克隆心得：幫助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆（也適用于多片斷連接）簡介：將用作載體的質粒A（制作大片斷）酶切3μl ，要切出小片斷的質粒B酶切7μl；瓊脂糖回收膠電泳；切膠回收來自質粒A的大片段，和來自B的小片斷，并回收到一管中；酚氯仿法回收DNA，酒精沉淀，干燥；加入8μl水、1μlligase Buffer、1μl ligase ，4℃過夜；次日轉化涂板。酶切配置可酶切共10μl質粒的酶切反應體系（雙酶切）：（提示 在克隆設計時盡量使用好切的內切酶<通常是效價高、便宜量大的酶>，且注意這兩個酶有比較兼容的Buffer，即在這種公用Buffer中，兩酶的效力變化不大<至少保持60%的活......閱讀全文
用克隆環分離細胞克隆
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。 實驗材料
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2?的培養瓶內。實驗材料胰蛋白酶試劑、試劑盒硅油儀器、耗材克隆培養環巴氏吸管生長培養基多孔板無菌鑷移液器粗頭筆實驗步驟1. 觀察細胞克隆，用氈制粗頭筆或 Nik
單克隆與克隆的區別
無性增殖（分裂、生殖）叫做克隆，克隆是一個很大的范圍，單克隆是指的單克隆抗體，它由融合的細胞得來。是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。“單”和“克隆”要分開看，克隆是因為它是無性增殖來的，通常是一種人工誘導的無性生殖方式或者自然的無性生殖方式（如植物）。是原來細胞的基因的
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理 將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。實驗材料 胰蛋白酶試劑、試劑盒 硅油儀器、耗材 克隆培養環巴氏吸管生長培養基多孔板無菌鑷移液器粗頭筆實驗步驟 1. 觀察細胞克隆，用氈制粗頭筆
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。實驗材料胰蛋白酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒
簡述分子克隆化克隆的選擇
①直接篩選：有些載體帶有可辨認的遺傳標記，能有效地將重組分子與本底區分。例如：有些λ噬菌體攜帶外源基因后形成的噬菌斑就會從原來的混濁變為清亮；還有些載體分子攜帶外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的顏色有明顯變化，如藍色變為無色；有些λ噬菌體能侵染甲菌而不能侵染乙菌，攜帶外源DNA片段后便能侵染乙菌，
單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過
DNA克隆
DNA克隆（主要內容如下）·?????????General Procedure·?????????PCR Cloning·?????????Subcloning·?????????ET Cloning·?????????Vector Preparation·?????????Ligation Re
基因克隆
外源DNA和質粒載體的連接反應?外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間?形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交
概述單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，
單克隆抗體的克隆化方法
克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。 克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細
單克隆抗體的克隆化方法
實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細
單克隆抗體的克隆化方法
實驗概要本文介紹了單克隆抗體的克隆化方法，包括有限稀釋法、顯微操作法、軟瓊脂平板法及熒光激活分離法等。實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細
單克隆抗體的克隆化方法
實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細
單克隆抗體的克隆化方法
克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。 克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細
單克隆抗體技術：克隆化(有限稀釋法、軟瓊脂克隆化、...
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆3
酶切 直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系： PCR產物酶切－制作插入片斷 公用Buffer 6μL 酶 I 3μL 酶 II 3μL PCR產物 —— 雙蒸水 48μL 合計 60μL 要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μL進行酶切。 A質粒酶切－制作載體片斷
關于單克隆抗體的克隆方法介紹
1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。 2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。 3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾細胞。 4．每塊平皿加10ml，于室溫中凝固。 5．
克隆心得：幫助新手快速做出克隆2
酶切直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系：PCR產物酶切－制作插入片斷公用Buffer 6μl酶 I 3μl酶 II 3μlPCR產物 ——雙蒸水 48μl合計 60μl要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μl進行酶切。A質粒酶切－制作載體片斷公用Buffer 3μl酶 I 1μl酶 II
單克隆抗體(monoclonal－antibody)克隆化技術
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
克隆經驗:幫助新手快速做出克隆2
（提示 關于酶量的問題。通常的內切酶效價在10U/μL左右，3μL內切酶相當于30U，足夠切10μL的質粒。因為通常小提質粒的濃度在200－600ng /μL，一般濃度達不到1μg/μL。根據1U酶切1μg質粒的原則，這一酶量是足夠的。）1%瓊脂糖回收膠回收（碎膠、酚氯仿抽提法）1. 酶切產物加入1
克隆心得：幫助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆（也適用于多片斷連接）簡介：將用作載
克隆經驗:幫助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆 的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆 （也適用于多片斷連接）簡介：將用
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆5
1. 連接產物10μL、5×KCM溶液10μL、雙蒸水30μL，（共50μL）混勻，置冰上。2. 從-70℃冰箱中取 1支感受態細胞，置冰上。融化后立即取50μL，加入步驟1中的混合液中，輕輕吹打數次混勻（不可用力過大，不可渦旋）， 立即置冰上。3. 冰上放置20 分鐘。4. 室溫放置10分鐘。5.
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆4
9. 在一新1.5mL 離心管中加入 900μL 預冷 無水乙醇、20μL 3M的醋酸鈉。將步驟8的上清小心加入本步驟離心管中。顛倒數次混勻。12000rpm 4℃ 離心15分鐘。（提示 吸取步驟8中的上清時，千萬不要將有機相吸入，寧可放棄一些上清，否則影響后面的連接反應。 另外，本方法
PCR擴增產物的克隆——TA克隆法
實驗方法原理TA克隆 系統由Invitrogen公司（San Diego，CA）發展而來的商業性試劑盒，它用于PCR 產物的克隆 和測序。其原理是利用Taq酶能夠在PCR 產物的3'末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3'T突出端的載體，在連接酶作用下，可以快速地、一步到位
制備克隆實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP -巰基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 連接緩沖液 T4DNA 連接酶
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四環素Ticarcil
多克隆抗體
Making Antibody·?????????Production of Polyclonal Antibody in Rabbit?(Walter Steffen)Provides detailed protocol for immunizatioin, bleeding procedure,
miRNA克隆實驗
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主