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實驗方法原理 IPG IEF 膠用 Immobilines制備。 lmmobilines 是擁有 結構的8 種丙烯酰胺衍生物系列，其中 R 包含羧基或叔氨基團，它們構成了分布在 pH3-10 不同值的緩沖體系。根據公布的配方估算后，將適宜的 IPG 試劑添加至混合物中用于凝膠聚合，在聚合中，緩沖基團通過乙烯鍵共價聚合至聚丙烯酰胺骨架中，形成 pH 梯度。通過這種方式生成的 IPG, 不會發生電滲透作用，因而可以進行特別穩定的 IEF 分離，達到真正的平衡狀態。實驗材料 蛋白樣品實驗步驟 將所需 pH 范圍的 IPG 平板膠在 GelBond PAGfilm (圖3. lb) 上聚合，之后，凝膠用去離子水全面沖洗 (6X 10min), 浸人在 2% (m/V) 甘油中 (30min), 常溫下在潔凈櫥中干燥，然后用塑料膜覆蓋，如果凝膠不立即使用，可在-20℃ 貯存一年。用前，用切紙機從 IPG 平板膠......閱讀全文
對于復雜混合物，如全細胞裂解物或富集的亞細胞組分，通過兩步正交的分離 (orthogonalseperation)，二維凝膠 (2D 膠）電泳可以很好地分離成幾百個至上千個單個蛋白質。第一次分離基于電荷，即使用變性等電聚焦電泳; 第二次分離基于表觀分子質量，即使用變性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗 試劑、試劑盒 樣品緩沖液
試劑、試劑盒 樣品緩沖液羥乙基二硫化物細胞裂解緩沖液SDS-PAGE 現成溶液二硫蘇糖醇碘乙酰胺儀器、耗材 等電聚焦電泳系統二維SDS-PAGE 多凝膠系統恒溫循環器IPG 干膠條溶脹盤上樣杯旋轉搖動混合器實驗步驟 一、等電聚焦的基本原理等電聚焦 (IEF) 是一種能根據分子內的質子接受點的 p
試劑、試劑盒尿素裂解溶液 &nbs
試劑、試劑盒尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材等電聚焦儀IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG ( IPG
實驗概要蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心. 雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1000個E.coli蛋白，并表明蛋白質譜不是穩定的，而是隨環境而變化. 雙向電泳原理簡明，第一向進行等電聚焦，蛋白質沿pH梯度分離，至各自的等電點；隨后，再
方案5 第一向：蛋白質的等電聚焦電泳實驗實驗方法原理這里所描述的分離蛋白質的兩種方法都是基于蛋白質所帶凈電荷的多少，使用固相化的 pH 梯度凝膠進行的 IEF 技術。這些方法作為雙向凝膠分離的第一向，除了利用傳統的水平電泳儀進行 IPG 凝膠的等電聚焦外（方案 5 方法 A)，還能在自帶的電泳槽里使
再水化上樣是二維凝膠電泳樣品導入的最簡便方法，這一方法使得樣品緩沖液中的蛋白質樣品在 IPG 膠條吸收樣品溶液時被動導入，且蛋白質可以在整個 pH 梯度中均勻分布。在一些商品化的等電聚焦儀器中，IPG 膠條的再水化和聚焦可以用相同設備儀器完成，無需人工操作。這種儀器也可以進行所謂的主動再水化
六、SDS-PAGE1.SDS及SDS-PAGE（1）SDS：十二烷基硫酸鈉（sodium decyl sulfate，SDS），一種陰離子去污劑，它能以一定的比例和蛋白質結合，形成一種SDS—protein的復合物。（2）SDS- PAGE：具有SDS的PAGE，分離SDS—protein復合物，
大規模基因組測序計劃的實施已改變生命科學的重心，在相當短的時期內，一些原核生物和某些低等真核生物的基因組序列已被測定. 1995年，流感嗜血桿菌基因組序列首次被破譯，在此后不到兩年的時間，近50個細菌的基因組序列已被完成. 然而，這僅僅是理解有機物功能的一個起點. 在基因組時代，許多DNA序列信息僅
大規模基因組測序計劃的實施已改變生命科學的重心，在相當短的時期內，一些原核生物和某些低等真核生物的基因組序列已被測定. 1995年，流感嗜血桿菌基因組序列首次被破譯，在此后不到兩年的時間，近50個細菌的基因組序列已被完成. 然而，這僅僅是理解有機物功能的一個起點. 在基因組時代，許多DNA序列信
由于合成載體兩性電解質（synthetic carrier ampholyte SCA）是通過復雜的合成過程得到的，其重復性很難控制，由此不同批次之間會存在很大的變化，同一蛋白質在不同批 圖-1. 等電聚焦的“聚焦效應” 次等電聚焦中所出現的位置有所偏差，這樣作為雙向電泳中的一向時就限
試劑、試劑盒 尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材 等電聚焦儀 IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟 3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IE
摘要雙向電泳（Two-dimensional（2D） gel electrophoresis）是一項基于蛋白的兩種不同特性：電荷和質量來分離蛋白的技術。首先基于蛋白固有電荷，通過等電聚焦（isoelectric focusing IEF）進行第一向蛋白分離，然后根據蛋白的質量，在第二向中通過SDS-
大規模基因組測序計劃的實施已改變生命科學的重心，在相當短的時期內，一些原核生物和某些低等真核生物的基因組序列已被測定. 1995年，流感嗜血桿菌基因組序列首次被破譯，在此后不到兩年的時間，近50個細菌的基因組序列已被完成. 然而，這僅僅是理解有機物功能的一個起點. 在基因組時
隨著蛋白質組學概念的提出，雙向電泳(2D gel electrophoresis)一度曾變得很流行。近幾年，因質譜技術的快速發展，LC-MS的熱度似乎更高。然而，在某些應用上，雙向電泳更有優勢。 雙向電泳提供了整個樣品的鳥瞰圖，而這是質譜無法比擬的。它可以對樣品中復雜的蛋白質進行整體性
實驗材料膠條實驗步驟對一新樣品，常最先使用寬范圍、線性PH3.5-10梯度 但對大多數樣品，這樣做會喪失 pH4-7 區域的分辦率，許多蛋白質的 pI 值在該區域。利用非線性 pH3.5-10 IPG IEF 膠在一定程度緩解這個問題。 PH3.5-10 非線性膠條在 pH4-7 區域的梯度要比 p
人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質的表達規律和
許華林 張曼人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質
人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于 2001 年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執行生命活動的全部蛋白質的
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很長一段時間內作為各種生化分析中分辨完整蛋白質的備選方法。這主要是因為對于疏水性很強的蛋白質,SDS 是最好的增溶去污劑，所有的蛋白質，包括堿性很強的蛋白質，都向同一方向移動, 分離取決于各自的表觀分子質量 (通常稱為分
用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增殖污染物進行風險評估實驗實驗步驟 一、材料1.動物一 年 中 的 問 一 時 間 在 不 同 米 樣 點 潮 落 時 采 集 貽 貝 Lmk，35?45 mm 長）或者是貝殼長度為 5 cm 的 紫 貽 貝 edwfe)。其中一個采樣點是有記錄的清潔區域，
實驗步驟一、材料1.動物一 年 中 的 問 一 時 間 在 不 同 米 樣 點 潮 落 時 采 集 貽 貝 Lmk，35?45 mm 長）或者是貝殼長度為 5 cm 的 紫 貽 貝 edwfe)。其中一個采樣點是有記錄的清潔區域，在這里采集到的動物作為對照。2. 富含過氧化物酶體組分的分離在分離過程
用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增殖污染物進行風險評估實驗 實驗步驟
2. 在平板儀器上進行 IPG-IEF ( Multiphor ll Unit)滿足下列條件時，水化后的 IPG 膠條可以直接放在 IEF 儀器的冷卻板上：① 如果運行時間不超過 12 h ( 經常發生在寬的或中等 pH 范 圍 IPG，如 IPG 3~10 或 4~7 ) 。② 如果 pH 梯
試劑、試劑盒尿素去污劑還原劑載體兩性電解質儀器、耗材IPG 凝膠實驗步驟一、第一向1. 固相 pH 梯度凝膠或凝膠條的準備固相 pH 梯度凝膠的灌注及聚合方法請參閱 固相 pH 梯度等電聚焦 有關章節，如需要可切成 3~5 mm 寬的膠條在 -20℃ 保存一年。為避免繁瑣和復雜的灌膠和切膠條程序和保
電泳法，是指帶電荷的供試品（蛋白質、核苷酸等）在惰性支持介質（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。 電泳技術的
實驗材料ESI-MSMALDI - MS試劑、試劑盒提取緩沖液儀器、耗材SDS- 聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗步驟眾所周知，在實驗室內和實驗室間難以保證雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳的重復性。在我們實驗室，強制性地要求嚴格遵守標準操作程序（sop ) , 以確保不同的操作者可以獲得可重復的分離結果。小麥白面粉樣品
實驗材料ESI-MSMALDI - MS試劑、試劑盒提取緩沖液儀器、耗材SDS- 聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗步驟眾所周知，在實驗室內和實驗室間難以保證雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳的重復性。在我們實驗室，強制性地要求嚴格遵守標準操作程序（sop ) , 以確保不同的操作者可以獲得可重復的分離結果。小麥白面粉樣品
實驗材料：ESI-MS