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實驗材料 單細胞懸液試劑、試劑盒 PY 試劑醋酸緩沖液磷酸緩沖液DNA 酶消化液實驗步驟 一、試劑配制1. PY 試劑的配制：PY 1.0 g 以 100 ml 蒸餾水溶解，配成母液，置 4℃ 冰箱保存。PY 工作液：取 1 ml PY 母液，加入 1 mol/L pH 4.7 的醋酸緩沖液 100 ml，稀釋為 0.01% 的濃度。2. 1.0 mol/L pH 4.7 醋酸緩沖液的配制：冰醋酸 11.55 ml 加蒸餾水至 1000 ml；無水醋酸鈉 16.4 g 加蒸餾水至 1000 ml；分別取上述兩種液體 255 ml 和 245 mI，再加入 200 ml 蒸餾水即成。3. 配制 pH 7.2 的磷酸緩沖液。4. DNA 酶消化液的制備：DNA 酶 0.05 mg/ml，0.25 mol/L 枸櫞酸，2.5 mol/L TrisHCl，調 pH 為 6.0。二、染色程序1. 制備單細胞懸液，濃度為 1x106/ml。......閱讀全文
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數，具有速度快、精度高、準確性好的優點，是當代最先進的細胞定量分析技術之一。光源、液流通路、信號檢測傳輸和數據的分析系統是流式細胞儀的主要組成
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
流式細胞術(Flow cytometry，簡稱FCM)是20世紀70年代發展起來的一種對細胞的物理性質及化學性質，如細胞大小、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等進行快速測定并可分類收集的技術。該技術超越了傳統顯微分析技術，能在瞬間對大量細胞進行準確的分析。這種快速有效的細胞分析技術已廣泛應用于
流式細胞儀技術，主要是測量群體中單個細胞經適當染色后其成分所發出的散射光和熒光，經染色的細胞在懸液中以單行流過高強度光源的焦點，當每個細胞經過焦點時，發出一束散射光/或熒光。它們經過過濾及光鏡系統收集到達一個光電檢測器(光電倍增管或一個固態裝置)，光檢測器把散射光定量轉化成電信號，經數字轉換器進行數
流式細胞儀技術，主要是測量群體中單個細胞經適當染色后其成分所發出的散射光和熒光，經染色的細胞在懸液中以單行流過高強度光源的焦點，當每個細胞經過焦點時，發出一束散射光/或熒光。它們經過過濾及光鏡系統收集到達一個光電檢測器(光電倍增管或一個固態裝置)，光檢測器把散射光定量轉化成電信號，經數字轉換器進行數
3.流式細胞術在高等植物中的應用3．1應用于植物中的特殊性由于植物細胞與動物細胞在結構上的差異，例如植物細胞具有細胞壁、特殊細胞器以及中央液泡等，因此流式細胞術應用于植物細胞時，在樣品制備、染色、儀器的改造等方面都應適應植物細胞的上述特點。3．1．1制備植物染色體懸液的材料1984年De Laat和
1．RNA的提取 RNA的提取其實原理很簡單：通過變性劑破碎細胞或者組織，然后經過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經過沉淀，洗滌，晾干，zui后溶解。但是由于RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。 1．1分離高質量RNA 成功的cDNA合成來
RNA酶處理、基于DNA含量做標準曲線的CyQUANT實驗法細胞增殖同樣可以用DNA含量來評價并作出標準曲線。根據細胞曲線可計算出DNA含量，細胞裂解液經過RNA酶處理就排除了RNA對結果的干擾。在本應用說明中，列出了用DNA含量做標準曲線來定量細胞樣品的設置步驟。準備試劑步驟1：制備1X細胞裂解液
真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋白的區段是被這些內元隔開的，這些編碼區叫做外元（exon）。真核生物的DNA轉錄成為RNA之后，經過剪切和拼接，去掉這些非編碼區，才形成成熟
待檢測樣品制備生物樣品往往是非常復雜的生物分子混合體，除少數特殊樣品外，一般不能直接與芯片反應，必須將樣品進行生物處理。從血液或活組織中獲取的DNA/mRNA樣品在標記成為探針以前必須擴增以提高閱讀靈敏度，但這一過程操作起來卻有一定的難度。比如在一個癌細胞中有成千上萬個正常基因的干擾，雜合癌基因的檢
PCR的用途及使用方法真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋白的區段是被這些內元隔開的，這些編碼區叫做外元（exon）。真核生物的DNA轉錄成為RNA之后，經過剪切和拼接，去掉
PCR儀的用途及使用方法真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋白的區段是被這些內元隔開的，這些編碼區叫做外元（exon）。真核生物的DNA轉錄成為RNA之后，經過剪切和拼接，去掉這些非編碼
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變
（一）一般光學顯微鏡術應用一般光學顯微鏡（簡稱光鏡）觀察組織切片是組織學研究的最基本方法。取動物或人體的新鮮組織塊，先用固定劑（fixative）固定（fixation），使組織中的蛋白質迅速凝固，防止細胞自溶和組織腐敗。常用的固定劑如灑精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化鋨等，一般常將幾種固定劑配制成混
一、流式細胞儀的檢測范圍1．流式細胞儀可以檢測細胞結構，包括：細胞大小、細胞粒度、細胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細胞周期、RNA 含量、蛋白質含量。2．流式細胞儀可以檢測細胞功能，包括：細胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原、細胞活性、細胞內細胞因子、酶活性、激素結合位點和細胞受體。二、流式細胞儀
一、流式細胞儀的檢測范圍1、流式細胞儀可以檢測細胞結構，包括：細胞大小、細胞粒度、細胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細胞周期、RNA 含量、蛋白質含量。2、流式細胞儀可以檢測細胞功能，包括：細胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原、細胞活性、細胞內細胞因子、酶活性、激素結合位點和細胞受體。二、流式細胞儀
一、流式細胞儀 的檢測范圍1、流式細胞儀 可以檢測細胞結構，包括：細胞大小、細胞粒度、細胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細胞周期、RNA 含量、蛋白質含量。2、流式細胞儀可以檢測細胞功能，包括：細胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原 、細胞活性、細胞內細胞因子、酶活性、激
分子生物學主要致力于對細胞中不同系統之間相互作用的理解，包括DNA，RNA和蛋白質生物合成之間的關系以及了解它們之間的相互作用是如何被調控的。而流式細胞儀是測量液相中懸浮細胞或微粒的一種現代分析技術。與傳統的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優點。技術簡介流式細胞術（Flow Cytom
一. 流式細胞術概述 流式細胞術（Flow Cytometry, FCM）是七十年代發展起來的高科學技術,它集計算機技術、激光技術、流體力學、細胞化學、細胞免疫學于一體, 同時具有分析和分選細胞功能。它不僅可測量細胞大小、內部顆粒的性狀,還可檢測細胞表面和細胞漿抗原、細胞內DNA、RN
流式細胞術(FCM)是70年代初發展起來的一項高新技術，80年代開始從基礎研究發展到臨床醫學研究及疾病的診斷和治療監測。我國在80年代初引進了第一臺流式細胞儀，到目前在醫學院校、科研機構和醫院已經有100多臺。 FCM采用流式細胞儀對細胞懸液進行快速分析，通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐
流式細胞術(FCM)是70年代初發展起來的一項高新技術，80年代開始從基礎研究發展到臨床醫學研究及疾病的診斷和治療監測。我國在80年代初引進了第一臺流式細胞儀，到目前在醫學院校、科研機構和醫院已經有100多臺。 FCM采用流式細胞儀對細胞懸液進行快速分析，通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢
核酸提取和純化控制程序 1. 目的：規定DNA和RNA核酸樣本提取和純化實驗應遵守的操作。 2. 適用范圍：生物樣本提取DNA和RNA核酸，并包括對核酸樣品的長期保存。 3. 基本定義和術語： DNA，脫氧核糖核：基因組DNA構成了生物體的完整遺傳信息。幾乎所有生物體的基
核酸提取和純化控制程序 1. 目的：規定DNA和RNA核酸樣本提取和純化實驗應遵守的操作。 2. 適用范圍：生物樣本提取DNA和RNA核酸，并包括對核酸樣品的長期保存。 3. 基本定義和術語： DNA，脫氧核糖核：基因組DNA構成了生物體的完整遺傳信息。幾乎所有生物體的基
RNAse的無處不在導致了RNA的脆弱敏感。要改善RNA提取的質量，專家為你介紹在RNA純化過程中要特別注意的10個問題。 在收獲組織及細胞死亡之后，應立即滅活內源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3個方法均可有效使內源RNA酶失活：1）用含離液（如胍鹽）的細胞裂解液收獲樣品，并立即勻
一.流式細胞光度術－單細胞懸液染色標本的多信息分析法1.概述 流式細胞光度計(flow cytometry)可定量地測定某一細胞中的DNA、RNA或某一特異蛋白的含量，以及細胞群體中上述成分含量不同的細胞的數量，特別是它還可將某一特異染色的細胞從數以萬計的細胞群體中分離出來，以及將DNA含量不同的
分析測試百科網訊 2017年8月24日，第三屆全國樣品制備學術報告會在昆明召開（相關報道：第三屆全國樣品制備會在春城開幕 樣品處理再現新技術）。在第一天的大會報告后（相關報道：第三屆全國樣品制備會大會報告一 新方法層出不窮），8月25日，大會還邀請到湖南大學化學化工學院院士譚蔚泓做大會特邀報告，
1.在收獲組織及細胞死亡之后，應立即滅活內源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3個方法均可有效使內源RNA酶失活：1）用含離液（如胍鹽）的細胞裂解液收獲樣品，并立即勻漿。2）用液氮瞬間凍結樣品。值得特別注意的是：組織塊必須保證足夠小，在浸入液氮的瞬間就能凍結，以確保瞬間令RNA酶失活3）立即將樣品置
實驗步驟一、化學法和酶法細胞裂解微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些機械的方法經常會遇到過度的產熱和樣品被氧化等問題。微量細胞裂解的簡化方面的重大進
實驗步驟 一、化學法和酶法細胞裂解 微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些