蛋白質的膠體金標記
當蛋白質的最適穩定量及標記的最佳pH值被確定以后，便可進行標記。具體步驟如下。（1）根據標記所用膠體金的總量計算出所需要待標記蛋白質的總量。（2）邊攪拌邊將蛋白質溶液加入膠體金溶液中，逐漸加入，lmg的蛋白質量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質溶液中，大約需 5~10min。（3）繼續攪拌10min,然后加入5%BSA使其終濃度為1%,或加入3%聚乙二醇（PEG，Mr：20000）使其終濃度為0.05%,其效果 BSA要優于PEG。（4）將標記好的膠體金裝入透析袋中，兩頭扎緊，放人蔗糖或硅膠中濃縮，濃縮到原體積的1/10量，濃縮完畢后純化。如用離心純化方法時，不需要濃縮。......閱讀全文
蛋白質的膠體金標記
當蛋白質的最適穩定量及標記的最佳pH值被確定以后，便可進行標記。具體步驟如下。（1）根據標記所用膠體金的總量計算出所需要待標記蛋白質的總量。（2）邊攪拌邊將蛋白質溶液加入膠體金溶液中，逐漸加入，lmg的蛋白質量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質溶液中，大約需5~10min。（3）繼續
蛋白質的膠體金標記
當蛋白質的最適穩定量及標記的最佳pH值被確定以后，便可進行標記。具體步驟如下。（1）根據標記所用膠體金的總量計算出所需要待標記蛋白質的總量。（2）邊攪拌邊將蛋白質溶液加入膠體金溶液中，逐漸加入，lmg的蛋白質量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質溶液中，大約需 5~10min。（3）繼
膠體金標記蛋白質的純化
標記好的免疫金探針必須經過純化處理才能用于IHC染色，尤其是免疫電鏡的染色。純化的目的就是除去其中未標記的蛋白質，未充分標記的膠體金及在標記過程可能形成的各種聚合物。其純化方法有超速離心法、色譜柱法以及以上二者相結合應用。（一）超迷離心法根據膠體金顆粒大小不同及蛋白質種類不同，離心的轉速和時間也不同
膠體金標記蛋白A技術
膠體金標記蛋白A技術（Protein A-gold technique, PAg法） PAg復合物制備方法簡便，作為第二抗體，無種屬特異性，可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg 復合物與包埋劑和細胞成分都極少發生非特異性的交互作用，蛋白A和金粒間非共價的結
膠體金標記蛋白A技術
膠體金標記蛋白A技術（Protein A-gold technique, PAg法） PAg復合物制備方法簡便，作為第二抗體，無種屬特異性，可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg 復合物與包埋劑和細胞成分都極少發生非特異性的交互作用，蛋白A和金粒間非共價的結合特性既不影響蛋白A
免疫電鏡膠體金標記法
第四節 免疫電鏡膠體金標記法 金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，
膠體金標記實驗步驟
1、蛋白質的處理：膠體金標記蛋白的制備膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質的等電點時，則會聚集而失去結合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強度、蛋白質的分子量等都影響膠體金與蛋白質的結合。（1）待標記蛋白溶液
免疫電鏡膠體金標記法2
（4）膠體金與蛋白A的結合和純化，依上法測得所需的比例超過10%，即每30ml膠體中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作為穩定劑，然后以15000r/min離心45min（不同方法制備的金離心速度不同），略帶紅色的松散的復合物沉淀即為PAg復合物。小心棄去上清液，加入PBS沖洗
膠體金標記實驗操作步驟
1、蛋白質的處理：膠體金標記蛋白的制備 膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質的等電點時，則會聚集而失去結合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強度、蛋白質的分子量等都影響膠體金與蛋白質的結合。 （
免疫電鏡膠體金標記法1
金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，清晰可辨。因此，免疫電鏡膠體金標
蛋白質標記
Biosynthetic labeling?(Sefton Lab)Biotinylation of Antibody?(Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl?(ScienceXchange)Protein (
膠體金標記技術及其應用解析
傳統的同源建模技術對抗體進行人源化改造，主要是基于蛋白質一級結構的相似性同時結合已有的蛋白質晶體結構進行同源模擬。現有的多種同源建模技術大部分都沒有對已有的抗體序列數據進行分析，在人源化改造過程中存在突變位點不確定的問題，同時抗體特性如表達水平、關鍵氨基酸的后期修飾預測等無法提前預知。
免疫電鏡膠體金標記法操作大全
金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原?反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，清晰可辨。因此，免疫電鏡膠體金
膠體金標記技術及其應用解析
膠體金是氯金酸在還原劑的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用形成一種穩定的膠體狀態，故稱之為膠體金。膠體金溶液的常見制備方法大致分為白磷還原法、硼氫化鈉還原法、抗壞血酸鹽還原法、檸檬酸三鈉還原法和鞣酸檸檬酸三鈉還原法。其基本原理是向一定濃度的金溶液內加入適量還原劑，使金離子還原為金原子。通
膠體金標記蛋白質的純化（超迷離心法和凝膠過濾法）
標記好的免疫金探針必須經過純化處理才能用于IHC染色，尤其是免疫電鏡的染色。純化的目的就是除去其中未標記的蛋白質，未充分標記的膠體金及在標記過程可能形成的各種聚合物。其純化方法有超速離心法、色譜柱法以及以上二者相結合應用。（一）超迷離心法根據膠體金顆粒大小不同及蛋白質種類不同，離心的轉速和時間也不同
膠體金標記的抗體是什么意思
膠體金是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，有其獨特的優點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用其標記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能例用到。 1971年Faulk 和Taytor將膠體金引
膠體金標記技術（制備方法和應用）
膠體金標記技術是以膠體金作為示蹤標志物或顯色劑，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。由于它不存在內源酶干擾及放射性同位素污染等問題，且利用不同顆粒大小的膠體金還可以作雙重甚至多重標記，使定位更加精確。因此已成為繼熒光素、酶、同位素及乳膠標記技術之后的一種新型標記技術。現已廣泛應用于電鏡、流式細
免疫電鏡膠體金標記法（簡稱金標法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金標記法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，載于200～300網孔的鎳網上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蠟板上，將網的載片面輕浮于液滴上10min至1h；（3）雙蒸水洗3次，每次10分鐘。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛雙蒸水的注射器沿鎳網面沖洗，水流
白話膠體金系列——第二話<標記>中篇
（二）操作上面大篇幅都圍繞Ph展開，因此不難想象Ph是標記優化的一個關鍵點，總結起來就4個字——高效、穩定。很多流程里，摸索最佳Ph都是優化標記的第一步，但是如果大家對第一話《燒金》的內容還有印象的話，那么標記的第一步首先應該是找到合適的容器，因為膠體金有潔癖。1.容器：推薦用清洗過的西林瓶（玻璃瓶
白話膠體金系列——第二話<標記>下篇
5）離心純化：目的有幾方面：去除游離蛋白；置換儲存液；濃縮。高速離心，本身是一個加速破壞的過程，所以離心需要平衡兩點，“上清干凈”和“無不溶顆粒”，這兩個矛盾的問題在小量離心時不明顯，但是大量離心就講究了，以下引自濤哥答疑錄：“關于金標記物的離心方法，五花八門，各種各樣的都有，比如：有人先低速離心，
白話膠體金系列——第二話<標記>上篇
（一）基本概念為了方便新人與老司機交流，需要掌握一些基本名詞和概念，以便準確的表述問題。這些知識不考試，寫作時間也有限，關鍵還沒有稿費，所以隨便寫寫，沒有咬文嚼字，如果意思表達錯了請指正，形式上就不用對著教科書摳字眼了，謝謝。1.抗原、抗體，和二抗：抗原（半抗原）：能夠誘導產生抗體（免疫原性）并且和
膠體金標記實驗的操作方法與步驟
膠體金標記實驗的實驗過程主要包含以下步驟：膠體金標記蛋白的制備及其與膠體金之間的用量比例的確定、膠體金和蛋白的結合、膠體金標記蛋白的純化與質量檢測等。1、蛋白質的處理：膠體金標記蛋白的制備膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結合物。如果膠體金的p
免疫電鏡相關技術實驗——膠體金標記免疫電鏡技術
實驗材料病毒試劑、試劑盒膠體金儀器、耗材電子顯微鏡實驗步驟免疫膠體金標記技術又稱免疫金染色技術 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年發現直徑為 5~50nm 的膠體金 (colloidal gold) 在電鏡下具有很高的電
膠體金標記蛋白A技術（Protein－Agold－technique,－PAg法）2
(2)0、5mol／L，pH7.4 Tris-Hcl緩沖液：Tris，60.57g，1mol／L Hcl約420m1，調pH值至7.4，最后加雙蒸水至1000m1，此為儲備液。(3)0、05mo1／L Tris緩沖生理鹽水：氯化鈉8.5-9g；0.5mo1／L，pH7.4 Tris-Hcl緩沖液10
膠體金標記技術在免疫學中的應用
膠體金標記技術由于標記物的制備簡便，方法敏感、特異，不需要使用放射性同位素，或有潛在致癌物質的酶顯色底物，也不要熒光顯微鏡，它的應用范圍廣，除應用于光鏡或電鏡的免疫組化法外，更廣泛地應用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細胞術等。1．液相免疫測定：將膠體金與抗體結合，建立微量凝集試驗檢測相應的
膠體金標記的全定量免疫層析技術的原理
從定性、半定量向全定量是即時檢驗（POCT）技術發展的一個趨勢。全定量的POCT檢測技術有多種原理。本文主要介紹膠體金標記的全定量免疫層析技術的原理。一、膠體金標記的全定量免疫層析POCT試劑裝置結構示意圖及作用?1、??? 吸收墊：吸收多余液體。2、??? PVC底板：提供試劑封裝外殼。3、???
膠體金標記蛋白A技術（Protein－Agold－technique,－PAg法）1
PAg復合物制備方法簡便，作為第二抗體，無種屬特異性，可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg 復合物與包埋劑和細胞成分都極少發生非特異性的交互作用，蛋白A和金粒間非共價的結合特性既不影響蛋白A的活性，又能保持高度的穩定性，PAg復合物分子最小易于穿透組織。PAg復合物的原液在4
蛋白質的生物合成標記實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 甲硫氨酸PBS儀器、耗材 培養箱離心管實驗步驟 1. ?培養懸浮細胞至對數增長期，室溫300 g 離心5 min。回收107~108細胞。?2. ?每2×107細胞用約10 ml 37℃的短時間標記培養基在圓錐型試管中洗滌，于室溫300 g 離心5 min 回收細胞，小
蛋白質的生物合成標記實驗
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞 甲硫氨酸短時間標記貼壁培養細胞 甲硫氨酸對細胞進行脈沖追蹤標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
蛋白質的生物合成標記實驗
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞 甲硫氨酸短時間標記貼壁培養細胞 甲硫氨酸對細胞進行脈沖追蹤標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質