RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)1
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、退火溫度能解決的。1）RT和PCR時的引物設計是不是一定要先知道目的基因的序列？必須 在RT時，引物設計有3種方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特異的下游引物。如果用a和b方法，是擴增的所有的cDNA（理論上），還要用此產物做PCR 的模板繼續擴增。 如果用c方法，那么要去那里查它的序列呢？http://www.ncbi.nlm.nih.gov 問題： 在做RT-PCR遇到一怪現象，即對同一動物不同組織擴增同一段基因，結果從一種組織中可以擴出我的目的基因，條帶......閱讀全文
RT-PCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)-1
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、退火溫
RT-PCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)-3
4. 配制的溶液應盡可能的用0.1% DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，然后經 0.22μm濾膜過濾除菌。5. 操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實驗過程中手套要勤換。6. 設置RNA操作專用實驗室，所有器
RT-PCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)-6
可能問題出在標本的保存：一般四小時之內就應處理，分離出細胞說的是套式PCR,可以在你的第一次PCR兩個引物內,再設計一對引物進行第二次PCR就行了如果你的第一次PCR剛好包括目的片段,那只好設計個更長的了第二次的引物設計要求可以低一點以50μl體系為例引物各1μl第一次PCR產物5μl二次PCR和巢
RT-PCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)-5
室溫下充分混勻，離心10000g×2min。取上層液置另一0.5 ml離心管中，加入100μl氯仿，混勻，離心10000g×2min。將上層液轉移至另一0.5ml 離心管中，再加入3M NaAc 10μl、預冷無水乙醇250μl，混勻后，-20OC靜置30min。4OC離心13500g×10
RT-PCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)-4
3． 由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進行分析。4． 步驟較少，耗時短。與Northern雜交相比，省去了轉膜和洗膜的過程。5． RNA-RNA雜交體穩定性高，無探針自身復性問題，無須封閉。6． 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交，無競
RT-PCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)-2
關于平臺期和線性期的問題，實際上線性期是指數期，只不過碰巧2的冥和2的倍數是相同的。看上去任何一個時期都可以，實際上是不對的，因為牽涉到酶促動力學的問題，這個我也不懂，有一些專門的文章，好像，涉及到很多化學的東西。我們學醫的，也沒必要知道那些，但是其中主要是因為模板引物酶原料和buffer之間的關系
RT-PCR實驗方法大全
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2 濃度、退
RT-PCR實驗方法總結大全
生物谷：?RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃
RT-PCR實驗方法總結大全
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2
RNA提取與RT-PCR(1)
在做Northern等雜交實驗、構建cDNA文庫、獲取能夠編碼真核生物蛋白的基因、獲得RNA病毒基因時，會用到RNA提取和RT-PCR技術。 真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋