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制備DNA 實驗材料 動物組織 試劑、試劑盒 PBS 乙酸銨 乙醇 酚 氯仿 異戊醇 TE 儀器、耗材 離心機 搖床 研缽 實驗步驟 1. 切下組織并立即剪成小塊，置于......閱讀全文
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
幾十年來生物學上最重要的進展，也許是關于RNA分子能調節基因表達的發現。RNA干涉（RNAi）是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象，是在線蟲中發現的，在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。 此后，科學家們明白，RNAi還有其他形式，它既
實驗概要本實驗詳細介紹了顯微注射法建立轉基因小鼠模型的操作流程。實驗原理轉基因小鼠制備的基本原理是將改建后的目的基因(或基因組片段)用顯微注射法注入供體小鼠的受精卵(或著床前胚胎細胞)，然后將此受精卵(或著床前胚胎細胞)再植入受體動物的輸卵管(或子宮)中，使其發育成攜帶有外源基因的轉基因動物，通過分
時間總是過得很快，2016年馬上就要過去了，迎接我們的將是嶄新的2017年，2016年，我國有很多優秀科研機構的科學家們都做出了意義重大、影響深遠的研究成果，發表在國際頂級期刊上。本文中小編盤點了2016年我國科學家發表的一些重磅級研究，以饕讀者。 --結構生物學 -- 1.清華大學 施一
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
RNAi實驗原理與方法近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（
近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。一、RNA
2019年上半年很快就結束了，iNature盤點了中國學者在Cell，Nature及Science發表的成果，我們發現總共有86篇（截至2019年6月24日），具體介紹如下： 4-6月發表的文章 【1】2019年6月21日，西北工業大學王文，中科院昆明動物研究所/BGI 張國捷及丹麥哥本哈根
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
siRNA表達載體構建可應用于：（1）作為后基因組時代基因功能分析的有力工具；（2）基因組學、細胞信號傳導通路分析；（3）藥物靶點篩選、疾病治療。實驗方法原理多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RN
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺
經過特殊的算法，我們得到了2018年前10個月中國生物醫學風云榜人物及最火爆的3個重大學術界事件，能夠上榜的風云人物/事件，都曾長時間占據過100多個公生物醫學公眾號的頭版頭條。 在此，我們精選了其中的3個事件及16位風云榜人物。我們對其進行了劃分，分別是：6星級的3個事件，分別位諾貝爾獎，國
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
實驗概要 生物芯片這一名詞最早是在80年代初提出的，主要指分子電子器件。美國海軍實驗室研究員Carter 等試圖把有機功能分子或生物活性分子進行組裝，想構建微功能單元，實現信息的獲取、貯存、處理和傳輸等功能。用以研制仿生信
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
七、桿狀病毒表達載體的新一代昆蟲細胞宿主最早的鱗翅類昆蟲細胞的遺傳轉化技術出現在1990年（Jarvisetal.，1990)。那時，研發該技術的初衷在于構建一個穩定轉化的昆蟲細胞系，它旨在能夠持續生產目標重組蛋白而無需使用桿狀病毒進行感染。然而, 構建這個生產用細胞系所用的載體及方法也為構建具有新
轉錄后基因沉默，也稱為RNA干擾，是指雙鏈RNA分子阻斷或者降低同源基因的表達的現象。這種現象可能是作為一種抑制病毒感染和轉座子跳躍的細胞防御機制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratc
進化遺傳學具有兩個并列的研究方向：系統發育的重建和種群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白質序列和基因序列的比較可以象分子種一樣用于標志 現存物種分化的時間以來，各種生化方法被用于系統發育的研究。在最初二十年內， 同功酶的電泳分析、免疫學比較和蛋白質序列分析被廣泛地應
越來越多的研究人員開始采用小分子干擾RNA（small interfering RNAs，siRNAs)來抑制特定的哺乳動物基因表達。siRNA是一種短片斷雙鏈RNA分子，能夠以同源互補序列的mRNA為靶目標降解特定的mRNA，這個過程就是RNA干擾途徑（RNA interf
實驗概要本文介紹了RNA干擾的原理及基本實驗方法，包括了siRNA的設計、siRNA的制備和siRNA的轉染等方法，及RNA干擾實驗中的注意事項。實驗原理近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因
步驟包括:(一)siRNA的設計1. 在設計RNAi實驗時，可以先在以下網站進行目標序列的篩選：GenesilAmbion2. RNAi目標序列的選取原則：(1)從轉錄本（mRNA）的AUG起始密碼開始，尋找“AA”二連序列，并記下其3'端的19個堿基序列，作為潛在的siRNA靶位點。有研究
隨著大數據和全基因組測序的發展成熟和大量研究的廣泛開展，有時不免讓人覺得研究人員將他們的顯微鏡（microscope）更換為宏觀鏡（macroscope）。但是，《科學家》雜志舉辦的2018年十大創新競賽講述了一個不同的故事：單個細胞。在《科學家》雜志的獨立評審團評選出的2018年十大創新產品中，它
實驗概要進行RNAi實驗實驗原理通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RN
來自國家自然科學基金委員會的消息，國家自然科學基金委員會公布了2012年度面上項目、重點項目、重大國際(地區)合作研究項目、青年科學基金項目、地區科學基金項目、海外及港澳學者合作研究基金項目、科學儀器基礎研究專款項目等方面的評審結果。有關評審結果將通知相關依托單位，其科研管理人員可登錄
DNA甲基化修飾是表觀遺傳研究的熱點之一，我們通常認為DNA甲基化就是胞嘧啶甲基化（5-methylcytosine, 5mC），卻不知道隨著測序技術的快速發展，科研者們已經在真核生物中（果蠅 、真菌、萊茵衣藻、秀麗隱桿線蟲等）發現了一種新的DNA甲基化修飾—DNA-6mA甲基化，且DNA-
三、生物芯片技術研究應用點滴 人類基因組計劃推動了各種生物基因組測序工作的進展，越來越多的生物全基因組序列被測定并公布，可是這才是解讀“天書”的開始。掌握了基因組序列，卻不知道基因序列背后所隱藏的秘密——即基因組的功能，就不能真正理解“天書”更