Northern印跡和總RNA雜交實驗
Northern印跡分析 雜交和放射自顯影 試劑、試劑盒 甲醛凝膠溶液 RNA 電泳緩沖液 儀器、耗材 凝膠模 梳齒 凝膠用具 實驗步驟 1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml ......閱讀全文
Northern印跡和總RNA雜交實驗——Northern印跡分析
試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml? ???Milli-Q 或用玻璃器皿蒸餾過的
Northern印跡和總RNA雜交實驗
試劑、試劑盒 甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材 凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟 1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml ? ??Milli-Q 或用玻璃器皿蒸
Northern印跡和總RNA雜交實驗
Northern印跡分析雜交和放射自顯影試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?RNA 電泳緩沖液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
Northern印跡和總RNA雜交實驗
Northern印跡分析 雜交和放射自顯影 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲醛凝膠溶液 RNA 電泳緩沖液
Northern印跡和總RNA雜交實驗——雜交和放射自顯影
實驗材料mRNA試劑、試劑盒甲酰胺SSPEDenhardt 試劑SDS儀器、耗材濾膜實驗步驟1. 濾膜進行 1~2 小時預雜交。在 42℃：50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 試劑0.1% SDS或者在 68℃：6x SSC2x Denhardt 試劑0.1% SDS2. 把已變性
總RNA提取與Northern雜交（2）
4、Loading buffer（10ul每個樣） ? 總體積 100ul 200 ul 500ul 10×MOPS
總RNA提取與Northern雜交（1）
一、 總RNA的提取1、 取組織10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以內的碎片，加入×5的RNA later（約2毫升）。樣品在37度可保存1天。室溫下1周，4度下1個月。2、 勻漿：用Rnase Erase spray（ICN）清理勻漿器頭部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，將上述樣品用鑷
總RNA提取與Northern雜交（3）
第二天：將上述物品揭開，將膠正面朝下，膜正面朝上，用鉛筆作好標記。將膠浸泡在EB中1-2分鐘，用DEPC H2O清洗，將膜放在濾紙上面，夾好，4度下保存，或者直接進行預雜交。UV雜交（有助于RNA結合到膜上面）。五、預雜交和雜交預雜交和雜交 buffer： 100ul20×SSC 25ml （5×S
RNA印跡(Northern－Blot)
【實驗原理】將RNA變性及電泳分離后，轉移到固相支持物上，用于與DNA探針雜交以鑒定其中特定 RNA分子的大小與含量。基本原理與Southern印跡相同，但RNA變性方法與DNA不同，不能用堿變性，因為堿會導致RNA的水解。Northern印跡主要用于組織細胞靶基因表達水平的研究以及對同一組織細胞的
組織印跡的Northern雜交
組織印跡的Northern雜交1）硝酸纖維素膜或尼龍膜上的組織印跡1．在塑料板上放置兩層Whatman 1號濾紙，在濾紙上方放上一張普通紙，然后鋪上一層尼龍膜。2．用雙面刀片從植物組織如大豆的莖上切取一塊切片（厚度約為1mm）。如果組織表面是濕的，則在Kimwipes紙上輕輕吸干或先用蒸餾水洗滌幾秒
Northern雜交試驗指導手冊（6）－Northern－印跡雜交
A． 探針準備DIG標記的RNA探針與DNA探針相比，顯示較強的雜交信號和較地的非特異性背景，因此，只要可能選用RNA探針可以比DNA探針獲得更好的雜交結果。如果必須使用DNA探針，建議使用高SDS雜交緩沖液或DIG Easy Hyb以減少背景。在正式雜交試驗之前，優化雜交探針濃度是避免顏色背景所必
RNA印跡雜交
RNA印跡雜交1）???????Northern印跡的制備預備：1．按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或0.5～1μg poly(A)+RNA進行甲醛/瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。a.?總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：總RNA（1
Northern印跡的制備和Northern印跡
Northern印跡的制備 預備： 1.按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA進行甲醛/ 瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。 a. 總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：
Northern雜交試驗指導手冊（1）－RNA提取
方法一、改良異硫氰酸胍提取法試劑及其配制異硫氰酸胍變性液：貯存液－在含484ml 水（經DEPC處理）, 17.6ml 0.75mol/L檸檬酸鈉（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g異硫氰酸胍，加熱至60~65℃并持續攪拌使之充分溶解。貯存液室溫保存備用（不超過3個
Northern雜交
Northern雜交1．在10~20 ml?預雜交液中68℃溫育膜2h。2．若使用雙鏈探針，在100℃下加熱32P標記的雙鏈DNA 5 min，使之變性，然后迅速移至冰水中冷卻。3．把變性的或單鏈放射性標記的探針直接加到預雜交液中，在合適的溫度下繼續溫育12~16h。4．雜交后，將膜從塑料袋中取出，
Northern雜交
實驗概要本實驗介紹了Northern雜交的基本流程。主要試劑液氮，TRIzol ?(Invitrogen)，DEPC水，氯仿，異丙醇，70%酒精，酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，水飽和酚(PH4.3)，無水乙醇，NaOAc，抽提緩沖液(0.02M ?NaOAc，1 mM EDTA，0.5% SD
Northern雜交
轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗膜以去除非特異結合的探針，
Northern雜交
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的
Northern雜交
實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗
Northern－Blotnorthern雜交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
Northern雜交試驗指導手冊（5）－RNA探針制備
五、RNA探針制備（根據the DIG system user's guide）A． 地高辛標記的體外轉錄試劑及其配制（試劑盒提供）：10× NTP標記混合物：in Tris-HCl (pH 7.5)10mmol ATP10mmol CTP10mmol GTP6.5mmol UTP3.5mm
Northern雜交試驗指導手冊（2）－RNA質量檢測
二、RNA質量檢測提取的RNA需要對其質量和數量進行檢測。實驗室常用的方法有紫外吸收值檢測和電泳檢測兩種。方法一、紫外吸收檢測試劑：TE ( 10mmol/L Tris, 1mmol/LEDTA)。dH2O試驗程序1．預熱紫外分光光度計10～20min.。2．取兩個1ml的狹縫石英杯，一個裝入1ml
Northern－印跡分析實驗
為了確認所選擇 cDNA 確實是差異表達的，建議使用 Northern 印跡分析，而不要用其他的確認技術，比如反向 Northern 雜交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲
Northern－印跡分析實驗
試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲醛甲酰胺預雜交 雜交液HotPrime cDNA Labeling Kit礦物油MOPS 緩沖液MOPS乙酸鈉EDTAPCR 緩沖液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鮭魚精 DNATaq DNA
Northern－印跡分析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠 菌落裂解緩沖液 蒸餾水 甲醛 甲酰胺預雜交 雜交液 HotPrime cDNA Labeling Kit
Northern雜交技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。?含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，
OsAGAP的Northern雜交
實驗概要本實驗參照Sambrook等(1989)的方法進行轉膜，雜交。實驗步驟1. RNA樣品的電泳轉膜將適量的瓊脂糖溶于水，微波爐加熱使之完全溶解，并冷卻至60℃；將甲醛溶液、瓊脂糖水溶液、5X甲醛凝膠電泳緩沖液按1:3.5:1.1比例混合，灌制凝膠。將不同材料的上樣量調成一致，均為35ug，與樣
RNA的Nouthern印跡和狹線雜交分析實驗
Northern blot 是研究基因表達的最嚴謹的方法之一，可以定量分析組織中某一特異 mRNA 的表達豐度，根據其遷移位置也可以判斷基因表達轉錄物的大小。該技術應用十分廣泛，常用于分析 RNA 樣品中特定 mRNA 的大小和豐度，也可用于基因表達調控、基因結構及功能、遺傳變異等研究。實驗材料RN
RNA的Nouthern印跡和狹線雜交分析實驗
甲醛-瓊脂糖凝膠電泳 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 RNA 試劑、試劑盒
RNA的Nouthern印跡和狹線雜交分析實驗
實驗材料 RNA試劑、試劑盒 DEPCMOPS甲醛瓊脂糖乙酸銨NaOHNaClTris·Cl磷酸鈉溴化乙錠SDS儀器、耗材 離心機電泳儀培養箱紫外線透照儀雜交爐實驗步驟 1. ?用72 ml 水溶解1 g 瓊脂糖，在水浴中冷至60℃時，移至通風櫥中加入10×MOPS電泳緩沖液和18 ml 12.3