DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫，然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選，產生雜交信號的克隆被剔除，最后剩下的不與任何其他細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。cDNA探針是從相應的基因經轉錄獲得mRNA，再通過逆轉錄酶的作用得到的探針，不含內含子序列。在體外通過機器可以合成小片段單鏈寡核苷酸探針。寡核苷酸探針穩定、特異性高，在非常嚴格的條件下用寡核苷酸探針進行的雜交試驗能檢測單個堿基突變和單個堿基的錯配，但寡核苷酸探針短，帶有的標記物少，敏感性較低。......閱讀全文
DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別
“DNA探針”的制備過程
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
高地辛標記的DNA探針制備實驗——基本方法
實驗材料DNA試劑、試劑盒dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直到獲得大
DNA－酶－I－足跡探針的制備實驗
DNA 酶 I 足跡探針的制備實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 牛腸堿性磷酸酶緩沖液 T4 多核苷
高地辛標記的DNA探針制備實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱實驗步驟 1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直
DNA－酶－I－足跡探針的制備實驗
試劑、試劑盒 TE牛腸堿性磷酸酶緩沖液 T4 多核苷酸激酶緩沖液TBE 加樣緩沖液TBE質粒 DNA合適的限制酶粉 氯仿氯仿 異戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛腸堿性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸銨 乙酸鈉丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED儀器、耗材 SpeedVac 旋轉濃縮器
DNA－酶－I－足跡探針的制備實驗
試劑、試劑盒TE牛腸堿性磷酸酶緩沖液T4 多核苷酸激酶緩沖液TBE 加樣緩沖液TBE質粒 DNA合適的限制酶粉 氯仿氯仿 異戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛腸堿性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸銨乙酸鈉丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED儀器、耗材SpeedVac 旋轉濃縮器實驗步驟
高地辛標記的DNA探針制備實驗
基本方法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
基因探針的制備－方法
進行分子突變需要大量的探針拷貝，后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針進，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外重組
cDNA－探針的制備方法
首先需分離純化相應mRNA，這從含有大量mRNA的組織、細胞中比較容易做到，如從造血細胞中制備α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆轉錄酶的作用下，就可以合成與之互補的DNA(即cDNA)，cDNA與待測基因的編碼區有完全相同的堿基順序，但內含子已在加工過程中切除。
IL2質粒DNA探針制備的操作步驟
實驗概要本實驗介紹了IL-2質粒DNA探針制備的詳細步驟。實驗步驟1. 含IL-2質粒DNA探針的提取?? 1) 取含IL-2質粒DNA的單個菌落置兩個25ml LB培養基(含100μg/ml Amp)，37℃ 220r/min 振搖過液(約16h )；?? 2) 取10ml菌液加200ml LB培
基因組探針的制備方法
進行分子突變需要大量的探針拷貝，后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針進，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外重組
DNA基因探針的克隆方法介紹
對于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質，然后測定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列，然后根據這一序列合成一套寡核苷酸探針。用此探針在DNA文庫中篩選，陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所
制備互補DNA的方法
制備互補DNA，往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質，則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細胞而論，此細胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原)，則可從沉淀
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段：①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段；③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段；④從mRNA反轉錄產生cDNA。
寡核苷酸探針的制備方法
寡核苷酸探針是人工合成的，與已知基因DNA互補的，長度可從十幾到幾十個核苷酸的片段。如僅知蛋白質的氨基酸順序量，也可以按氨基酸的密碼推導出核苷酸序列，并用化學方法合成。
Northern雜交操作步驟和DNA探針的制備與標記（2）
(4) 將1 ~ 2 μl RNA 上樣緩沖液加到乙二醛化的RNA 樣品中，然后馬上把RNA樣品加到凝膠加樣孔中，留著兩邊最外面的兩個孔不要加樣。將RNA 相對分子質量標準參照物加到最外面的孔中。(5) 以5V/cm 的電壓進行電泳，直到溴酚藍遷移大約8 cm。(6) 將凝膠放在保鮮膜上，在紫外燈下
Northern雜交操作步驟和DNA探針的制備與標記（1）
一．原理Northern 雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計其豐度的實驗方法，可以從大量的RNA樣本同時獲得這些信息。其基本步驟包括：1. 完整mRNA的分離2. 根據RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RNA進行分離3. 將RNA 轉移到固相支持物上，在轉移的過程中，要保持RNA 在凝膠中的相
制備互補DNA的方法過程
制備互補DNA，往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質，則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分???。就胰島B細胞而論，此細胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原)，則可
蛋白芯片技術的探針的制備方法
低密度蛋白質芯片的探針包括特定的抗原、抗體、酶、吸水或疏水物質、結合某些陽離子或陰離子的化學集團、受體和免疫復合物等具有生物活性的蛋白質。制備時常常采用直接點樣法，以避免蛋白質的空間結構改變。保持它和樣品的特異性結合能力。高密度蛋白質芯片一般為基因表達產物，如一個cDNA文庫所產生的幾乎所有蛋白質均
常用DAN探針制備的方法介紹轉錄標記
轉錄標記(transcription labeling)是利用啟動子(oromoter)結合 RNA 聚合酶啟動轉錄的特性設計的一種標記方法。Melotn(1984)等將目的 DNA 片段克隆到含 SP 啟動子的載體上,目的基因位于啟動子下游,加上 RNA 聚合酶,轉錄合成了 RNA 探針。與切口平
常用DAN探針制備的方法介紹PCR－標記
PCR 技術是1985年 KarryMullis 等首先創建的可在體外迅速、大量地擴增一定長度的核苷酸序列的技術。PCR問世以來已廣泛應用于分子生物學研究和疾病診斷中。此技術還應用于核酸探針的制備。Girgsi 等(1988)應用 PCR 從多序列制備了 DNA 探針。Shcow-aletr 和 S
蛋白質芯片技術探針的制備方法
低密度蛋白質芯片的探針包括特定的抗原、抗體、酶、吸水或疏水物質、結合某些陽離子或陰離子的化學集團、受體和免疫復合物等具有生物活性的蛋白質。制備時常常采用直接點樣法，以避免蛋白質的空間結構改變。保持它和樣品的特異性結合能力。高密度蛋白質芯片一般為基因表達產物，如一個cDNA文庫所產生的幾乎所有蛋白質均
常用DAN探針制備的方法介紹切口平移
切口平移(nick translation)是制備核酸探針的常用方法之一。該方法用 DNase Ⅰ在雙鏈 DNA 內部切開若干個單鏈切口形成3'-OH 末端,而不打斷 DNA 的雙鏈結構;用大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ的5'→3'核酸外切酶活性,從游離5'端降解雙鏈 D
隨機引物法介紹DNA探針的標記方法
變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段，作為引物，當后者與單鏈DNA多個部位互補結合后，按堿基互補原則不斷在其3'-OH端添加同位素標記的單核苷酸，這樣也可以獲得放射性比活性很高的DNA探針。
關于禽流感基因探針制備方法介紹
將禽流感病毒H9N2亞型毒株核蛋白(NP)基因3′端較為保守的、約350bp的編碼序列通過限制性內切酶Hae?切割、分離后,用隨機引物法制備Digoxigenin2112dUTP標記探針。測定該探針的濃度為100Lg?ml。特異性試驗發現該探針只能與實驗室構建的、含有NP基因的重組載體pGEM2TE
簡述基因探針的制備
進行分子突變需要大量的探針拷貝，后者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針前，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外
“DNA探針”的性能優勢
①DNA探針多克隆在質粒載體中,制備方法簡便;②DNA探針相對RNA探針(RNA probe)而言不易降解,一般能有效抑制DNA酶活性;③DNA探針的標記方法較成熟,可用同位素或非同位素標記,有多種方法可供選擇。
“DNA探針”的技術依據
DNA探針根據其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應的基因經轉錄獲得mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20～50個堿基的與基
“DNA探針”的性能優勢
①DNA探針多克隆在質粒載體中,制備方法簡便;②DNA探針相對RNA探針(RNA probe)而言不易降解,一般能有效抑制DNA酶活性;③DNA探針的標記方法較成熟,可用同位素或非同位素標記,有多種方法可供選擇。