具體的基因序列,避免了引物設計,并能獲得大量的啟動子片段;其缺點是需要構建1個穿梭質粒,建庫、轉化、篩選,工作量大,費時費力,而且克隆、亞克隆的過程繁瑣。因此

    Tec真核表達載體構建及其對細胞信號的影響實驗

    實驗方法原理研究認為Tec有肝組織與造血組織分布特異性,主要與EPO、EGF、IL6、GM CSF等細胞因子介導的信號轉導途徑密切相關,參與調控造血細胞尤其是淋巴細胞的增殖與分化。實驗材料大鼠試劑、試劑盒引物鼠重組肝細胞生長因子DMEM胰酶胎牛血清儀器、耗材PCR儀PVDF實驗步驟一、材料準備1.

    質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗——熱激法

    質粒的轉化是指將質粒或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。將連接產物轉化到感受態細胞中,實現重組克隆的增殖,便于后續分子操作(1)用于基因的克隆增殖;(2)篩選目的細胞。實驗方法原理熱激法:大腸桿菌在0 ℃ CaCl2低滲溶液中,菌細胞膨脹成球形,轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥

    Tec真核表達載體構建及其對細胞信號的影響實驗

    實驗方法原理研究認為Tec有肝組織與造血組織分布特異性,主要與EPO、EGF、IL6、GM CSF等細胞因子介導的信號轉導途徑密切相關,參與調控造血細胞尤其是淋巴細胞的增殖與分化。實驗材料大鼠               &n

    細菌學診斷新技術

        隨著現代科學技術的不斷發展,特別是免疫學、生物化學、分子生物學的不斷發展,新的細菌診斷技術和方法已廣泛用于食品微生物的鑒別。傳統的細菌分離、培養及生化反應,已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學的研究。近年來國內外學者不斷努力,已創建不少快速、簡便、特

    電穿孔技術在轉基因及動物克隆中的應用

    Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu第四軍醫大學全軍骨腫瘤研究所 西安 710038Institute of Orthopedi

    單克隆抗體的制備實驗

    單克隆抗體的制備實驗可以用于:(1)將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交, 獲得既能產生抗體, 又能無限增殖的雜種細胞,并以此生產抗體;(2)該技術是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體,對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。實驗方法原理單克隆抗體技術(monoclo

    桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統2

    五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進,對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初,最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法,這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中,轉移質粒和親代桿狀病毒

    抑制細菌轉錄終止檢測技術篩選RNA結合蛋白實驗

                實驗方法原理 一種通過篩選重組 cDNA 文庫研究多肽與 RNA 相互作用的細菌抗轉錄終止檢測系統。 實驗材料

    淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術

    1975年,Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合,形成的雜交細胞既可產生抗體,又可無限增殖,從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元,也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。  制備單克隆抗體包括動物免疫

    DNA文庫的構建及其篩選

                實驗方法原理 高等植物基因組的一個顯著特征是其內含有大量的 DNA 重復序列, 重復序列常位于異染色質區, 因此可能與染色體的結構有關 . 季靜等根據國際上 對基因組、染色體、結

    液相芯片技術的原理與應用

    液相芯片,也稱為微球體懸浮芯片(suspension array,liquid chip),是基于xMAP(flexible MultiAnalyte Profiling)技術的新型生物芯片技術平臺,它是在不同熒光編碼的微球上進行抗原抗體、酶底物、配體

    液相芯片技術的原理與應用進展

       液相芯片,也稱為微球體懸浮芯片(suspension array,liquid chip),是基于xMAP(flexible Multi Analyte Profiling)技術的新型生物芯片技術平臺,它是在不同熒光編碼的微球上進行抗原 抗體、酶 底物、配體 受體的結合

    M13噬菌體衣殼蛋白改造在改良噬菌體展示技術的應用實驗

    本章描述了改進融合蛋白在 M13 噬菌體顆粒表面展示水平的一個方法。向 M13 衣殼錨定蛋白引入突變后,蛋白質展示水平約能增加兩個數量級。本實驗來源「現代蛋白質工程實驗指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒編著。實驗材料羧芐青霉素氯霉素大腸桿菌 CJ236試劑、試劑盒生理磷酸緩沖液超純甘油PBS-

    利用λ噬菌體文庫篩選 DNA 結合蛋白實驗

                試劑、試劑盒 ATP 結合緩沖液 變性溶液 二硫蘇糖醇 EDTA 乙醇激酶 連接酶

    隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗

    隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗可用于:(1)體外診斷;(2)體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸(DNA 或 RNA)文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫,因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外,還有 G-U 等變偶堿基對的

    分子雜交技術(四)

    六、核酸分子雜交實驗因素的優化  (一)探針的選擇  根據不同的雜交實驗要求,應選擇不同的核酸探針。在大多數情況下,可以選擇克隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下,必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如,在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針,在檢測單鏈靶序列時應

    分子雜交技術(四)

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    多重端粒熒光原位雜交實驗

    實驗方法原理實驗材料永生化淋巴細胞株試劑、試劑盒青霉素谷氨酰胺胎牛血清植物血球凝集素胸苷秋水仙胺KCl甲醇冰乙酸檸檬酸鈉SSC甘油生物素-16-dUTP地高辛-11- dUTP10 XdNTP 混合物儀器、耗材超凈臺細胞培養瓶Nunc 管培養基相差顯微鏡染色缸加熱板裝有Pinkel濾光片輪的CCD顯

    應用末端截切、進化、再延長技術提高酶穩定性

    應用末端截切、進化、再延長技術提高酶穩定性的方法             實驗材料 質粒

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