關于檢測染色體和染色體組畸變—熒光原位雜交(FISH)技術的基本介紹
熒光原位雜交最早由Bauman(1980)建立，后由Lucas(1989)首先應用于染色體畸變分析。其原理是按檢測目標準備恰當的DNA序列作為探針，并用生物素標記，對載玻片上待測標本中的DNA雜交，最后通過雜交位點的熒光觀察染色體結構或數目的改變。應用特殊染色體和染色體某區域的熒光探針可在體內檢測4種類型的細胞遺傳學終點。1檢測中期細胞染色體畸變。2應用亞染色體區域的探針檢測間期染色體斷裂和非整倍體。3應用中心粒探針和/或抗著絲點抗體檢測微核的形成。Schriever-Schwemmet等利用CREST間接免疫熒光法，以及小鼠次要和主要衛星DNA探針，在小鼠骨髓細胞證明了受試物引起微核的來源。4哺乳動物精子非整倍體檢測。徐德祥(1999)用雙色FISH方法對丙烯腈接觸男工精子性染色體數目畸變進行了檢測，證明FISH技術用于檢測精子染色體數目畸變實驗結果穩定可靠。......閱讀全文
原位雜交與熒光原位雜交
?一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH)?是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛
原位雜交與熒光原位雜交
?一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH)?是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛
原位雜交與熒光原位雜交
一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH) 是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應
熒光原位雜交的熒光原位雜交
熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結
原位雜交儀原位雜交的意義
原位雜交：在研究DNA分子復制原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點，應用帶有標記的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質）DNA或R
原位雜交儀—原位雜交試驗（一）
收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養，到達所需要的發育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗，然后換成甲醇，在-20C 保存，待用（兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧水處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養，可阻斷色素的形成）
原位雜交儀—原位雜交實驗（二）
原位雜交第二天 1. 1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復使用十次左右）。 2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。 3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。 4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
原位雜交儀—原位雜交實驗（三）
原位雜交第三天 1） 用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，最后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。 2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置
FISH熒光原位雜交實驗（原位雜交）
1. 實驗目的??????? 通過實驗了解熒光原位雜交技術的基本原理和在生物學、醫學領域的應用。掌握原位雜交技術的操作方法，熟練掌握熒光顯微鏡的使用方法。2. 實驗原理??????? 熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺
熒光原位雜交實驗——熒光原位雜交技術
熒光原位雜交可應用于：（1）動植物基因組結構研究；（2）染色體精細結構變異分析；（3）病毒感染分析；（4）腫瘤遺傳學和基因組進化研究。實驗方法原理用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱
原位雜交儀—熒光原位雜交相關解釋
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule
原位雜交技術
導語我們常說，科學家也是藝術家，在明確真理探索科學的道路上，往往會創造出很多極具美感的藝術作品。所以今天小編為大家介紹的就是能做出美美圖的新技能。先欣賞一下美美的實驗結果圖~---Olson, B. D. and Downes, G. B.?---in situ Hybridization of w
原位雜交簡介
原位雜交是在分子生物學領域應用極為廣泛的實驗技術之一，是在研究生物體發育過程中的一種極為重要的分子遺傳學的研究方法。其英文名為in situ hybridization,其中in situ為拉丁文，原義是"in its natural position". 字面的意思理解就是說在其原來的天然的位置處
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（二）
5．洗膜 取出塑料袋，用剪刀剪開，小心取出濾膜，立即浸入盛有2×SSC和 0.5%SDS溶液的盤中，室溫下漂洗5min。再將濾膜移入2×SSC和0.1%SDS溶液中，室溫下洗滌15min（輕輕搖動）。然后將濾膜移入 0.1×SSC和0.5%SDS溶液中；68℃輕輕搖動保溫2h，更換緩沖液后繼
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（四）
（2）硝酸纖維素濾膜吸印。①將膠切成合適大小，切去右上角作為記號。②將膠放進盛有變性緩沖液（1.5mol/l NaCl, 0.5mol/L NaOH）的盤中輕搖動15min。③換到中和緩沖液（1mol/L Tris·HCl , pH8.0, 1.5mol/L NaCl）中輕搖動30min。④裁一張硝
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（五）
⑦60伏電泳過夜。 ⑧取出凝膠，水中浸泡2次，每次5min。 ⑨室溫下將膠浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增強轉印。 ⑩室溫下將膠浸到0.1mol/L Tris·HCl (Ph7.5)中45min，使膠中和。
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（六）
夾心雜交法可用濾膜和小珠固定吸附探針，使用小珠可更好地進行標準化試驗和更容易對小量樣品進行操作。Dahlen 等利用微孔板進行夾心雜交，可同時進行大量樣品檢測，他們先吸取DNA探針加到凹板中，然后用紫外線照射使其固定到塑料板上。用微孔板進行夾心雜交還可直接用于PCR技術。應用光敏生物標記探針
以菌落原位雜交為例介紹原位雜交技術
對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。將少數菌落轉移到硝酸纖維素濾膜上（1） 在含有選擇性抗生素的瓊
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（一）
是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應用于腫瘤生物學、血液病理學、遺傳、微生物學、細胞和分子生物學、神經內分
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（三）
（1）DAN斑點雜交①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用鉛筆在濾膜上標好位置，將DNA點樣于膜上。每個樣品一般點50μl（2～10μg DNA）。④將膜烘干，密封保存備用。（2）RNA斑點雜交：與上法類似，每個樣品至多加10μg總RNA（
熒光原位雜交實驗
?實驗原理熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體精細結構變異分析、
肽核酸原位雜交
肽核酸（peptide nucleic acids，PNA）是20世紀90年代初發現的新型DNA／RNA同類物，是一類人工合成的以電中性的肽鏈酰胺2—氨乙基甘氨酸組成的多聚酰胺鍵取代DNA中的戊糖磷酸二酯鍵骨架而形成的類似核苷酸的物質。像傳統的DNA序列那樣，PNA寡聚體的氨基末端相當于DNA的5’
原位雜交實驗步驟
原位雜交實驗步驟?一質粒制備1質粒的轉化和擴增1.1制備XL1-Blue感受態細菌1．?取400uL XL1-Blue菌種加入到含200ml LB培養基的錐形瓶中，37?℃、100rpm培養4h，離心，倒置，以冰冷的0.1 mol／L CaCl_2重懸細菌，冰浴30 min，離心，棄上清，倒置，再加
熒光原位雜交實驗
實驗方法原理 熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體精細結構變
原位雜交實驗步驟
原位雜交實驗步驟一質粒制備1質粒的轉化和擴增1.1制備XL1-Blue感受態細菌1．??取400uL?XL1-Blue菌種加入到含200ml?LB培養基的錐形瓶中，37?℃、100??rpm培養4h，離心，倒置，以冰冷的0.1?mol／L?CaCl_2重懸細菌，冰浴30?min，??離心，棄上清，倒
熒光原位雜交實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以探針直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上
RNA原位雜交實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 原位雜交的原理是含有互補序列（探針）的被標記的單鏈 DNA 或 RNA 片段在適當 的條件下與細胞的 DNA 或 RNA 雜交形成穩定的雜交體。無論是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC
原位雜交(含FISH)
??原位雜交組織化學常用試劑及處理 一、雜交前準備 （一）DEPC水是經DEPC處理過的滅菌蒸餾水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可滅活各種蛋白質，是RNA酶的強抑制劑。原位雜交在雜交及其以前的各步處理中，所有液體試劑都應經DEPC處理。方法是：取市售
原位雜交應用案例
對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。 將少數菌落轉移到硝酸纖維素濾膜上 （1） 在含有選擇
RNA熒光原位雜交
原位雜交：在研究DNA分子復制原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點，應帶有標記的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質)DAN或 RNA