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  • 利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化 實驗材料 T4 DNA 連接酶 感受態細胞 試劑、試劑盒 Taq 聚合酶 PCR 緩沖液 溴化乙錠(EB) 溶液 過硫酸銨(APS) 水溶液 儀器、耗材 瓊脂糖凝膠 實驗步驟 3.1 克隆NExT 混編過......閱讀全文

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化實驗

    3.5 片段純化經酶解和化學裂解得到的基因片段(見 10.3.3 ) 即可通過硅膠樹脂直接從切割反應液中純化(見 10.3. 5.1),也可通過制備型尿素變性聚丙烯酰胺凝膠電泳純化(見 10.3.5.2) 。最初我們認為如想得到特定大小的片段必須通過凝膠電泳來純化,以確保在重組裝反應中沒有較長片段甚

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化實驗

    利用 DNA 混編模仿自然進化過程是優化 DNA 和蛋白質性質的常用方法。這里我們介紹這類方法的一個新進展,即利用標準的聚合酶鏈反應(PCR)放大基因文庫時與其他 4 種標準 dNTP—起摻入 dUTP 作為確定 DNA 碎裂位點的交換核苷酸。本實驗來源「現代蛋白質工程實驗指南」〔德〕K.M.阿恩特

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化實驗-1

    實驗材料?T4 DNA 連接酶感受態細胞試劑、試劑盒?Taq 聚合酶PCR 緩沖液溴化乙錠(EB) 溶液過硫酸銨(APS) 水溶液儀器、耗材?瓊脂糖凝膠實驗步驟 3.1 克隆NExT 混編過程中,使用包含限制性酶切位點的混編引物的配對位點應設置在緊挨著目標基因的兩側,理想的退火溫度為 60°C 左右

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化實驗-3

    3.6 純化片段的定量為了分析和比較純化得到的 DNA 的產量,我們首先使用 SYBR Greenn 試劑來定量。因為 NExT DNA 混編方法的重復率很髙,我們只定量一次即可(見注 16 )。通常我們都能獲得濃度為 40~60 ng/μl 的 DNA 片段。( 1 ) 取 2 μl 純化的 DN

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化實驗-2

    3.3 酶解反應和化學切割將尿苷酸交換 PCR 純化后的產物進行 UDG 酶解反應,在交換核苷酸位置切割 DNA。該酶對雙鏈和單鏈 DNA 均有效,通過對雙脫氧尿苷 C1' 位點的親核攻擊引發水解反應,高特異的去除尿嘧啶基團 [12] 。哌啶用于經 UDG 酶切割去除尿嘧啶后的骨架部分

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向

    利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 T4 DNA 連接酶 感受態細胞

    鳥嘌呤核苷酸交換因子的定義

    中文名稱鳥嘌呤核苷酸交換因子英文名稱guanine nucleotide-exchange factor;GEF定  義有助于小G蛋白上的鳥苷二磷酸(GDP)和鳥苷三磷酸(GTP)相互轉換,從而活化Ras和Rho等小G蛋白的一類蛋白質家族。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞通信與信號轉導(二級學科

    鳥嘌呤核苷酸交換因子的定義

    中文名稱鳥嘌呤核苷酸交換因子英文名稱guanine nucleotide-exchange factor;GEF定  義有助于小G蛋白上的鳥苷二磷酸(GDP)和鳥苷三磷酸(GTP)相互轉換,從而活化Ras和Rho等小G蛋白的一類蛋白質家族。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞通信與信號轉導(二級學科

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    離子交換柱層析分離核苷酸實驗

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