影響瓊脂糖凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素
影響瓊脂糖凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素有DNA分子大小、DNA構象、凝膠濃度、瓊脂糖種類、電泳緩沖液、嵌入染料的存在和使用電壓等。一、DNA分子大小:DNA分子大小遷移速度與logN成反比(N為堿基對數目)。分子越大,摩擦力越大,同時大分子通過凝膠孔的效率低于較小的分子,所以大分子的遷移速度慢。一般來說,分子帶的電荷量越大,直徑越小,形狀越接近球形,遷移速度越快。二、DNA構象:等量的空間結構,緊密結構的遷移速度快,超螺旋環狀DNA>線狀DNA>單鏈開環DNA。三、凝膠濃度:凝膠濃度越大,分子孔徑越小,DNA遷移速度越慢。反之,遷移速度越快。凝膠濃度也與凝膠的分辨率有關。凝膠濃度越大,分辨率越高,但分離的DNA片段越小。四、瓊脂糖種類:包括標準瓊脂糖、低熔點瓊脂糖和正在研制的介于二者之間的瓊脂糖,其分辨率各有不同。五、電泳緩沖液:緩沖液pH值距離其等電點越遠,其所帶凈電荷量越大,遷移速度越快,尤其是蛋白質等兩性分子。緩沖液p......閱讀全文
影響瓊脂糖凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素
影響瓊脂糖凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素有DNA分子大小、DNA構象、凝膠濃度、瓊脂糖種類、電泳緩沖液、嵌入染料的存在和使用電壓等。一、DNA分子大小:DNA分子大小遷移速度與logN成反比(N為堿基對數目)。分子越大,摩擦力越大,同時大分子通過凝膠孔的效率低于較小的分子,所以大分子的遷移速度慢。
影響凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素
影響凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素有樣品的物理性質、支持物介質、電場強度和緩沖液等。一、樣品的物理性質:1、分子大小:線狀雙鏈DNA分子長度(堿基對數目bp)的常用對數與遷移距離成反比,以此來測定DNA片段(線性雙鏈)的分子量準確且方便。當DNA分子大小超過20kb時,普通瓊脂糖凝膠很難將它們分開,
瓊脂糖凝膠電泳及其影響因素
瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的標準方法。該技術操作簡便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度離心法)所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DN
瓊脂糖凝膠電泳遷移速率的影響因素
1、DNA的分子大小及構型 不同構型DNA的移動速度次序為:供價閉環DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直線DNA>開環的雙鏈環狀DNA。線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難于在凝
瓊脂糖凝膠電泳遷移速率的影響因素
1、 DNA的分子大小及構型: 不同構型DNA的移動速度次序為:共價閉環DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直線DNA>開環的雙鏈環狀DNA。線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越
影響電泳遷移率的因素
影響電泳遷移率的外界因素:①電場強度 ②溶液的pH值 ③溶液的離子強度 ④電滲現象 影響電泳遷移率的內在因素:①質點所帶凈電荷的量 ②質點的大小和形狀
影響電泳遷移率的因素
由電泳遷移率的公式可以看出,影響電泳分離的因素很多,下面簡單討論一些主要的影響因素:1.?待分離生物大分子的性質待分離生物大分子所帶的電荷、分子大小和性質都會對電泳有明顯影響。一般來說,分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形,則其電泳遷移速度越快。2.?緩沖液的性質緩沖液的?pH?值會影響待分
影響電泳遷移率的因素介紹
由電泳遷移率的公式可以看出,影響電泳分離的因素很多,下面簡單討論一些主要的影響因素: 1. 待分離生物大分子的性質 待分離生物大分子所帶的電荷、分子大小和性質都會對電泳有明顯影響。一般來說,分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形,則其電泳遷移速度越快。 2. 緩沖液的性質
用瓊脂糖凝膠電泳分析核酸有哪些影響因素
核酸電泳中所用到的eb能用sybrgreen,goldview替代。GoldViewⅠ是一種可代替溴化乙錠(EB)的新型DNA染料,其靈敏度與EB相當,使用方法與之完全相同。在紫外燈下雙鏈DNA呈現綠色熒光,而單鏈DNA呈紅色熒光。通過小鼠皮下注射實驗,尚未發現GoldViewⅠ有致癌作用;而溴化乙
影響電泳遷移率的因素有哪些?
⒈電場強度 電場強度是指單位長度(cm)的電位降,也稱電勢梯度。如以濾紙作支持物,其兩端浸入到電極液中,電極液與濾紙交界面的紙長為 20cm,測得的電位降為 200V,那么電場強度為200V/20cm=10V/cm。當電壓在500V以下,電場強度在 2-10v/cm 時為常壓電泳。電壓在 500V
決定DNA在瓊脂糖凝膠電泳色譜儀中遷移速率的因素
決定DNA在瓊脂糖凝膠電泳色譜儀中遷移速率的因素有DNA分子大小、瓊脂糖凝膠濃度、DNA構象、瓊脂糖凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠、所用電壓、電泳緩沖液等。一、DNA分子大小:雙鏈DNA分子在瓊脂糖凝膠中的遷移速率與其堿基對數的常用對數成反比。分子越大,遷移越慢,因為摩擦力越大,也因為大分子通過凝膠孔
影響DNA分子在瓊脂糖凝膠電泳儀中泳動度的因素
影響DNA分子在瓊脂糖凝膠電泳儀中泳動度的因素有DNA分子性質、瓊脂糖凝膠濃度、電場強度和緩沖液離子強度等。一、DNA分子性質:DNA分子性質包括DNA分子電荷數、大小和空間構型等。1、DNA分子電荷數:一般來說,分子的電荷密度越大,泳動度越大。但不同核酸分子的電荷密度大致相同,因此對泳動度影響不大
凝膠電泳儀影響因素
瓊脂糖主要在DNA制備電泳中作為一種固體支持基質,其密度取決于瓊脂糖的濃度。在電場中,在中性pH值下帶負電荷的DNA向陽極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定: 1、 DNA的分子大小: 線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難于在
凝膠電泳儀的影響因素
瓊脂糖主要在DNA制備電泳中作為一種固體支持基質,其密度取決于瓊脂糖的濃度。在電場中,在中性pH值下帶負電荷的DNA向陽極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定: 1、 DNA的分子大小: 線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難
影響凝膠電泳的因素有哪些?
DNA分子提取得到以后,需要通過電泳技術來檢測其數量和質量。自從瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠被引入核酸研究以來,按相對分子質量大小分離DNA的凝膠電泳技術,已經發展成為一種分析鑒定DNA分子的重要實驗手段。瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳是基因操作的核技術之一,它能夠用于分離、鑒定和純化DNA片段。該技術操
影響DNA凝膠電泳結果的因素
電流強度與釋放出熱量(Q)之間的關系可列成如下公式,則越慢;t為電泳時間.因此、焦耳熱.在電場作用下影響電泳泳動度的因素:1.反之,則降低顆粒的泳動速度、篩孔.3.公式表明.一般來說顆粒帶凈電荷量越多,帶電顆粒的泳動速度越快,常常會有一些離子基團如羧基,在篩孔大的凝膠中溶質顆粒泳動速度快,此溶液層會
瓊脂糖凝膠電泳色譜儀的載體分類
瓊脂糖凝膠電泳色譜儀的載體按熔點可分為高熔點(標準)瓊脂糖凝膠和低熔點瓊脂糖凝膠。一、高熔點(標準)瓊脂糖凝膠:制造高熔點瓊脂糖凝膠的原料是Gelidium和Gracilaria海藻。這兩種瓊脂糖的熔點不同,但在實際應用中每種來源的瓊脂糖都可以用于分離1~25kb的DNA段。新型的標準瓊脂糖具有高凝
瓊脂糖凝膠電泳色譜儀分析技術
瓊脂糖凝膠電泳色譜儀是以瓊脂糖凝膠作為載體的電泳技術,廣泛用于核酸研究,為DNA分子及其片段的分子量測定和DNA分子構象分析提供了重要手段。一、工作原理:瓊脂糖凝膠電泳中,DNA分子的遷移率與其分子量的常用對數成反比。DNA分子構象對遷移率也有影響,遷移率為共價閉環DNA>直線DNA>開環雙鏈DNA
瓊脂糖凝膠電泳實驗——瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳可應用于:(1)DNA切膠回收;(2)DNA分離;(3)佐證DNA是否重組,質粒等是否切開以及其他分子生物學研究。實驗方法原理用瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。其分析原理與其他支持物電泳的最主要區別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網絡結構,物質分子通過時會受到阻
瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳遷移速率的影響因素
瓊脂糖主要在DNA制備電泳中作為一種固體支持基質,其密度取決于瓊脂糖的濃度。在電場中,在中性pH值下帶負電荷的DNA向陽極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定:(1)DNA的分子大小線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難于在凝膠孔隙中
進口電泳儀的電泳遷移率受何因素影響?
進口電泳儀的電泳遷移率受何因素影響? 進口電泳儀又稱毛細管電泳,是一種新型液相分離分析技術,以彈性石英毛細管為分離通道,以高壓直流電場產生的電滲流為驅動力,根據試樣中各組分之間電泳淌度和分配行為的差異實現分離。 進口電泳儀進行實驗室哪些因素會影響電泳遷移率呢? DNA分子大小遷移速率與log
瓊脂糖凝膠電泳
實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維,后者再聚合成半徑 20~30 nm 的超螺旋結構。實驗材料 DNA 樣品DNA 大小標準品試劑、試劑盒 瓊脂
瓊脂糖凝膠電泳
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維,后者再聚合成半徑 20~30 nm 的超螺旋結構。
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳1.??????用封邊帶封住塑料托盤開放的兩邊或清潔干燥的玻璃板的邊緣形成一個模具,置一個水平支架上。2.??????配制足量的電泳緩沖液(1×TAE或0.5×TBE)用以灌滿電泳槽和配制凝膠。?配膠和灌滿電泳槽使用同一批緩沖液。3.??????根據欲分離DNA片段大小用電泳緩沖液配制
瓊脂糖凝膠電泳
在凝膠電泳中,首先應用的是瓊脂電泳,它具有下列優點:(1)瓊脂含液體量 大,可達98-99%,近似自由電泳,但是樣品的擴散度比自由電泳小,對蛋白質的吸附 極微。(2)瓊脂作為支持體有均勻,區帶整齊,分辨率高,重復性好等優點。(3) 電泳速度快。(4)透明而不吸收紫外線,可以直接用紫外檢測儀作定量測定
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳可以用于:(1)檢測PCR結果;(2)分離不同大小的DNA條帶。實驗方法原理瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維,后者再聚合成半徑 20~30 n
瓊脂糖凝膠電泳
學習瓊脂糖凝膠電泳的基本原理; (2) 掌握使用水平式電泳儀的方法; (3)掌握核酸瓊脂糖凝膠電泳的基本操作 2實驗原理 瓊脂糖凝膠具有網絡結構,物質分子通過時會受到阻力,大分子物質在涌動時受到的阻力大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質和數量,而且還取決于分子大小
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的,是由D-半乳糖和3、6-脫水-L-半乳糖結合的鏈狀多糖,含硫酸根比瓊脂少,因而分離效果明顯提高。瓊脂糖電泳具有以下優點:①瓊脂糖含液體量大,可達98%~99%,近似自由電泳,但樣品的擴散度比自由電泳小,對蛋白質的吸附極微;⑦瓊脂糖作為支持體有分辨率高、重復性好等優點;③電
凝膠電泳色譜儀的支持介質
電泳儀是利用在電場作用下待分離樣品中各分子帶電性質、分子大小和形狀等差異,使帶電分子產生不同的遷移率,從而對樣品進行分離。自由界面電泳儀沒有支持介質,擴散和對流都比較強,影響分離效果。于是出現了固定支持介質的電泳儀,減少了擴散和對流等干擾作用。凝膠作為支持介質的引入大大促進了電泳儀的發展,使電泳儀成
單細胞凝膠電泳技術影響因素的分析
單細胞凝膠電泳(SCGE)又稱“彗星”法,是一種操作簡便、快速、敏感性高的DNA損傷與修復的檢測技術。盡管此法無需復雜的實驗條件,但在建立過程中可能受諸多因素的影響而難以得到較理想的結果,我們就其主要的影響因素作如下分析。1.瓊脂糖凝膠薄板的制備:該實驗需要制備兩層瓊脂糖凝膠薄板,應注意瓊脂糖的濃度