哺乳動物中制備基因組DNA實驗
實驗材料 動物組織試劑、試劑盒 PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE儀器、耗材 離心機搖床研缽實驗步驟 1. 切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結。 2. 將200 mg~1 g 的組織用預冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。 3. 500 g 離心細胞5 min，棄上請。貼壁生長細胞先用胰酶消化。4. 細胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸，500 g 離心5 min，棄上清，重復1次。5. 用1體積 的消化緩沖液重懸細胞。 6. 將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。 7. 用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品，1 700 g 離心10 min。8. 如果樣品溶解得不好， 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液，并重復離心。......閱讀全文
哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、
哺乳動物中制備基因組DNA實驗
制備DNA ? ? ? ? ? ? 實驗材料 動物組織 試劑、試劑盒
哺乳動物中制備基因組DNA實驗
實驗材料 動物組織試劑、試劑盒 PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE儀器、耗材 離心機搖床研缽實驗步驟 1. ?切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結。?2. ?將200 mg~1 g 的組織用預冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。?3. ?
細菌中制備基因組DNA實驗
實驗方法原理?提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質，得到的DNA溶液經乙醇沉淀使DNA從溶液中析出。實驗材料?細菌試劑、試劑盒?TE氯化銫溴化乙錠NaCl乙醇CTAB儀器、耗材?離心機搖床實驗步驟 1
細菌中制備基因組DNA實驗
小量制備 氯化銫法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質，再用酚和氯仿
細菌中制備基因組DNA實驗——小量制備
真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。實驗方法原理提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液
細菌中制備基因組DNA實驗——氯化銫法
實驗方法原理提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質，得到的DNA溶液經乙醇沉淀使DNA從溶液中析出。實驗材料細菌試劑、試劑盒溴化乙錠氯化銫丁醇儀器、耗材離心機巴斯吸管搖床實驗步驟1. ?培養100 ml
植物組織制備基因組DNA實驗
氯化銫法 CTAB法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則
植物組織制備基因組DNA實驗
實驗方法原理?加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部， 從而達到提取的目的。實驗材料?植物組織試劑、試劑盒?抽提緩沖液十二烷基肌氨酸鈉TE異丙醇溴化乙錠氯化銫儀器、耗材?離心機實驗步驟 ? 收取1
植物組織制備基因組DNA實驗——CTAB法
實驗方法原理加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部， 從而達到提取的目的。實驗材料植物組織試劑、試劑盒CTAB液2-疏基乙醇TE高鹽TE氯仿異戊醇儀器、耗材研缽離心機培養箱實驗步驟1. ?在所需量
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
一次雙向消減，需要總量為 2ug 的基因組 DNA 或 cDNA。大多數分離 RNA 和基因組DNA 的方法都適用于本實驗（Sambrooketal.1989;ChomczynskiandSacchi1987;Farrell1993)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸放射性化合物酚儀器、耗材 熱循環儀水浴箱瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑與設備實驗步驟 第1階段：RNA和DNA的分離一次雙向消減，需要總量為2ug的基因組DNA或cDNA。大多數分離RNA和基因組DNA的方法都適用于本實驗（Sambrooketal
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑 酶和酶緩沖液 核酸和寡核苷酸 放射性化合物 酚 儀器、耗材
小鼠肝基因組DNA制備
原理DNA 以核蛋白形式存在于細胞核中，制備 DNA 的原則是既要將 DNA 與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及鏈霉蛋白酶 E 的應用使這兩個原則得到了保證。蛋白酶K 或鏈霉蛋白酶 E 均為廣譜蛋白酶，其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
小鼠肝基因組DNA制備
原理DNA 以核蛋白形式存在于細胞核中，制備 DNA 的原則是既要將 DNA 與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及鏈霉蛋白酶 E 的應用使這兩個原則得到了保證。蛋白酶K 或鏈霉蛋白酶 E 均為廣譜蛋白酶，其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
植物組織制備基因組DNA實驗——氯化銫法
利用基因組DNA較長的特性，可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。在提取過程中，染色體會發生機械斷裂，產生大小不同的片段，因此分離基因組DNA時應盡量在溫和的條件下操作，如盡量減少酚/氯仿抽提、混勻過程要輕緩， 以保證得到較長的DNA。實驗方法原理加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即
哺乳動物精核的制備實驗
實驗材料哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟1. 培養并收獲 3L 1×106?細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 20 倍于沉淀體積（40
哺乳動物精核的制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材 帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟 1. 培養并收獲 3L 1×106 細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 2
制備DNA測序模板實驗——小量裂解物中制備λ噬菌體DNA
實驗材料重組λ噬菌體試劑、試劑盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA異丙醇乙酸鈉TE儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1. ?在新鮮配制的λ頂層瓊脂糖和λ瓊脂糖平板上，通過在平板上裂解適于λ噬菌體生長的大腸桿菌菌株，制備重組λ噬菌體毒種原液。2. ?取700 μl 毒種液加入無菌的1.5
從總－RNA－中除去基因組－DNA－實驗
為了進行 FDD 基因表達的分析，以及使用任何其他基于 RNA 的基因表達技術，在反轉錄合成單鏈 cDNA 和后續的 PCR 操作之前，必須除掉污染的基因組 DNA。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒變性（甲醛)瓊脂糖凝膠瓊脂糖蒸餾水甲醛蒸餾水乙醇甲醛MOPS
從總－RNA－中除去基因組－DNA－實驗
從總 RNA 中除去基因組 DNA 實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 變性（甲醛)瓊脂糖凝膠 瓊脂糖 蒸餾
從總－RNA－中除去基因組－DNA－實驗
試劑、試劑盒?變性（甲醛)瓊脂糖凝膠瓊脂糖蒸餾水甲醛蒸餾水乙醇 甲醛MOPS 緩沖液乙二胺四乙酸MOPS乙酸鈉酚 氯仿（3:1) 溶液氯仿液體酚Tris-HCl電泳緩沖液儀器、耗材?離心機和轉頭離心管配膠板微波爐實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑變性（甲醛)瓊脂糖凝膠（配制過程見第 18步）
從鼠尾或其他小樣本中制備基因組DNA
實驗方法原理 這一簡單的實驗方案在成百上千的實驗室被廣泛應用于轉基因或基因剔除小鼠的基因型鑒定以及從小量培養的細胞或組織塊中提取 DNA。實驗材料 蛋白酶 K培養的細胞鼠尾或小鼠組織試劑、試劑盒 乙醇異丙醇酚氯仿異戊醇磷酸鹽緩沖溶液SNETTE儀器、耗材 Sorvall 離心機及 H1000B、SH
從鼠尾或其他小樣本中制備基因組DNA
這一簡單的實驗方案在成百上千的實驗室被廣泛應用于轉基因或基因剔除小鼠的基因型鑒定以及從小量培養的細胞或組織塊中提取 DNA。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這一簡單的實驗方案在成百上千的實驗室被廣泛應用于轉基因或基因剔除小鼠的基因型鑒定以及從小量培養的細胞或組織塊中提取
從鼠尾或其他小樣本中制備基因組DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一簡單的實驗方案在成百上千的實驗室被廣泛應用于轉基因或基因剔除小鼠的基因型鑒定以及從小量培養的細胞或組織塊中提取 DNA。 實驗材料 蛋白
動物細胞基因組DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了動物細胞基因組DNA的制備原理及操作流程。本方法一般可從5×107培養的非整倍體細胞（如HeLa細胞）中獲得大約200μg DNA。DNA的長度可達到100~150kb。20ml正常血的DNA產量約為250μg。實驗原理真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來制備基因組 ?
質粒DNA大量制備實驗
堿裂解法 平衡離心法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。
質粒DNA大量制備實驗
實驗方法原理?這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒?葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS異丙醇乙醇乙酸甲儀器、耗材?離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟?1.? 往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的L
純化DNA實驗_從哺乳動物細胞或組織分離DNA
基因純化，可以用于（1）對大量提取的質粒DNA進行純化；（2）常用的方法有柱層析法和氯化銫梯度離心法。實驗材料細胞試劑、試劑盒TBS抽提緩沖液儀器、耗材離心管實驗步驟1. 根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌
脈沖場凝膠電泳制備DNA（哺乳動物細胞和組織DNA的分離）
本方案敘述了從培養細胞和組織制備 DNA 樣品的方法。病人或動物來源的白細胞也能用作 PFGE 的高分子質量 DNA 樣品。如果確有必要，DNA 也可以從哺乳動物細胞分離出的胞核制備。經驗表明：從胞核制備 DNA 沒有優點，因為從完整細胞制備的 DNA 同樣易于酶切。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三