膜蛋白的純化實驗（一）
一、膜的制備從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能高表達目的膜蛋白的組織或細胞系就很重要。最近，人們對于將細胞表面蛋白質作為鑒定不同細胞系或干細胞的標示物的研究興趣逐漸增加。而作為其影響之一, 如何從有限數量細胞中獲取足量的細胞膜 ，并能較好富集質膜標示物的酶活性，已經成為膜分離領域新的關注點。制備細胞膜成分需要打碎組織或細胞，最 常 用 的 方 法 是 用 杜 恩 斯 勻 漿 器（Douncehomogenizer)將組織或細胞在等滲的蔗糖緩沖液中(0.25m d /L ，p H 7?8)勻菜。膜蛋白整合在細胞膜內時相對比較穩定。而細胞破碎時可能會釋放蛋白酶，因此蛋白質水解導致的失活是膜純化過程中最需要考慮的問題。商業上有方便的片劑形式提供的蛋白......閱讀全文
膜蛋白的純化實驗
實驗步驟一、膜的制備從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能高表達目的膜蛋白的組織或細胞系就很重要。最近，人們對于將細胞表面蛋白質作為鑒定不同
膜蛋白的純化實驗
實驗步驟 一、膜的制備 從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。 大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能
膜蛋白的純化實驗（二）
三、膜蛋白的純化一 旦 使 用 了 合 適 的 去 污 劑 將 膜 蛋 白 從 細 胞 膜 中 増 溶 出 來 ，就 可 以 分 離 目 標 蛋 白 質 了 。傳 統 色 譜 層 析 技 術 ，如 凝 膠 過 濾 、親 和 、離 子 交 換 和 層 析 聚 焦 （chromatofocusi
膜蛋白的純化實驗（一）
一、膜的制備從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能高表達目的膜蛋白的組織或細胞系就很重要。最近，人們對于將細胞表面蛋白質作為鑒定不同
凝膠純化實驗
試劑、試劑盒蒸餾水乙醇甲酰胺膠的緩沖液亞甲基藍十二烷基硫酸鈉儲存液TAE 緩沖液Tris 乙酸鹽乙酸納EDTA藍色葡聚糖TEN 緩沖液40mer聚丙烯酰胺膠儀器、耗材解剖刀UV 燈過濾 UV 的安全破璃實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水乙醇，95%甲酰胺 (使用安珀萊特單床離子交換樹脂
DNA純化實驗
實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA，又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性，所以被分離開來。實驗材料?PCR產物試劑、試劑盒?PCR清潔試劑盒儀器、耗材?96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板實驗
凝膠純化實驗
試劑、試劑盒 蒸餾水乙醇甲酰胺膠的緩沖液亞甲基藍十二烷基硫酸鈉儲存液TAE 緩沖液Tris 乙酸鹽乙酸納EDTA藍色葡聚糖TEN 緩沖液40mer聚丙烯酰胺膠儀器、耗材 解剖刀UV 燈過濾 UV 的安全破璃實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水乙醇，95%甲酰胺 (使用安珀萊特單床離子交換
免疫純化實驗
實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區， 所以結合抗原的部位獲得充分暴露，從易于接近。免疫親和柱制備完成后，抗原溶液即可以上樣，接著洗去污染物，然后洗脫抗
純化DNA實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 TBS抽提緩沖液儀器、耗材 離心管實驗步驟 1. 根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌 2 次，用刮棒把細胞刮入約 0.5 ml 的 TBS 中，將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中，
免疫純化實驗
在蛋白質純化方法中抗體親和純化是非常有效的方法之一。僅此一步常可獲得 1000～10 000 倍的純化。如果抗體與目的蛋白的結合的特異性得到證明，并且洗脫的目的蛋白沒有受到不可逆的損傷，那么可以認為免疫純化是極好的蛋白質純化方法，特別是用在純化過程的最后步驟。實驗方法原理制備免疫親和柱要求抗體首先共
DNA純化實驗
PCR清潔試劑盒純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA，又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油
凝膠純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 蒸餾水 乙醇 甲酰胺 膠的緩沖液 亞甲基藍 十二烷基硫酸鈉儲存液 TAE 緩沖液 Tris
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒（堿裂解法） ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
免疫純化實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區， 所以結合抗原的部位獲得充分暴露，從易于接近。免疫親和柱
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒（堿裂解法） ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
純化RNA實驗
從培養的細胞中純化總RNA 從組織中純化總RNA ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
純化DNA實驗_純化質粒（堿裂解法）
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀儀器、耗材離心管實驗步驟1. 單個大腸桿菌克隆接種到 2 ml 含適當抗生素的 LB 中。37℃ 劇烈振蕩孵育 5~8 小時。或者可以培養過夜使飽和。2. 倒 1.5 ml 培養液到已作標記的微量離心管中。把剩下的培養液存放在 4℃。3. 在微量離心
痘苗病毒純化實驗
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度離心的方法純化。純化的病毒可用于制備痘苗病毒 DNA ，用于不允許存在感染細胞蛋白污染的研究中，同時也可以用作高滴度的病毒儲液。對于大規模的純化（至少 1 L 的培養物），最好的方法是用 HeLa 細胞懸液作為感染的對象，而不要用單層培養的細胞。內容來源于《精編分子生物學
抗體的純化實驗
實驗方法原理 利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從金黃色化膿性葡萄球菌和 G 組鏈球菌分離純化。它們能特異結合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它們對不同的免疫球蛋白有不同的親和力，所以應根據免疫球蛋白
PCR－產物純化實驗
介紹一個采用 AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法純化 PCR 產物。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟
IgG抗體純化實驗
雖然親和層析法是進行特異性抗體純化的首選，然而有時這種純化方式卻非必需，或者無法實施進行。在大多數錆況下，運鐵蛋白可發生共沉淀或共純化，能用凝膠濾過層析去除之。實驗材料抗體試劑、試劑盒SAS儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.
痘苗病毒純化實驗
實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞或 BHK-21 細胞代替 HeLa 細胞。實驗材料 痘苗病毒儲液HeLa S3 細胞（懸浮培養）試劑、試劑盒 胰酶Tris ? Cl蔗糖儀器、耗材 旋轉
PCR－產物純化實驗
試劑、試劑盒 TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材 離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去離子水2. 核酸和寡核苷酸待測序的 PCR 產物3. 離心機和轉子帶有固定傾角轉子的小型
IgG抗體純化實驗
實驗材料 抗體試劑、試劑盒 SAS儀器、耗材 透析膜離心機實驗步驟 1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不間斷地攪拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 離心20 min。?2. ?用預冷的33% SAS溶液在漩渦混合
抗體的純化實驗
實驗方法原理利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從金黃色化膿性葡萄球菌和 G 組鏈球菌分離純化。它們能特異結合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它們對不同的免疫球蛋白有不同的親和力，所以應根據免疫球蛋白的種類和類
痘苗病毒純化實驗
大規模純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞
PCR－產物純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 或去離子水 PCR 產物 儀器、耗材 離心機和轉子 PCR 濾 件
抗體的純化實驗
抗體的純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織，直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均勻，冰浴 15 分鐘
純化測序反應產物實驗
電泳之前純化測序反應產物以去除多余的、尚未結合的染料終止子是非常必要的。離心柱可以是快速、有效地去除未結合的染料終止子。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒甲酰胺核酸寡核苷酸儀器、耗材ABI PRISM 3100Genetic Analyzer微量離心管DTR