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    DNA合成儀在生物學中的應用

    DNA合成儀在分子生物學領域中的應用非常廣泛,大體可以概括為以下幾個方面。1.合成PCR引物,DNA測序引物和雜交探針2.合成生物素標記的DNA包括生物素標記的引物用于DNA固相測序法(solid-phasesequencing),采用生物素標記的引物進行PCR擴增,再用抗生物素蛋白釣出擴增產物,由于抗生物素蛋白與磁珠共價結合,所以用磁鐵吸附即可釣出擴增產物,大大簡化了DNA測序模板的純化步驟。此外,生物素標記的探針用于非放射性雜交檢測。DNA合成儀可用于合成生物素標記的探針和引物。3.合成熒光素標記的DNA包括熒光素標記的引物可在合成的DNA片段5’端標記幾種不同顏色熒光素(6-FAM、TET、HEX),用于全自動DNA測序儀,還可用于PCR片段大小分析及定量分析,即基因組型分析和基因表達水平的研究。此外熒光素標記的探針用于原位PCR雜交檢測,進行基因在染色體上的定位。而熒光素標記的DNA包括熒光素標記的引物皆可采用DNA合成......閱讀全文

    什么是細胞周期?細胞周期時間如何確定?

    細胞周期(cell cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程,分為間期與分裂期兩個階段。過程間期間期又分為三期、即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。1.G1期(first gap) 從有絲分裂到DNA復制前的一段時期,又稱合成前期,

    基因診斷的分子生物學基礎(二)

      三、RNA分子結構  (一)RNA類型  細胞內含有三類主要的RNA,即核蛋白體RNA(Ribosomal RNA, rRNA)、轉運RNA(Transfer RNA,tRNA)及信使(Messenger RNA,mRNA)。  1.rRNA。是核蛋白體的組成部分,含量最多,約占細胞內全部RNA

    分子生物學常用實驗技術(page 2)

    一、RNA 制備   模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人

    分子生物學常用實驗技術(page 3)

    分子雜交技術    互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN

    單鏈Oligo合成與DNA組裝技術 (一)

    合成生物學作為迅速發展的交叉學科,已在生物醫藥、新材料、診斷、能源和數據儲存等領域展現越來越廣泛的應用潛力。合成基因組學作為合成生物學的重要研究方向,著重于新生命體系的從頭設計與合成,其以Oligo(寡核苷酸鏈)合成、拼裝和轉移等核心技術為支撐。新生命體系的從頭設計與合成不僅需要合成組成基因組的小片

    細胞周期的間期與分裂期階段介紹

    細胞周期(cell cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程,分為間期與分裂期兩個階段。(一) 間期間期又分為三期、即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。1. G1期(first gap) 從有絲分裂到DNA復制前的一段時期,又稱

    分子實驗方法4:RNA的提取和cDNA合成

    第一節 概 述  從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工

    Nature新發現重寫教科書:DNA復制可發生于細胞分裂期

      12月2日,頂級學術期刊《Nature》發表一篇關于DNA復制時間點的最新研究,證實除了細胞分裂間期S期之外,DNA復制還會出現在細胞分裂期。很明顯,這一新發現與教科書內容相悖,有望為癌癥治療提供新的思路。  知識回顧:教科書中的細胞周期  生物課本上對于細胞周期的描述如下:  細胞周期(Cel

    DNA合成:你應該知道的秘密

      說起DNA合成,幾位前輩師兄師姐們猶會提起上世紀90年代世行貸款買儀器,好些單位甚至醫院都趕時髦買了DNA合成儀,買回來才發現自己那點合成需求和費用,委實買得起用不起,那昂貴的設備成了擺設。彼時國外DNA合成雖然質量好純度高,可寄回來海關不好過,時間上實在傷不起,幸虧國內迅速崛起的幾家

    DNA合成:你應該知道的秘密

      說起DNA合成,幾位前輩師兄師姐們猶會提起上世紀90年代世行貸款買儀器,好些單位甚至醫院都趕時髦買了DNA合成儀,買回來才發現自己那點合成需求和費用,委實買得起用不起,那昂貴的設備成了擺設。彼時國外DNA合成雖然質量好純度高,可寄回來海關不好過,時間上實在傷不起,幸虧國內迅速崛起的幾家DNA定制

    分子雜交技術的核酸探針標記法

    核酸探針根據核酸的性質,可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。 分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA

    分子雜交技術 -1

    互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。  雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方

    細胞周期-1

    以有絲分裂方式增殖的細胞從一次分裂結束到下一次分裂結束所經歷的過程。這一過程周而復始。細胞周期是50年代細胞學上重大發現之一。在這之前認為有絲分裂期是細胞增殖周期中的主要階段,而把處于分裂間期的細胞視為細胞的靜止階段。1951 年霍華德等用32P-磷酸鹽標記了蠶豆根尖細胞,通過放射自顯影研究根尖

    DNA合成儀的特點與性能

      一、按照不同用途,DNA合成儀可分為實驗室型,工業型和大規模合成三種主要類型。  1,實驗室型:主要指合成通量較小,且單柱合成產物為10-1000nmol的DNA合成儀,一般為合成柱數低于48柱(含)的DNA合成儀,主要適用于化學生物學實驗室,或某些剛起步的商業機構。  該類型DNA合成儀品牌較

    mRNA提取、分離純化

    從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工等一系列問題。總之

    非程序DNA合成檢測實驗

    實驗方法原理 非程序DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis:UDS)即S期外的DNA合成。在一般情況下細胞內DNA合成只見于S期,但當處于非S期細胞DNA受損傷時,隨著DNA損傷的修復也將發生DNA合成現象,即UDS。在化學致突變物、致癌物作用誘發細胞DNA損傷時,也誘導DN

    分子生物學常用實驗技術(五)

    第四章RNA 的提取和cDNA 合成  第一節概述  從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA 的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA 和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA 文庫,構建的cDNA 文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA 和相

    基因的PCR擴增實驗原理、實驗材料和操作步驟

    實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板DNA,寡聚核苷酸片段稱為引物(Primer),合成的互補DNA稱為產物DNA。雙鏈DNA分子經高溫變性后成為兩條單鏈DNA,它們都可作為單鏈模板DNA,在相應的引物引導下,用

    RNA的提取和cDNA合成原理和實驗方法

    第一節 概 述   從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了

    機械化代替手動,自動化技術在分子生物界大顯身手

      未來已來,科幻大片中機器人占領地球?也許不是沒可能!   2019在北京舉行的世界機器人大會讓大家一飽眼福,體會到目前基于機器的自動化產業已應用于衣食住行的各個方面,甚至在生物學和生物醫藥領域中,自動化與高通量的實驗方式也正在成為工業級研究的新趨勢。   2019世界機器人大會展覽[1]

    聚合酶鏈反應(PCR)技術的發展和應用-1

    第一節 概述  聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction, PCR),又稱無細胞克隆技術(“free bacteria”cloning technique),是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。該方法一改傳統分子克隆技術的模式,不通過活細胞,操作

    環介導等溫擴增技術的原理與應用

    環介導等溫擴增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技術是日本學者Notomi T于2000年發明的一種新的DNA擴增技術,該方法能夠高效、特異、快速的在等溫條件下完成。通過一系列的鏈置換擴增反應,該方法能夠在1h內就可以將靶基因擴

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    DNA化學合成的應用

       隨著DNA合成技術的發展,特別是自動化合成技術的引入,人們能簡便、快速、高效地合成其感興趣的DNA片段。目前,DNA合成技術已成為分子生物學研究必不可少的手段,并且已在基因工程、臨床診斷和治療、法醫學等各個領域中日益發揮重要的作用。   1. DNA合成在基因工程和分子生物學研究中的應用

    DNA化學合成的應用

       隨著DNA合成技術的發展,特別是自動化合成技術的引入,人們能簡便、快速、高效地合成其感興趣的DNA片段。目前,DNA合成技術已成為分子生物學研究必不可少的手段,并且已在基因工程、臨床診斷和治療、法醫學等各個領域中日益發揮重要的作用。   1. DNA合成在基因工程和分子生物學研究中的應用

    Nature Methods:這個蛋白 能可視化活細胞發育周期的“盲區”

      G1期(first gap):從有絲分裂到DNA復制前的一段時期,又稱合成前期,此期主要合成RNA和核糖體。該期特點是物質代謝活躍,迅速合成RNA和蛋白質,細胞體積顯著增大。這一期的主要意義在于為下階段S期的DNA復制作好物質和能量的準備。  S期(synthesis):即DNA合成期,在此期,

    Twist與泓迅科技攜手

      2017年7月11日(美國西部時間),Twist Bioscience與Synbio Technologies(泓迅科技)簽署了合作協議,兩家公司利用優勢互補,將共同為客戶提供長片段基因合成服務,最長可合成70kb基因。合作雙方希望通過共同努力加速實現3.0DNA合成(下一代DNA合成)技術平臺

    DNA合成(DNA synthesis )技術介紹

    蛋白質概念提出:DNA多肽合成(DNA synthesis ):按照預定核苷酸的順序,將脫氧核苷酸逐個進行人工連接合成DNA鏈的方法。目前多是采用固相合成法,即是在多聚體支持物上從3′端延伸核苷酸,可自動化操作。)目前,oligo DNA合成一般都采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA片段,此方法具有高效

    這種DNA糾錯酶竟然將基因合成產物的錯誤率降低到0.41/Kb

      DNA的從頭合成是合成生物技術的基礎平臺之一。但是,由于大規模DNA合成過程中難以避免地產生錯誤,DNA糾錯環節的效率和經濟性已經成為限制DNA合成質量、通量與成本的關鍵問題之一。針對此瓶頸,青島能源所單細胞中心研發出高耐久低成本的DNA合成糾錯系統,大幅度提高了DNA糾錯環節的效率和經濟性。該

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