細胞單克隆的分離方法（有限稀釋法與軟瓊脂法）
一、有限稀釋法材料：a、96孔細胞培養板等；b、HT培養基；c、活力強的雜交瘤細胞；d、小鼠腹腔細胞。方法：a、制備小鼠腹腔細胞。同“細胞融合”一節中的方法。b、制備待克隆的雜交瘤細胞懸液，用含20%血清的HT培養基稀釋至每毫升含2.5、15和50個細胞三種不同的稀釋度。c、按每毫升加入5×104-1×105細胞的比例，在上述雜交瘤細胞懸液中分別加入腹腔巨噬細胞。d、每種雜交瘤細胞分裝96孔板一塊，每個稀釋度32孔，每孔量為0.2ml，每孔的雜交瘤細胞數分別為0.5、3和10。e、37℃、7.5% CO2濕潤培養7-10天，出現肉眼可見的克隆即可檢測抗體；在倒置顯微鏡下觀察，標出只有單個克隆生長的孔，取上清作抗體檢測。f、取抗體檢測陽性孔的細胞擴大培養，并凍存。g、本法中（b）、（c）、（d）也可簡化為將計數后的雜交瘤細胞準確地進行系列稀釋，直至每毫升含10個細胞，按每孔接種0.1ml細胞懸液，即每孔含1個細胞。二、軟瓊脂法材料......閱讀全文
單克隆抗體細胞選擇飼養細胞
在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞（Feedercell）。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養細胞，如
單克隆抗體細胞選擇脾細胞
1．材料(1)免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。單克隆抗體制備流程(2)1640培養液(3)2.5%FCS－1640營養液2．操作方法(1)拉頸或用CO2處死小白鼠。(2)將小鼠放于70%酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中，冰
單克隆抗體的雜交細胞
克隆化的細胞可以在體外進行大量培養，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細胞濃度，且每天要換培養液。而體內雜交瘤細胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細胞具有從親代淋巴細胞得來的腫瘤細胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小
單克隆抗體細胞的選擇
實驗概要本文介紹了單克隆抗體細胞的選擇實驗。實驗原理在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞(Feeder cell)。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一
單克隆抗體技術：細胞融合
實驗概要本文介紹了單克隆抗體技術——細胞融合實驗的操作流程。實驗原理細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳
單克隆抗體的細胞融合
融合劑 細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如滅活的仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑，對熱穩定
單克隆抗體技術：細胞融合
實驗概要本文介紹了單克隆抗體技術——細胞融合實驗的操作流程。實驗原理細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳
單克隆抗體技術：細胞的選擇
脾細胞?1．材料?(1) 免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。?(2) 1640培養液?(3) 2.5％FCS－1640營養液?2．操作方法?(1) 拉頸或用CO2處死小白鼠。?(2) 將小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。?(3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的
單克隆抗體技術：細胞融合
實驗概要本文介紹了單克隆抗體技術——細胞融合實驗的操作流程。實驗原理細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳
單克隆抗體細胞融合
單克隆抗體細胞融合（一）融合劑?細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機
單克隆抗體技術：細胞融合
融合劑?細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。?聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑，對熱穩定，與
單克隆抗體的細胞如何選擇？
(一)脾細胞1.材料(1)免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。單克隆抗體制備流程(2)1640培養液(3)2.5%FCS-1640營養液2.操作方法(1)拉頸或用CO2處死小白鼠。(2)將小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在無菌條件下取脾。(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的16
單克隆抗體的細胞融合
融合劑 細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如滅活的仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑，對熱穩定
單克隆抗體技術：飼養層細胞
在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞（Feeder cell）。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養細
單克隆抗體細胞的選擇
實驗概要本文介紹了單克隆抗體細胞的選擇實驗。實驗原理在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞(Feeder cell)。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一
單克隆抗體細胞選擇骨髓瘤細胞
骨髓瘤細胞能產生并分泌大量的免疫球蛋白，這樣的瘤細胞融合后，可能影響或降低所分泌抗體的滴度，所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞。選擇骨髓瘤細胞的條件：①該瘤細胞系的來源應與制備脾細胞小鼠為同一品系，以便兩者的組織相容性抗原一致；②骨髓瘤細胞必須是靜息狀態，不產生γ球蛋白或不分泌到細胞外
單克隆抗體細胞融合劑
細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1 000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑，對熱穩定，與許
單克隆抗體治療后巨噬細胞清除循環腫瘤細胞
直接針對腫瘤抗原的單克隆抗體已被證明有效，能用于治療某些形式的癌癥。盡管越來越多地使用單克隆抗體用于癌癥治療，但目前尚不清楚這些抗體是如何推動腫瘤的清除。 發表在Journal of Clinical Investigation雜志上的一則研究中，VU大學醫學中心Marjolein van
流式細胞儀能篩選出單克隆細胞么
可以。為了制備牛型布魯菌核蛋白L7/L12的單克隆抗體,試驗采用流式細胞儀與間接ELISA相結合的方法進行單克隆篩選,以及Western-blot分析。結果表明:最終篩選出3株表達量較高的雜交瘤細胞株,細胞培養上清液的抗體效價可達1∶3 200,3株單克隆抗體均能與核蛋白L7/L12發生特異性結合,
單克隆抗體的細胞融合關鍵介紹
1．技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如，供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。2．融合試驗最大的失敗原因是污染，融合成功的關鍵是提供一個無毒無菌的操作環境。
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
單克隆小鼠抗人上皮細胞膜抗原
上皮細胞膜抗原是上皮細胞表面大分子糖蛋白物質，它不僅存在于各種上皮，以及各種上皮來源的腫瘤，也可存在于部分非上皮及其來源的腫瘤，如漿細胞，組織細胞等。?應用EMA來檢測正常的組織時，其陽性表達主要在細胞膜上，但在檢測腫瘤時，這種陽性物不僅在細胞膜上出現，也可在細胞漿中見到。實驗中發現，腫瘤細胞在分化
簡述單克隆抗體雜交瘤細胞的內容
克隆化的細胞可以在體外進行大量培養，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細胞濃度，且每天要換培養液。而體內雜交瘤細胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細胞具有從親代淋巴細胞得來的腫瘤細胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小
單克隆抗體的細胞融合(cell－fusion)過程
融合的方法很多，常用的有轉動法和離心法。?融合時脾細胞和骨髓瘤細胞的比例為1:1至10:1不等。3:1或5:1最為常用。?1．試劑與材料?(1) 供融合用的脾細胞及骨髓瘤細胞。?(2) 1640培養液100ml。?(3) 完全1640液100ml。?(4) 2.5％FCS－1640液50ml。?(5
譜系細胞單克隆自動化獲取研究獲進展
近日，中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院（簡稱廣州健康院）研究員張驍團隊提出一種基于結構微流體創新的譜系細胞單克隆自動化獲取策略，在體細胞重編程過程出現的復雜譜系中實現了對特定譜系的單克隆性細胞的自動化獲取。相關成果在線發表于《研究》。“研究建立的整機技術通過大幅減少譜系細胞生成過程中的時間成本，以
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
實驗方法原理1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。?制備單克隆抗體包
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元
單克隆抗體制備飼養細胞的相關介紹
在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞（Feedercell）。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養細胞