痘苗病毒純化實驗
大規模純化 實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞或 BHK-21 細胞代替 HeLa 細胞。 實驗材料 痘苗病毒儲液 HeLa S3 細胞（懸浮培養） 試劑、試劑盒 胰酶 Tris ? Cl 蔗糖 儀器、耗材 ......閱讀全文
痘苗病毒純化實驗
實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞或 BHK-21 細胞代替 HeLa 細胞。實驗材料 痘苗病毒儲液HeLa S3 細胞（懸浮培養）試劑、試劑盒 胰酶Tris ? Cl蔗糖儀器、耗材 旋轉
痘苗病毒純化實驗
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度離心的方法純化。純化的病毒可用于制備痘苗病毒 DNA ，用于不允許存在感染細胞蛋白污染的研究中，同時也可以用作高滴度的病毒儲液。對于大規模的純化（至少 1 L 的培養物），最好的方法是用 HeLa 細胞懸液作為感染的對象，而不要用單層培養的細胞。內容來源于《精編分子生物學
痘苗病毒純化實驗
大規模純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞
痘苗病毒儲液制備
實驗材料懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細胞計數。2. 將 5×
痘苗病毒DNA提取實驗
如果提取的痘苗病毒DNA用于轉染，則應在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分離。具體方法見本實驗。實驗材料純化的痘苗病毒試劑、試劑盒Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材分光光度計Sorval
痘苗病毒DNA提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒試劑、試劑盒 Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材 分光光度計Sorvall 離心機實驗步驟 1. 在 260 nm 處確定純化的疸苗病毒的光密
痘苗病毒儲液制備
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材 Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟 1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細
痘苗病毒儲液制備
基本方案 噬斑分析測定滴度 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3
痘苗病毒DNA提取實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒
痘苗病毒系統基因表達實驗
實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質粒載體開始，然后用重組質粒通過脂質體介導轉染已經被vTF7-3（可以持續表達T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的細胞。收獲后，基因產物在細胞內的表達可以用脈沖標記的方法或用「重組痘苗病毒及其產物的鑒定實驗」中敘述的方法分
痘苗病毒系統基因表達實驗
重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染 兩種重組痘苗病毒共感染細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質
痘苗病毒系統基因表達實驗（二）
實驗方法原理含有 pT7 控制的外源基因（本實驗「重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染」）的重組質粒，通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞，在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA 聚合酶轉錄，并在感染細胞的細胞質完成
痘苗病毒系統基因表達實驗（一）
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體 T7 RNA 聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶啟動子（PT7）的控制下。應用脂質體轉染，重組質粒進入感染了 vTF7-3 的細胞質中，而 vTF7-3 是一種能編碼噬菌體T7 RNA聚合酶的重組痘苗病
痘苗病毒儲液制備——噬斑分析測定滴度
實驗方法原理經胰酶作用的系列稀釋病毒儲液常被用于感染適當的細胞系。經過幾天的培養后，吸出培養基，將細胞用結晶紫染色。由于感染細胞變縮、變圓和脫落，形成直徑 1～2 mm 顏色較淡的噬斑。實驗材料生長良好的貼壁培養的單層 BSC-1 細胞病毒儲液試劑、試劑盒0.1% 結晶紫（溶于 20% 乙醇）儀器、
病毒純化和蛋白純化區別
病毒純化和蛋白質純化都是生物制劑工程中常見的分離純化方法，但它們的對象不同，具體區別如下：1. 病毒純化與蛋白質純化對象不同。病毒純化的目標是將病毒從其它生物物質中進行分離和去除，以獲得單個且純凈的病毒顆粒，如用于疫苗生產的病毒載體，而蛋白質純化的目標是從生物體或來源中提取和純化單一或多種蛋白質，如
痘苗DNA檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒 PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU 培養基篩選試劑4
痘苗DNA檢測實驗
PCR 法 斑點雜交法 Southern 雜交法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗（一）
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體T7 RNA聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于T7 RNA聚合酶啟動子（PT7）的控制下。在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA聚合酶轉錄。這種轉染方案適用于分析的目的，因為不需要構建新的重組病毒，所以比較簡單。對于大規
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗
兩種重組痘苗病毒共感染細胞 單病毒感染OST7-1細胞 利用VOTE系統 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 含有 pT7 控制的外源基因（「痘苗病毒系統基
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗
實驗方法原理 含有 pT7 控制的外源基因（「痘苗病毒系統基因表達實驗」中「重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染」）的重組質粒，通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞，在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA
吸附法純化病毒實驗
實驗方法原理 實驗材料 待純化的病毒試劑、試劑盒 凝膠材料儀器、耗材 燒杯實驗步驟 磷酸鈣凝膠：這是病毒凝膠吸附法中較為常用的凝膠，由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制備凝膠狀沉淀物，用 0. 001mol/L 磷酸鹽緩沖液懸浮，置千 4℃ 4~5
痘苗載體轉染細胞實驗
實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料 pSCll／pRB21／pSC65／pLW
痘苗載體轉染細胞實驗
CaCl2 法 DOTAP 法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質
病毒的大規模純化技術
實驗概要現代病毒研究往往需要大量的純病毒粒子，以便于化學研究或制備抗體。本文簡明地描述了一下脊髓灰質炎病毒（Polio virus）的純化步驟。它是一種已被廣泛研究的危害人體健康的病毒。實驗步驟1. 在大型裝置中培養病毒。為獲得足夠的用于化學研究的病毒，必須制備大量病毒。每種病毒的培養都有不同的
慢病毒怎么純化和濃縮
慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸
慢病毒的濃縮與純化
方法一 超速離心沉淀法1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘。2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一
慢病毒的濃縮與純化
實驗概要本文介紹了慢病毒濃縮與純化的兩種方法：超速離心沉淀法，PEG-8000濃縮法。實驗材料慢病毒上清液實驗步驟超速離心沉淀法： 1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘； 2. 每個Ultra-clear SW28離心管中
痘苗DNA檢測實驗——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗（三）
實驗方法原理VOTE是最近發展的痘苗病毒/T7 RNA聚合酶混合表達系統，將外源基因克隆到質粒 pVOTE. 1或 pVOTE. 2 中，通過同源重組將其整合到痘苗病毒 vT7lacOI 基因組中，制備重組病毒儲液。在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）存在的條件下，用重組病毒感染細胞，外源基因
痘苗載體轉染細胞實驗——CaCl2－法
實驗方法原理將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9