制備互補DNA的方法
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可從沉淀的核糖體中分離出胰島素特異的mRNA,一般特異mRNA只是細胞總mRNA中的次要成分。在這種情況下,不得不以密度梯度離心,按分子量大小把總mRNA分開,然后把分離開的mRNA直接用于試管中表達蛋白質(用家兔網織細胞的溶胞產物或小麥胚芽提取物作為翻譯系統的誘導物)再用免疫沉淀或聚丙烯酰胺凝膠電泳從許多表達的蛋白中測定出目的蛋白,從而確定表達該蛋白的特異mRNA。......閱讀全文
制備互補DNA的方法
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可從沉淀
制備互補DNA的方法過程
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分???。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可
制備互補DNA的方法和過程
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可從沉淀
關于互補DNA的制備方法介紹
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分 [2] 。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原
互補DNA的合成方法
(1)取第一鏈反應液20uL,再依次加入:10X第二鏈緩沖液20uLDNA聚合酶123ul。RNaseH0.8ulH2O加至終體積為100/uL(2)輕輕混勻,如需進行第二鏈同位素摻入放射性活性測定,可取出10uL至另一eppendorf管,加入2~5uLCi[α一32P]dCTP。(3)14℃溫浴
互補DNA的概念
cDNA是指互補(有時稱拷貝)DNA。特指在體外經過逆轉錄后與RNA互補的DNA鏈。與平常我們所稱謂的基因組DNA不同,cDNA沒有內含子而只有外顯子的序列 。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遺傳工程方面廣為應用。
互補-DNA的定義
中文名稱互補 DNA英文名稱complementary DNA;cDNA定 義利用反轉錄酶以mRNA為模板合成的DNA。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞化學(二級學科)
互補DNA的定義
cDNA是指互補(有時稱拷貝)DNA。特指在體外經過逆轉錄后與RNA互補的DNA鏈。與平常我們所稱謂的基因組DNA不同,cDNA沒有內含子而只有外顯子的序列。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遺傳工程方面廣為應用。
關于互補DNA的簡介
cDNA是指具有與某RNA鏈呈互補堿基序列的DNA。與RNA鏈互補的單鏈DNA,以其RNA為模板,在適當引物的存在下,由依賴RNA的DNA聚合酶(反轉錄酶)作用而合成,并且在合成單鏈cDNA后,再用堿處理除去與其對應的RNA以后,以單鏈cDNA為模板,由依賴DNA的DNA聚合酶或依賴RNA的DN
互補DNA的合成步驟
1.cDNA第一鏈的合成所有合成cDNA第一條鏈的方法都要用依賴于RNA的DNA聚合酶(反轉錄酶)來催化反應,主要有兩個關鍵因素,一個是mRNA模板,另一個是反轉錄酶?[3]??。商品化反轉錄酶有從禽類成髓細胞瘤病毒純化到的禽類成髓細胞病毒(AMV)逆轉錄酶和從表達克隆化的Moloney鼠白血病病毒
互補DNA的合成步驟
1.cDNA第一鏈的合成所有合成cDNA第一條鏈的方法都要用依賴于RNA的DNA聚合酶(反轉錄酶)來催化反應,主要有兩個關鍵因素,一個是mRNA模板,另一個是反轉錄酶?[3]??。商品化反轉錄酶有從禽類成髓細胞瘤病毒純化到的禽類成髓細胞病毒(AMV)逆轉錄酶和從表達克隆化的Moloney鼠白血病病毒
互補脫氧核糖核酸的制備方法
制備互補DNA,往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質,則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分?。就胰島B細胞而論,此細胞含有高水平胰島素前體mRNA,后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體,如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原),則可從沉
單鏈互補DNA的定義
中文名稱單鏈互補DNA英文名稱single-strand cDNA;sscDNA定 義在逆轉錄酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)為模板合成與mRNA序列互補的單鏈DNA。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
雙鏈互補DNA的定義
中文名稱雙鏈互補DNA英文名稱double-strand cDNA;dscDNA定 義以雙鏈互補DNA為模板合成的雙鏈DNA。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
互補-DNA的基本信息
中文名稱互補 DNA英文名稱complementary DNA;cDNA定 義利用反轉錄酶以mRNA為模板合成的DNA。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞化學(二級學科)
互補DNA的基本信息
cDNA?是指互補(有時稱拷貝)DNA。特指在體外經過逆轉錄后與RNA互補的DNA鏈。與平常我們所稱謂的基因組DNA不同,cDNA沒有內含子而只有外顯子的序列。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遺傳工程方面廣為應用。
關于互補DNA的基本介紹
cDNA 是指互補(有時稱拷貝)DNA。特指在體外經過逆轉錄后與RNA互補的DNA鏈。與平常我們所稱謂的基因組DNA不同,cDNA沒有內含子而只有外顯子的序列? 。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遺傳工程方面廣為應用。
互補DNA第二鏈的合成方法介紹
(1)自身引導法。合成的單鏈eDNA3’端能夠形成一短的發夾結構,這就為第二鏈的合成提供了現成的引物。當第一鏈合成反應產物的DNA—RNA雜交鏈變性后利用大腸桿菌DNA聚合酶I Klenow片段或反轉錄酶合成eDNA第二鏈,最后用對單鏈特異性的S1核酸酶消化該環,即可進一步克隆。但自身引導合成法
細胞化學基礎互補-DNA
中文名稱:互補 DNA英文名稱:complementary DNA;cDNA定 義:利用反轉錄酶以mRNA為模板合成的DNA。應用學科:細胞生物學(一級學科),細胞化學(二級學科)
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段:①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段;②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段;③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下,用人工方法合成對應的基因片段;④從mRNA反轉錄產生cDNA。
質粒DNA的制備方法
有多種分離質粒的方法,如堿裂解法、煮沸裂解法、層析柱過濾法等。
DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
關于互補DNA的合成技術介紹
以Riboclone M-MLV CDNA合成技術為例。 Riboclone M—MLV cDNA合成系統采用M—MLV反轉錄酶的RNase H缺失突變株取代AMV反轉錄酶,使合成的cDNA更長。該系統的第一鏈合成使用M-MLV反轉錄酶,cDNA第二鏈合成采用置換合成法,采用RNaseH和DN
什么是DNA互補性?
互補性是人際吸引的規則之一,具體指雙方在交往時所產生的互相滿足的心理狀態。當交往雙方的需要和滿足途徑正好成為互補關系時,雙方會產生強烈的吸引力。如優柔寡斷的人往往喜歡和果斷的人在一起。除了互補性之外,相似性、熟悉與鄰近、個人特征等都對人際吸引有影響作用。
細胞化學詞匯單鏈互補DNA
中文名稱:單鏈互補DNA英文名稱:single-strand cDNA;sscDNA定 義:在逆轉錄酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)為模板合成與mRNA序列互補的單鏈DNA。應用學科:生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)?
細胞化學詞匯雙鏈互補DNA
中文名稱:雙鏈互補DNA英文名稱:double-strand cDNA;dscDNA定 義:以雙鏈互補DNA為模板合成的雙鏈DNA。應用學科:生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
DNA疫苗的制備方法和特點
DNA疫苗?又稱基因疫苗或核酸疫苗,將能編碼引起保護性免疫應答的病原體免疫原基因片段和質粒重組,重組體直接注入宿主機體,使體內持續表達該抗原,進而誘導出保護性體液免疫和細胞免疫的新型疫苗.這種核酸既是載體,又能在真核細胞中表達抗原,刺激機體產生特異而有效的免疫反應。優點:免疫效果好,可激發機體全面免
DNA分子雜交技術的原理堿基互補配對
怎么看出來是否雜交上,這個是要在探針上做標記(標記可以有很多種,生物的、熒光的、放射性的等等),雜交后是要洗脫的,只有這種特異性的雜交才被保留下來,再通過檢測探針上的標記來看出是否雜交上。比如上面的“鑰匙”,就像你用一串的“鑰匙”去試,但你可以先在要的那個“鑰匙”上做個標記,你不需要認識“鑰匙”
關于互補DNA的第一鏈的合成介紹
所有合成cDNA第一條鏈的方法都要用依賴于RNA的DNA聚合酶(反轉錄酶)來催化反應,主要有兩個關鍵因素,一個是mRNA模板,另一個是反轉錄酶。商品化反轉錄酶有從禽類成髓細胞瘤病毒純化到的禽類成髓細胞病毒(AMV)逆轉錄酶和從表達克隆化的Moloney鼠白血病病毒反轉錄酶基因的大腸桿菌中分離到的
在DNA轉錄成RNA時兩種方法的堿基互補配對原則
另外,在DNA轉錄成RNA時,有兩種方法根據堿基互補配對原則判斷:1)將模板鏈根據原則得出一條鏈,再將得出的鏈中的T改為U(尿嘧啶)即可;2)將非模板鏈的T改為U即可。如:DNA:ATCGAATCG (將此為非模板鏈);UAGCUUAGC(將此為模板鏈);轉錄出的mRNA:AUCGAAUCG(可看出