制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分 。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可從沉淀的核糖體中分離出胰島素特異的mRNA,一般特異mRNA只是細胞總mRNA中的次要成分。在這種情況下,不得不以密度梯度離心,按分子量大小把總mRNA分開,然后把分離開的mRNA直接用于試管中表達蛋白質(用家兔網織細胞的溶胞產物或小麥胚芽提取物作為翻譯系統的誘導物)再用免疫沉淀或聚丙烯酰胺凝膠電泳從許多表達的蛋白中測定出目的蛋白,從而確定表達該蛋白的特異mRNA。......閱讀全文
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分???。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
1.cDNA第一鏈的合成所有合成cDNA第一條鏈的方法都要用依賴于RNA的DNA聚合酶(反轉錄酶)來催化反應,主要有兩個關鍵因素,一個是mRNA模板,另一個是反轉錄酶?[3]??。商品化反轉錄酶有從禽類成髓細胞瘤病毒純化到的禽類成髓細胞病毒(AMV)逆轉錄酶和從表達克隆化的Moloney鼠白血病病毒
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分?。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可從沉
cDNA?是指互補(有時稱拷貝)DNA。特指在體外經過逆轉錄后與RNA互補的DNA鏈。與平常我們所稱謂的基因組DNA不同,cDNA沒有內含子而只有外顯子的序列。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遺傳工程方面廣為應用。
中文名稱:互補 DNA英文名稱:complementary DNA;cDNA定 義:利用反轉錄酶以mRNA為模板合成的DNA。應用學科:細胞生物學(一級學科),細胞化學(二級學科)
中文名稱:雙鏈互補DNA英文名稱:double-strand cDNA;dscDNA定 義:以雙鏈互補DNA為模板合成的雙鏈DNA。應用學科:生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
中文名稱:單鏈互補DNA英文名稱:single-strand cDNA;sscDNA定 義:在逆轉錄酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)為模板合成與mRNA序列互補的單鏈DNA。應用學科:生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)?
怎么看出來是否雜交上,這個是要在探針上做標記(標記可以有很多種,生物的、熒光的、放射性的等等),雜交后是要洗脫的,只有這種特異性的雜交才被保留下來,再通過檢測探針上的標記來看出是否雜交上。比如上面的“鑰匙”,就像你用一串的“鑰匙”去試,但你可以先在要的那個“鑰匙”上做個標記,你不需要認識“鑰匙”
1.蒸餾法,按蒸餾器皿可分為玻璃、石英蒸餾器,金屬材質的有銅、不銹鋼和白金蒸餾器等.按蒸餾次數可分為一次、二次和多次蒸餾法.此外,為了去掉一些特出的雜質,還需采取一些特殊的措施.例如預先加入一些高錳酸鉀可除去易氧化物;加入少許磷酸可除去三價鐵;加入少許不揮發酸可制取無氨水等.蒸餾水可以滿足普通分析