消減雜交實驗
試劑、試劑盒 稀釋緩沖液雜交緩沖儲存液基三乙基溴化銨礦物油核酸和寡核苷酸儀器、耗材 熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑稀釋緩沖液（20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3，50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L EDTA)4X 雜交緩沖儲存液：4mol/L NaCl,200 mmol/L HEPES、pH8.3,4 mmol/L 十六烷基三乙基溴化銨（CTAB)。最終的 1X 雜交緩沖液，用稀釋緩沖液稀釋。礦物油2. 核酸和寡核苷酸連接 Ad1 的檢測者 1-1(方案 1 第 4 階段第 8 步）連接 Ad2R 的檢測者 1-2(方案 1 第 4 階段第 8 步）驅動 DNA(方案 1 第 3 階段第 5 步）Rsa I 消化的驅動 DNA(方案 1 第 3 階段第 5 步）3. 專用設備兩臺熱循環儀（見第 11 步和第 12 步）二、方法1. 第一次雜交（1）按照下面的順序，將每個檢測......閱讀全文
消減雜交實驗
試劑、試劑盒 稀釋緩沖液雜交緩沖儲存液基三乙基溴化銨礦物油核酸和寡核苷酸儀器、耗材 熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑稀釋緩沖液（20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3，50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L EDTA)4X 雜交緩沖儲存液：4mol/L NaC
消減雜交實驗
試劑、試劑盒稀釋緩沖液雜交緩沖儲存液基三乙基溴化銨礦物油核酸和寡核苷酸儀器、耗材熱循環儀實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑稀釋緩沖液（20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3，50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L EDTA)4X 雜交緩沖儲存液：4mol/L NaCl,2
消減雜交實驗
消減雜交實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 稀釋緩沖液 雜交緩沖儲存液 基三乙基溴化銨 礦
消減雜交的定義
利用不同組織、細胞或不同狀態下組織、細胞基因表達的差異性，并結合核酸雜交建立的克隆差異表達基因的技術。一般是將一種細胞的互補DNA(cDNA)或信使核糖核酸(mRNA)與第二種細胞cDNA或mRNA相互雜交，其不被雜交的部分就代表了兩種細胞基因表達的差異，可用于差異表達基因的克隆。差示篩選、消減探針
消減雜交的概念和意義
消減雜交(subtractive hybridization,扣除雜交) 是指利用不同組織、細胞或不同狀態下組織、細胞基因表達的差異性，并結合核酸雜交建立的克隆差異表達基因的技術。是差別雜交的改進，用過量的參照細胞的mRNA 或CDNA 與目的細胞的CDNA 或mRNA (目的序列) 雜交，形成的R
消減雜交的方法和應用介紹
中文名稱消減雜交英文名稱subtracting hybridization定 義利用不同組織、細胞或不同狀態下組織、細胞基因表達的差異性，并結合核酸雜交建立的克隆差異表達基因的技術。一般是將一種細胞的互補DNA(cDNA)或信使核糖核酸(mRNA)與第二種細胞cDNA或mRNA相互雜交，其不被雜交
抑制消減雜交的概念和意義
抑制消減雜交(suppression subtractive hybridization,SSH) 是建立在抑制PCR 與消運用雜交二級動力學原理，減雜交技術相結合的基礎上的更簡單快速的分離差異基因的方法。即豐度高的單鏈DNA 在退火時產生同源雜交的速度快于豐度低的單鏈DNA，使原來在豐度上有差別的
阻抑消減雜交的方法和應用介紹
中文名稱阻抑消減雜交英文名稱suppressive subtraction hybridization;SSH定 義將阻抑性聚合酶鏈反應與消減雜交相結合的實驗方法，能有效地擴增低豐度的差異基因表達序列。一般是將目標互補DNA(cDNA)5′端分別加上兩種人工接頭，用過量的驅動DNA進行兩次雜交，得
SSH抑制性消減雜交文庫構建方法介紹
SSH是一項可以快速獲取兩個不同生物材料中差異表達基因的分子生物學技術，是快速篩選差異表達基因的有效方法，也是尋找新基因的重要手段。該技術尤其適合以genome尚不完全清晰的物種或者以特殊材料為研究對象的科研工作者。是基因芯片技術的有效補充。基本流程:通過差減文庫構建，文庫驗證和篩選（逆向斑點雜交）
簡化抑制消減雜交(SSH)法尋找差異表達基因
? 無論是從一個胚胎細胞分化為不同的組織器官，或者是從正常的組織突變為腫瘤組織，都可能涉及在同一基因組背景下不同基因的差異性表達。尋找差異表達的基因就有可能揭示細胞分化的機制或者腫瘤的成因，因而也就成為一項熱門的技術。??? 尋找差異表達的基因有不少方法，抑制消減雜交（SSH）是比較有效的一種方法。
體細胞雜交的雜交實驗
不同種植物的原生質體可在人工誘導條件下融合，所產生的雜種細胞，即異核體經過培養可再生新壁，分裂形成愈傷組織，進而分化產生雜種植株。由于進行融合的原生質體來自體細胞，故該項技術也叫體細胞雜交。原生質體融合能使有性雜交不親合的植物種間進行廣泛的遺傳重組，因而在農業育種上具有巨大的潛力。在植物遺傳操作研究
雜交實驗的實驗目的
了解用聚乙二醇PEG方法誘異同種植物原生質體融合的技術，并能根據新本原生質體的形態樗來鑒別雜種細胞。
雜交實驗的實驗原理
不同種植物的原生質體可在人工誘導條件下融合，所產生的雜種細胞，即異核體經過培養可再生新壁，分裂形成愈傷組織，進而分化產生雜種植株。由于進行融合的原生質體來自體細胞，故該項技術也叫體細胞雜交。原生質體融合能使有性雜交不親合的植物種間進行廣泛的遺傳重組，因而在農業育種上具有巨大的潛力。在植物遺傳操作研究
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸放射性化合物酚儀器、耗材 熱循環儀水浴箱瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑與設備實驗步驟 第1階段：RNA和DNA的分離一次雙向消減，需要總量為2ug的基因組DNA或cDNA。大多數分離RNA和基因組DNA的方法都適用于本實驗（Sambrooketal
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
一次雙向消減，需要總量為 2ug 的基因組 DNA 或 cDNA。大多數分離 RNA 和基因組DNA 的方法都適用于本實驗（Sambrooketal.1989;ChomczynskiandSacchi1987;Farrell1993)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑 酶和酶緩沖液 核酸和寡核苷酸 放射性化合物 酚 儀器、耗材
Southern雜交實驗1
[實驗原理] Southern 雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。
酵母雙雜交實驗
實驗概要本實驗構建了Bait載體和prey載體，酵母雙雜交后，應用CPRG法定量測試了蛋白質相互作用。實驗步驟1. Bait載體的構建將高保真PCR擴增的OsCCTlb(引物為OsCCT1bEcoRI5'和OsCCTlbXhoI3')和OsCNTlb(引物為OsCNTlb ? Eco
Southern雜交實驗2
③轉移按凝膠的大小剪裁NC膜或尼龍膜并剪去一角作為標記，水浸濕后，浸入轉移液中5min。剪一張比膜稍寬的長條Whatman 3mm濾紙作為鹽橋，再按凝膠的尺寸剪3-5張濾紙和大量的紙巾備用。按下圖所示進行轉移。（轉移過程一般需要8-24hr，每隔數hr換掉已經濕掉的紙巾。轉移液用20×SSC。注
RNA點雜交實驗
實驗概要了解RNA點雜交實驗，包括純化的RNA的點雜交和狹線雜交，RNA斑點印跡。實驗步驟純化的RNA的點雜交和狹線雜交：1. 安裝印跡裝置?? 1) 切一張合適大小的帶正電荷尼龍膜。用鉛筆標上表示方向的記號。用水把膜簡單弄濕，在20×SSC中室溫泡1 h。?? 2) 在膜浸泡期間，先用0.1 mo
雜交實驗的實驗材料儀器
1．實驗材料：煙草或其它植物無菌苗的葉片。胡蘿卜肉質根誘導的松軟愈傷組織或懸浮培養細胞。2．試劑2.1酶液及洗滌液，同植物原生質體的分離和培養實驗。2.2PEG溶液2.3高pH高鈣稀釋液2.4DPD培養基同植物原生質體的分離和培養實驗。
雜交實驗的實驗結果分析
1．在倒置顯微鏡下觀察異源融合。在培養3天以內，可根據雙新原生質體的形態特征來鑒別異核體。因為來自葉肉組織的原生質體具有明顯綠色葉綠粒，而來自培養細胞的原生質體無色，但具濃密原生質絲，并可看到顯示的核區。2．統計異源融合的頻率
雜交實驗的實驗方法
所有操作均在超凈工作臺上進行。1．原生質體的分離和收集。2．將收集的兩種不同材料的原生質體分別懸浮在0.16mol/L的CaCl2·2H2O（pH5.8~6.2）原生質體密度調整為2×105/ml左右（用血細胞計數板統計原生質體密度）。3．將兩種原生質體懸液等量混合。4．用刻度吸管將混合的原生質體懸
COD消減量是什么
???? 有機污染物排放量一般以COD計算，就是說COD消減量可以理解成有機污染物消減量。消減量一般是以噸記，指的是處理后減少的量，減排后減少的量。比如某工廠年排放有機污染物（COD），1000萬噸，經采用先進技術后排量減少至600萬噸，那么這一年消減量就是400萬噸，若第二年繼續技術革新，排量減少
原位雜交儀—原位雜交實驗（二）
原位雜交第二天 1. 1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復使用十次左右）。 2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。 3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。 4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
分子雜交技術斑點雜交的實驗簡介
斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然后與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由于
原位雜交儀—原位雜交實驗（三）
原位雜交第三天 1） 用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，最后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。 2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置
原位雜交實驗步驟
原位雜交實驗步驟一質粒制備1質粒的轉化和擴增1.1制備XL1-Blue感受態細菌1．??取400uL?XL1-Blue菌種加入到含200ml?LB培養基的錐形瓶中，37?℃、100??rpm培養4h，離心，倒置，以冰冷的0.1?mol／L?CaCl_2重懸細菌，冰浴30?min，??離心，棄上清，倒
熒光原位雜交實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以探針直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上
雜交探針的檢測實驗
實驗步驟 1. ?暗室中，以42~45℃水浴，溫育盛有4盎司（113.3 g）Kodak NTB-2放射自顯影膠乳瓶30 min。同時，在500 ml 三角瓶中預熱等體積的水至相同溫度。 2. ?膠乳熔化后，緩慢沿三角瓶壁（以一角度）倒入瓶中
