腦組織冰凍切片的步驟和注意事項
1.固定。大鼠或小鼠灌注取腦,取腦后用多聚甲醛浸泡固定,即能達到沖洗的目的,又不損害組織。2.脫水。先后用15%,20%,30%的PB蔗糖溶液 進行腦組織梯度脫水,腦組織沉下去就是脫水好了。3.冰凍切片,推薦瑞沃德冷凍切片機。取出腦組織,用OCT膠包埋,一層層的包埋,注意:不能有氣泡,否則營銷切片;不能留有空隙否則會凍壞腦組織。冰凍切片的溫度是-18℃~-25℃之間都可以的,腦組織最好是-18℃。......閱讀全文
腦組織冰凍切片的步驟和注意事項
1.固定。大鼠或小鼠灌注取腦,取腦后用多聚甲醛浸泡固定,即能達到沖洗的目的,又不損害組織。2.脫水。先后用15%,20%,30%的PB蔗糖溶液 進行腦組織梯度脫水,腦組織沉下去就是脫水好了。3.冰凍切片,推薦瑞沃德冷凍切片機。取出腦組織,用OCT膠包埋,一層層的包埋,注意:不能有氣泡,否則營銷切片;
冰凍切片的制作步驟
冷凍切片 1、取出組織支承器,放平擺好組織,周邊滴上包埋劑,速放于冷凍臺上冰凍,用吸熱器壓住組織,至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片(1~3分種)。 2、將冷凍好的組織塊,夾緊于切片機持承器上,啟動粗進退鍵,轉動旋鈕,將組織修平。 3、調好欲切的厚度,根據不同的組織而定,原則上是細胞密集的薄切,纖
組織病理實驗_冰凍切片
組織病理實驗廣泛應用于生物學、解剖學、病理學、腫瘤學、法醫學、臨床診斷學等實驗方法原理冰凍切片是指將組織在冷凍狀態下直接用切片機切片。它實際上是以水為包埋劑,將組織進行冰凍至堅硬后切片的。在冰凍切片前組織不經過任何化學藥品處理或加熱過程,大大縮短了制片時間。同時,由于此法不需要經過脫水、透明和浸蠟等
冰凍組織制備及切片實驗
實驗材料冰凍組織試劑、試劑盒異戊烷OCT多聚-L-賴氨酸儀器、耗材濾紙切片機加熱槽冰凍機細毛刷實驗步驟1. ?將一個50 ml 硬質玻璃燒杯浸入盛有液氮的燒瓶(或敞口聚苯乙烯盒)中冰凍,燒杯中加CryoKwik(或異戊烷)。2. ?在濾紙條一端以鉛筆注明標簽,用鑷子將樣品放于另一端。?3. ?保證C
冰凍組織制備及切片實驗
實驗材料?冰凍組織試劑、試劑盒?異戊烷OCT多聚-L-賴氨酸儀器、耗材?濾紙切片機加熱槽冰凍機細毛刷實驗步驟?1.? 將一個50 ml 硬質玻璃燒杯浸入盛有液氮的燒瓶(或敞口聚苯乙烯盒)中冰凍,燒杯中加CryoKwik(或異戊烷)。2.? 在濾紙條一端以鉛筆注明標簽,用鑷子將樣品放于另一端。?3.?
冰凍切片前的組織怎樣保存
冰凍切片是不需要固定的,冰凍切片新鮮取材后,應立刻放入冰凍切片機內切片。如不能立即切片,要放入液氮中速凍,然后放在-70度低溫冰箱內長期保存抗原性不會丟失。在手術臺上取下的組織放到冷凍機里面-20度左右凍成硬塊,制成切片用于快速診斷,該診斷僅作參考,應以石蠟診斷為主。
冰凍切片前的組織怎樣保存
冰凍切片組織可先固定后凍存,也可直接凍存,直接凍存一般采取液氮中速凍,然后轉入-20度保存,凍存組織應避免反復凍融,且盡快進行切片或用OCT包埋(包埋后可放置較長時間)。未包埋的組織在-20度長期保存的組織會逐漸脫水(比如肌肉),影響形態學觀察。
冰凍切片前的組織怎樣保存
冰凍切片組織可先固定后凍存,也可直接凍存,直接凍存一般采取液氮中速凍,然后轉入-20度保存,凍存組織應避免反復凍融,且盡快進行切片或用OCT包埋(包埋后可放置較長時間)。未包埋的組織在-20度長期保存的組織會逐漸脫水(比如肌肉),影響形態學觀察。
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。(2)冰凍切片的優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細
冰凍切片免疫熒光實驗步驟
1.組織用4%多聚甲醛固定6-8小時,轉至20%蔗糖溶液至組織沉底。2.冰凍切片8-10μm,推薦瑞沃德冷凍切片機,溫度穩定,切片質量高。室溫放置30分鐘以上防脫片,-20℃保存。從冰箱拿出的冰凍切片在室溫放置30分鐘以上再進行免疫熒光。3.1xPBS洗3次,每次3-5分鐘。4.用2%BSA室溫或3
冰凍切片免疫熒光實驗步驟
1.組織用4%多聚甲醛固定6-8小時,轉至20%蔗糖溶液至組織沉底。2.冰凍切片8-10μm,推薦瑞沃德冷凍切片機,溫度穩定,切片質量高。室溫放置30分鐘以上防脫片,-20℃保存。從冰箱拿出的冰凍切片在室溫放置30分鐘以上再進行免疫熒光。3.1xPBS洗3次,每次3-5分鐘。4.用2%BSA室溫或3
冰凍切片
實驗概要冰凍切片(frozen section)是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進行切片的方法。實驗步驟1. 冷凍切片的制作方法??? 1) 將恒冷箱冷凍切片機的速凍頭和箱內溫度調整到適宜的切溫度,一般情況下為-18~-25℃。??? 2) 在標本冷凍托上涂布一層冷凍包埋劑——OCT
組織免疫熒光是用石蠟切片還是冰凍切片
二者應該都是可以的,具體要看自身的實驗條件哪個操作更方便以及抗體的性質。看你的實驗要求,冰凍片要求較高(低溫環境,液氮,冰凍切片機,OCT包埋劑等等),石蠟片的制作就比較簡單,試劑也較便宜。另外看你購買的抗體適用于哪種片子免疫組化的話,一般大都使用石蠟切片。免疫熒光染色的話,都可以的,冰凍切片比較容
石蠟切片與冰凍切片
一、組織和細胞標本類型:(一) 組織標本類:1、 石蠟切片:組織形態保存好2、 冰凍切片:抗原性保存好(二)細胞標本類:1、組織印片 2、細胞培養片(細胞爬片) 3、細胞涂片二、組織取材1、腦組織和神經組織應采用灌注固定后,再進行后固定。2、組織取材注意事項:(1)標本新鮮:組織要求離體后30min
冰凍切片實驗技巧(四):脂肪組織的處理
脂肪組織無疑是冰凍切片者的絆腳石,道理很簡單脂肪不會結冰,把溫度降低讓脂肪變硬可以切出較薄的片子,但是這個溫度對同一組織中的其他成分來說顯得太低而不合適切片,當脂肪破碎影響切片時這個問題就變得明顯,下面是一些我的經驗總結。1.盡可能的削掉不需要的脂肪組織當我準備切淋巴結時,我會先檢查一遍,小心翼翼地
冰凍切片的應用
(1)在手術進行中,突然發現病人的病變與原診斷,原定手術方案不相符合,或者懷疑時,需要病理確定。 (2)了解淋巴結內是否有轉移的腫瘤細胞,或者轉移的程度,以利于確定是否需要徹底掃除淋巴結或者其它的治療措施。 (3)對于已確定為惡性腫瘤的患者,則需要了解其手術范圍是否足夠,上下切緣是否有殘存的
冰凍切片的定義
冰凍切片(frozen section)是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而多應用于手術中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,甲醇循環制冷冰凍切片法等。這些方法,隨著時代的變遷,科技的發展
免疫熒光操作步驟(漂片,冰凍切片)
實驗概要免疫熒光技術(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定
免疫熒光操作步驟(漂片,冰凍切片)
實驗概要免疫熒光技術(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定
石蠟切片、冰凍切片及振動切片的區別
一、石蠟切片??? 把修好的蠟塊裝在旋轉切片機上,即可進行切片(section)。切片必須保持切片刀銳利,切片厚度通常為5~7um,也可根據染色需要切成不同厚度,一般不旋轉式切片機超過10um。切好的蠟帶,放人40℃左右的溫水中將蠟片展平。良好的切片應無刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。切片如有上述
冰凍切片固定實驗
實驗材料 冰凍組織試劑、試劑盒 PFAPBS乙醇儀器、耗材 加濕盒實驗步驟 1. ?將承有切片的載玻片放入加濕盒中,加4%PFA覆蓋整個切片,蓋上加濕盒,如為預先未固定過的組織,則于室溫放置20 min,如是固定過的組織則放置5 min。2. ?吸去固定液,用毛細吸管或用噴水瓶以3×PBS沖冼切片,
冰凍切片固定實驗
實驗方法原理原位雜交中所用冰凍切片必須用多聚甲醛固定,然后再脫水。實驗材料冰凍組織試劑、試劑盒PFAPBS乙醇儀器、耗材加濕盒實驗步驟1. ?將承有切片的載玻片放入加濕盒中,加4%PFA覆蓋整個切片,蓋上加濕盒,如為預先未固定過的組織,則于室溫放置20 min,如是固定過的組織則放置5 min。2.
冰凍切片的制作技巧
這個主要看組織固定包埋技術和冰凍切片機性能吧,固定包埋因人而異,因為需要快速出診斷報告,這一點要求切片機的速凍效果好,機器能馬上進入工作狀態。這一點我覺得深圳瑞沃德廠家的冰凍切片機設計的很好,可以上班前自動喚醒(無需人員手動),上班了,機器也就可以馬上進入工作狀態。樣本快速制冷,2-3分鐘就可以了
普通組織石蠟包埋切片步驟
1、取材:新鮮組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出在通風櫥內用手術刀將目的部位組織修平整,將修切好的組織和對應的標簽放于脫水盒內。 2、脫水:將脫水盒放進吊籃里于脫水機內依次梯度酒精進行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無水乙醇I 30min
顯微冷凍切片機的使用和大(小)鼠腦組織切片操作實驗
冷凍切片機可以用于:(2)切制薄而均勻的組織片;(2)組織用堅硬的石蠟或其他物質支持,每切一次借切片厚度器自動向前(向刀的方向)推進所需距離,厚度器的梯度通常為1微米。實驗方法原理切制石蠟包埋的組織時,由于與前一張切片的蠟邊粘著,而制成多張切片的切片條。實驗材料大小鼠大腦試劑、試劑盒手術器械 顯微冷
顯微冷凍切片機的使用和大(小)鼠腦組織切片操作實驗
實驗材料 大小鼠大腦試劑、試劑盒 手術器械 顯微冷凍切片機 包埋劑儀器、耗材 大小鼠立體圖譜實驗步驟 1. ?安裝刀具,移上安全桿。調整切片機溫度到-20 ℃((右手邊up 和down 二個按鈕調節, up調高溫度, down,降低溫度)。 2. ?從-80 ℃冰箱取出腦組織在切片機或-20 ℃冰箱
徠卡冰凍超薄切片技術
?徠卡冰凍超薄切片技術是使樣品迅速冷凍,然后用冷凍切片機進行徠卡冷凍超薄切片。它省去了普通超簿切片法中繁雜的化學固定與包埋操作,在細胞化學研究中有著特殊的用途。為了很好保存形態結構,必須使游離水形成玻璃態的冰,防止產生冰晶。這就要求很高的冰凍速率(~度/秒),這對于傳熱性能差的生物材料來說是困難的。
冰凍切片免疫熒光
實驗原理抗原抗體結合主要試劑固定液、梯度蔗糖、磷酸鹽緩沖液、封閉液、一抗、熒光標記的二抗、DAPI、熒光抗淬滅封片劑主要設備冰凍切片機、熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡實驗材料組織切片實驗步驟切片提取新鮮組織置于4%多聚甲醛中固定;2.梯度蔗糖脫水:10%-20%-30%;3.冰凍包埋劑包埋并切片,切片
怎么切好冰凍切片
冰凍組織的取材,就是選擇好合適的組織塊,放在一個小的金屬托上進行速凍,凍到一定的硬度后,就在病理切片機進行切片。然后將切片放入酒精或者專有的固定液里固定,最后進行相應的染色及封片。再蓋上蓋玻片,貼上病理號標簽,這樣一張冰凍切片就制作完成了。
冰凍切片免疫熒光
實驗概要冰凍切片免疫熒光實驗原理抗原抗體結合主要試劑固定液、梯度蔗糖、磷酸鹽緩沖液、封閉液、一抗、熒光標記的二抗、DAPI、熒光抗淬滅封片劑主要設備冰凍切片機、熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡實驗材料組織切片實驗步驟切片1.提取新鮮組織置于4%多聚甲醛中固定;2.梯度蔗糖脫水:10%-20%-30%;3