SDSPAGE銀染實驗的基本步驟以及相關純水應用
摘要：通過闡述水中雜質對銀染實驗帶來的影響，詳細解釋了為什么銀染實驗應該中應該使用EDI純水。SDS聚丙烯酰胺凝膠染色是蛋白質研究的一個基礎方法。染色方法有很多，實際應用中，考馬斯亮藍染色（考染）和銀染是運用的最多的方法。考馬斯亮藍G250在游離狀態下呈紅色，它與蛋白質結合后變為藍色，結合物在595 nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。銀染實驗中，在堿性條件下，銀離子被還原成金屬銀，沉淀在蛋白質的表面上顯色。蛋白電泳后的 SDS-聚丙烯酰胺凝膠在甲醇溶液中浸泡后，水洗后用硝酸銀溶液銀染，再水洗后用碳酸鈉甲醇水溶液顯色。與考染相比，銀染具有靈敏度高的優點，很多做環境、植物、育種等方面的客戶，都會做銀染方面的實驗。銀染對于試劑的要求比較高，尤其對其中使用純水的水質要求比較高。上海樂楓（RephiLe）技術人員根據自身經驗以及相關文獻中的方法為用戶提出以下銀染實驗方案：一、儀器和試劑乙酸（......閱讀全文
銀染
1．將固定液中的凝膠搖動過夜或至少1小時。2．將保溫液中的凝膠輕微振蕩2小時。3．去離子水清洗凝膠3次，每次20分鐘。4．將硝酸銀溶液中凝膠輕微振蕩30分鐘。5．用去離子水快速洗膠30秒。6．將定影液中凝膠搖動5～30分鐘，時間由所加的蛋白質量決定。7．如果已經達到所需的顏色深度，將凝膠放到定影液中
銀染實驗
試劑、試劑盒甲醇（50% 和5%v v)二硫蘇糖醇AgNO3檸檬酸（固態)顯影液實驗步驟試劑甲醇（50% 和5%v/v)10umol/L二硫蘇糖醇（DTT)AgNO3(0.1%w/v)檸檬酸（固態)顯影液操作程序此操作程序是根據Merril(1987)的方法修改而成。室溫下，凝膠在旋轉平臺上緩慢搖動
銀染實驗
銀染實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲醇（50% 和5%v v) 二硫蘇糖醇 AgNO3
銀染實驗
試劑、試劑盒 甲醇（50% 和5%v v)二硫蘇糖醇 AgNO3檸檬酸（固態)顯影液實驗步驟 試劑甲醇（50% 和5%v/v)10umol/L二硫蘇糖醇（DTT)AgNO3(0.1%w/v)檸檬酸（固態)顯影液操作程序此操作程序是根據Merril(1987)的方法修改而成。室溫下，凝膠在旋轉平臺上緩
銀染的應用
主要是用于垂直凝膠電泳中低豐度蛋白的檢測，如內源性GST-Pulldown、Co-IP等實驗中相互作用蛋白的研究 。
SSR銀染方法
SSR銀染方法(輕輕震蕩)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗（1）蒸餾水 1-2min（2）0.002% Na2S2O3 1-2min（3）顯色1.5%NaOH + 0.4%甲醛（4）保存0.75%Na2CO3
核酸的銀染方法
核酸硝酸銀染色：參考《鋅對缺血再灌注大鼠肝臟金屬硫蛋白一1基因表達的影響》營養學報2000年第22卷第4期294-297取PCR產物進行聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳，所得凝膠進行硝酸銀染色．程序如下：(1)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液中固定6 min；(2)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液
銀染實驗用水指南
SDS聚丙烯酰胺凝膠染色是蛋白質研究的一個基礎方法。染色方法有很多，實際應用中，考馬斯亮藍染色（考染）和銀染是運用的最多的方法。考馬斯亮藍G250在游離狀態下呈紅色，它與蛋白質結合后變為藍色，結合物在595 nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。銀染實驗中
PCR－產物電泳銀染實驗
常用的核酸電泳法有兩種。①水平電泳：瓊脂糖凝膠，紫外光下判斷條帶。此法經濟省時，但分辨率較低。②垂直電泳：聚丙烯酰胺凝膠，可見光下判斷條帶。此法相對費力，但分辨率較高。分辨率高是聚丙烯酰胺電泳法被優先用于克隆性基因重排條帶判斷的關鍵。在聚丙烯酰胺凝膠上較寬彌散被判斷為假陽性（陰性）的條帶，在瓊脂糖膠
銀染實驗的操作流程
實驗目的檢測聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質。實驗原理在堿性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。試劑：乙醇、冰醋酸（純乙酸）、乙酸鈉、硫代硫酸鈉
PCR－產物電泳銀染實驗
實驗方法原理 聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性較差，通常 2 個月內用完為好。
PCR－產物電泳銀染實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性
銀染的功能與方法特點
銀染是一種檢測聚丙烯酰胺凝膠中蛋白質的方法，其原理是銀離子在堿性 pH 環境下被還原成金屬銀，沉淀在蛋白質的表面上顯色。銀染的方法種類很多，有文獻報道的就有 100 多種。但是其準確的染色機制還不是特別地清楚。由于銀染的靈敏度很高，可染出膠上低于 1ng 的蛋白質點，故廣泛地用在 2D 凝膠分析上，
銀染(silver－staining)操作規程
實驗原理：在堿性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。 試劑：乙醇、冰醋酸、乙酸鈉、硫代硫酸鈉、硝酸銀、碳酸鈉、甘氨酸或EDTA.Na
DNA測序——非同位素銀染
實驗方法原理Promega公司的SILVER SEQUENCETM DNA測序系統是一種無放射性的序列分析系統，它通過靈敏的銀染方法檢測凝膠中的條帶。 銀染提供了一種對于放射性或熒光法來說更加快速，廉價的替代方法。測序結果可以在同一天內得到；電泳完成后經90分鐘就可讀序，這是常規的放射性測序法做不到
關于DNA測序測序凝膠的銀染
染色過程要求凝膠浸在塑料盤中。因而至少使用兩個盤子，大小與玻璃板類似。在盤中加入新鮮溶液之前須用高質量的水洗滌盤子。 1. 電泳完畢后用一個塑料片子小心地分開兩板，凝膠應該牢固地附著在短玻璃板上。 2. 固定凝膠：將凝膠（連玻璃板）放入塑料盤，用固定/停止溶液浸沒，充分振蕩20分鐘或直至樣品
銀染實驗的操作注意事項
1．固定時間較長，則加一步水洗30min，以免膠太脆而破碎。2．甲醛在使用前加入。3．最好多配制一份顯色液，第一次顯色到溶液變混濁時換一份顯色液，顯色到點清晰。4．顯色過程很快，要注意把握時間，避免染色過度。5．銀染液和顯色液需要預冷。6．所用器皿要很潔凈，不用手直接接觸，以免雜蛋白污染！7．清洗用
銀染后可以做質譜嗎
不行 質譜要求樣品是純度是分析純，銀染后蛋白質分子結合了銀，即使提純后再做質譜分析也沒有意義了，你可以將樣品分成兩份，一份跑電泳，另一份做質譜。
蛋白質染色實驗——銀染法
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒脫色液戊二醛硝酸銀洗印顯影液儀器、耗材培養箱搖床實驗步驟1. ?將聚丙烯酰胺凝膠放在塑料容器并以5倍體積的固定液覆蓋，在旋轉搖床中緩慢搖動30 min 以上。?2. ?傾去固定液，加5倍凝膠體積的脫色液，緩慢搖動60 min 以上。?3. ?傾去脫色液，加5倍凝膠體積的10
低背景的蛋白質銀染方法
我們做蛋白質電泳的人都知道，銀染色很靈敏，有很強的說服力，但通常膠背景較深，不易掃描。在這里介紹一下低背景的蛋白質銀染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim
蛋白質染色實驗——快速銀染法
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒甲醛固定液硫代硫酸鈉干膠液甲醇儀器、耗材搖床透析膜實驗步驟1. 將凝膠置于塑料容器中，加入50 ml 甲醛固定液，在旋轉搖床中緩慢搖動10 min。?2. ?傾去固定液，用水冼兩次，每次5 min，緩慢搖動。?3. ?傾去水，凝膠浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸鈉溶液中1 m
DNA測序測序凝膠的銀染的影響因素
測序產物的銀染是顯現序列信息的一種新方法，本系統的成敗受幾個因素的影響 ① 水的質量對于染色的成功極其重要。超純水（NANOpureR或Milli-QR的水）或雙蒸水可獲得較好的效果，如果水中有雜質，則低分子量條帶可能無法出現。 ② 碳酸鈉也非常重要。使用新鮮的，美國化學學會級碳酸鈉較好，如
非同位素銀染測序系統操作技術
Promega公司的SILVER SEQUENCETM DNA測序系統是一種無放射性的序列分析系統，它通過靈敏的銀染方法檢測凝膠中的條帶。銀染提供了一種對于放射性或熒光法來說更加快速，廉價的替代方法。測序結果可以在同一天內得到；電泳完成后經90分鐘就可讀序，這是常規的放射性測序法做不到的。 此外
影響DNA測序技術測序產物銀染的因素
1. 水的質量對于染色的成功極其重要。超純水(NANOpureR 或Milli-QR 的水)或雙蒸水可獲得較好的效果, 如果水中有雜質, 則低分子量條帶可能無法出現。 2. 碳酸鈉也非常重要。使用新鮮的，美國化學學會級碳酸鈉較好，如Fisher和Kodak ACS試劑級碳酸鈉(Fisher C
低背景的蛋白質銀染(silver－staining)方法
我們做蛋白質電泳的人都知道，銀染色很靈敏，有很強的說服力，但通常膠背景較深，不易掃描。在這里介紹一下低背景的蛋白質銀染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim
蛋白質染色實驗——非氨鹽銀染法
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒DTT硝酸銀碳酸鹽顯影液檸檬酸儀器、耗材搖床實驗步驟1. ?將凝膠置于玻璃或聚乙烯容器中，加入100 ml 固定液，在旋轉搖床中緩慢搖動30 min。?2. ?傾去固定液，將凝膠浸沒在脫色液中，緩慢搖動30 min。?3. ?傾去脫色液，加50 ml 10%戊二醛，在通風櫥
銀染核仁形成區的標本制備及觀察實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 生化和免疫化學研究證明銀染蛋白是RNA聚合酶I，其功能是催化rDNA轉錄rRNA形成核仁，因此通過這種反應能夠特異顯示rRNA轉錄的活
銀染核仁形成區的標本制備及觀察實驗
近年來發現，雖然人的端著絲粒染色體短臂是28S、18S、和5.8S rRNA基因存在部位，稱核仁形成區，但銀染的物質不是rDNA和rRNA，而是與活性的rDNA轉錄有關的一類酸性蛋白質，容易將Ag離子還原為Ag的顆粒，從而在核仁形成區鍍上銀、呈棕黑色，稱為銀染核仁形成區。實驗方法原理生化和免疫化學研
關于DNA測序技術的測序凝膠的銀染介紹
染色過程要求凝膠浸在塑料盤中。因而至少使用兩個盤子，大小與玻璃板類似。在盤中加入新鮮溶液之前須用高質量的水洗滌盤子。 1.電泳完畢后用一個塑料片子小心地分開兩板，凝膠應該牢固地附著在短玻璃板上。 2. 固定凝膠：將凝膠(連玻璃板)放入塑料盤，用固定/停止溶液浸沒,充分振蕩20分鐘或直至樣品中
銀染核仁形成區的標本制備及觀察實驗
實驗方法原理?生化和免疫化學研究證明銀染蛋白是RNA聚合酶I，其功能是催化rDNA轉錄rRNA形成核仁，因此通過這種反應能夠特異顯示rRNA轉錄的活性。實驗材料?HL-60細胞HeLa細胞試劑、試劑盒?Carnoy固定液HCl甲酸AgNO3蛋白膠硫代硫酸鈉戊二醛乙醇丙酮醋酸鈾檸檬酸鉛染液儀器、耗材?