膠體金標記蛋白A技術（ProteinAgoldtechnique,PAg法）1
PAg復合物制備方法簡便，作為第二抗體，無種屬特異性，可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg 復合物與包埋劑和細胞成分都極少發生非特異性的交互作用，蛋白A和金粒間非共價的結合特性既不影響蛋白A的活性，又能保持高度的穩定性，PAg復合物分子最小易于穿透組織。PAg復合物的原液在4℃可保存達一年之久。電鏡水平的PAg染色法 PAg法在電鏡技術的應用原則是二步標記法，可用于包埋前和包埋后染色。其主要區別于一般膠體金免疫染色在：①須1%卵白蛋白－PBs （pH7.4）或1%卵白蛋白—0.05mol/l Tris緩沖液（pH7.4）來封閉非特異性的結合部位，而不是采用羊或其它的動物的正常抗血清，因為PAg復合物能夠與正常血清組中的Ig結合，從而給出假陽性結果；②在應用第一抗血清孵育和PBS沖洗后作第二抗血清即PAg復合物孵育前的準備時，應用的PBS或TBS的pH應變更為pH8.2.其它可參照本節中包埋后染......閱讀全文
膠體金標記蛋白A技術（Protein－Agold－technique,－PAg法）1
PAg復合物制備方法簡便，作為第二抗體，無種屬特異性，可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg 復合物與包埋劑和細胞成分都極少發生非特異性的交互作用，蛋白A和金粒間非共價的結合特性既不影響蛋白A的活性，又能保持高度的穩定性，PAg復合物分子最小易于穿透組織。PAg復合物的原液在4
膠體金標記蛋白A技術（Protein－Agold－technique,－PAg法）2
(2)0、5mol／L，pH7.4 Tris-Hcl緩沖液：Tris，60.57g，1mol／L Hcl約420m1，調pH值至7.4，最后加雙蒸水至1000m1，此為儲備液。(3)0、05mo1／L Tris緩沖生理鹽水：氯化鈉8.5-9g；0.5mo1／L，pH7.4 Tris-Hcl緩沖液10
免疫電鏡膠體金標記法
第四節 免疫電鏡膠體金標記法 金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，
膠體金標記蛋白A技術
膠體金標記蛋白A技術（Protein A-gold technique, PAg法） PAg復合物制備方法簡便，作為第二抗體，無種屬特異性，可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg 復合物與包埋劑和細胞成分都極少發生非特異性的交互作用，蛋白A和金粒間非共價的結合特性既不影響蛋白A
膠體金標記蛋白A技術
膠體金標記蛋白A技術（Protein A-gold technique, PAg法） PAg復合物制備方法簡便，作為第二抗體，無種屬特異性，可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg 復合物與包埋劑和細胞成分都極少發生非特異性的交互作用，蛋白A和金粒間非共價的結
免疫電鏡膠體金標記法1
金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，清晰可辨。因此，免疫電鏡膠體金標
免疫膠體金技術(Immune－colloidal－gold－technique)
（一）??原理?免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電
免疫膠體金技術(Immune－colloidal－gold－technique)概述
（一）? 原理? 免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正
蛋白質分析技術(Analytical－Techniques－for－Protein)1
第一節 蛋白質分離純化與鑒定的基本原理一、蛋白質的理化性質（一）蛋白質的兩性電離 pI：當蛋白質溶液處于某一pH時，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為0，此時的溶液的pH稱為~。 體內大多數蛋白質：pI≈pH 5.0。在pH 7.4，大多數蛋白質解離成陰離子。少數蛋白
免疫膠體金技術(Immune－colloidal－gold－technique)大總結
(一) 原理免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原?抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷
免疫熒光技術(immunofluorescence－technique)1
免疫熒光技術(immunofluorescence technique)是一種以熒光物作為標記物的免疫分析技術，熒光物質分子在特定條件下吸收激發光的能量后，分子呈激發態而極不穩定，其迅速回到基態時，可以電磁輻射形式釋放出所有的光能，發射出波長較照射光長的熒光。用熒光素與已知的抗體（或抗原，較少用
沉淀反應技術(Precipitation－reaction－technique)（1）
一、 概述可溶性抗原（如細菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質、多糖質、類脂體等）與其相應的抗體相遇后，在電解質參與下，抗原抗體結合形成白色絮狀沉淀，出現白色沉淀線，此種現象稱為沉淀反應。沉淀反應中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,與沉淀原發生反應的抗體稱為沉淀素（pre
蛋白質純化(protein－purification)實用技術1
研究的最后還是要看基因表達產物,無論是用于檢測還是用于棉衣保護,都需要將表達出的蛋白質分離和純化,然而蛋白質性質各異,故純化方法不同,現共享一些基本的純化方法,以饗讀者:蛋白質的一級、二級、三級和四級結構決定了它的物理、化學、生物化學、物理化學和生物學性質，綜述了不同蛋白質之間的性質存在差異或者改變
免疫電鏡膠體金標記法操作大全
金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原?反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，清晰可辨。因此，免疫電鏡膠體金
蛋白質的膠體金標記
當蛋白質的最適穩定量及標記的最佳pH值被確定以后，便可進行標記。具體步驟如下。（1）根據標記所用膠體金的總量計算出所需要待標記蛋白質的總量。（2）邊攪拌邊將蛋白質溶液加入膠體金溶液中，逐漸加入，lmg的蛋白質量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質溶液中，大約需5~10min。（3）繼續
蛋白質的膠體金標記
當蛋白質的最適穩定量及標記的最佳pH值被確定以后，便可進行標記。具體步驟如下。（1）根據標記所用膠體金的總量計算出所需要待標記蛋白質的總量。（2）邊攪拌邊將蛋白質溶液加入膠體金溶液中，逐漸加入，lmg的蛋白質量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質溶液中，大約需 5~10min。（3）繼
層析技術(Layeranalise－technique)(1)
離子交換層析技術是以離子交換纖維素或以離子交換葡聚糖凝膠為固定相，以蛋白質等樣品為移動相，分離和提純蛋白質、核酸、酶、激素和多糖等的一項技術。 （一）原理 在纖維素與葡聚糖分子上結合有一定的離子基團，當結合陽離子基團時，可換出陰離子，則稱為陰離子交換劑。如二乙氨乙基（Dicthy
免疫電鏡膠體金標記法2
（4）膠體金與蛋白A的結合和純化，依上法測得所需的比例超過10%，即每30ml膠體中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作為穩定劑，然后以15000r/min離心45min（不同方法制備的金離心速度不同），略帶紅色的松散的復合物沉淀即為PAg復合物。小心棄去上清液，加入PBS沖洗
免疫金銀染色雙PAG法
實驗概要本實驗介紹了免疫金銀染色雙PAG法的操作步驟。實驗原理免疫金銀染色方法敏感、簡便、省時、安全可靠，葡萄球菌A蛋白(SPA)金標記四步法是在此基礎上發展起來的更為敏感的一種新方法。SPA和許多哺乳類動物IgG具有親和性，且它們之間的連接不會干擾抗原—抗體的結合。簡單的SPA金標記二步法后，第三
膠體金標記蛋白質的純化
標記好的免疫金探針必須經過純化處理才能用于IHC染色，尤其是免疫電鏡的染色。純化的目的就是除去其中未標記的蛋白質，未充分標記的膠體金及在標記過程可能形成的各種聚合物。其純化方法有超速離心法、色譜柱法以及以上二者相結合應用。（一）超迷離心法根據膠體金顆粒大小不同及蛋白質種類不同，離心的轉速和時間也不同
Bradford法蛋白定量（Bradford－Protein－Assay－）
Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observ
酵母表達外源蛋白（foreign－protein）（1）
1、 菌株用GS115表達不出蛋白，換KM71H后，大部分克隆能表達。2、溫度： 在28度和室溫下誘導表達，表達水平可能都不低。3、pH手冊上用6.0，pH提高到6.8，不表達的蛋白可能就表達出來。BMMY的pH7.0-7.5比較合適。國內外做的最好的rHSA，最適pH大概 5-6左右。pH3的時候
免疫膠體金技術1
（一） 原理 免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與
膠體金標記技術及其應用解析
傳統的同源建模技術對抗體進行人源化改造，主要是基于蛋白質一級結構的相似性同時結合已有的蛋白質晶體結構進行同源模擬。現有的多種同源建模技術大部分都沒有對已有的抗體序列數據進行分析，在人源化改造過程中存在突變位點不確定的問題，同時抗體特性如表達水平、關鍵氨基酸的后期修飾預測等無法提前預知。
膠體金標記技術及其應用解析
膠體金是氯金酸在還原劑的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用形成一種穩定的膠體狀態，故稱之為膠體金。膠體金溶液的常見制備方法大致分為白磷還原法、硼氫化鈉還原法、抗壞血酸鹽還原法、檸檬酸三鈉還原法和鞣酸檸檬酸三鈉還原法。其基本原理是向一定濃度的金溶液內加入適量還原劑，使金離子還原為金原子。通
免疫球蛋白提取技術(Immunoglobulin－isolation－technique)
免疫球蛋白（Immunoglobulin?Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。?隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多
離心技術（centrifugation－technique）與離心機類型(1)
最大速度方法(1)移動界面超速離心法含幾個組分的樣品在足夠高的離心場中離心時，每種顆粒都達到其最大沉降速度，這時樣品開始分離。離心管的上層逐漸形成透明的上清液，并形成對應于樣品各組分的一系列濃度界面，界面的移動相對于每種組分來說是特征的。雖然利用這種方法不一定能實現組分的純化分離，但可以通過監測界面
微載體培養技術（microcarrier－culture－technique）原理操作1
一、微載體培養應用此技術于1967年被用于動物細胞大規模培養。經過三十余年的發展，該技術目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應用于生產疫苗、基因工程產品等。微載體培養是目前公認的最有發展前途的一種動物細胞大規模培養技術，其兼具懸浮培養和貼壁培養的優點，放大容易。目前微載體培養廣泛用于培養各種類型細胞，生產
標記免疫分析技術1
一、標記分析技術概述1959年，美國學者Yalow和Berson建立了放射免疫分析技術，這種技術以免疫反應的特異性，和放射性同位素標記的靈敏性顯示了其在微量檢測方面的優勢，吸引著各國的生物醫學工作者。標記免疫分析技術進入了一個嶄新的時期。從而使免疫分析，從定性分析和半定量分析走向了定量分析。醫學檢測
關于免疫膠體金標記技術的簡介
免疫膠體金標記技術(immunologic colloidal gold signature，ICS) 膠體金是分散相粒子的金溶液，經凝聚法制成的金溶膠顆粒表面帶有較多電荷，能吸附抗體形成金標記的抗體。用這種金標記抗體與組織或細胞標本中的抗原反應，借助顯微鏡觀察顏色分布即可定位、定性測定組織或細