Western實驗中內參基因的選擇及使用方法
Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候Western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、抗體問題啦（一抗有問題還是二抗有問題啦）……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達產物，確實是有一定的不確定性的。所以，嚴謹的 Western Blot實驗設計中要求有良好的參照體系，對實驗結果分析是非常有用。特別是當實驗出現問題時，借助參照體系很容易就可以查出問題所在，而不必抓耳撓腮怨天尤人。良好的參照體系通常包括分子量marker(用來確定蛋白條帶對應的分子量大小)、空白載體對照 (如果是誘導表達體系還應該有誘導前的對照)、已知量標準......閱讀全文
Western實驗中內參基因的選擇及使用方法
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Western實驗中內參基因的選擇及使用方法
Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候Western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。 期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳
血清western－blot怎樣選擇內參
由于血漿或血清中很難找到一個穩定表達的蛋白，常見的在組織中比較常用的內參蛋白如肌動蛋白，GAPDH等，嚴格講并不適合血漿或血清；可以考慮用立春紅染色 或考染做loading control（這種方法在不少文獻中都有報道，是大家認可的）Blood上有些文章 用的是立春紅染色做control
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。?期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳的內參為全蛋白
PCR實驗中內參基因的作用
1. 判斷樣品提取是否成功。假如你提取了總RNA然后再做逆轉錄得到cDNA，然后再去跑PCR發現沒有結果，是不是表示樣品中沒有你的目的基因呢？答案是：不一定。要根據使用同一模板跑出的內參基因的結果才可判斷。內參基因的CT在一個合理范圍（比如20左右）的前提下，才能說明樣品制備沒問題，在這個前提下，做
定量Western－Blot內參質控的掌握技巧
?Western Blot是生物修煉的一大實驗，現在不做定量Western Blot，都不敢自詡學霸的了，暗暗擦汗的有沒有？在討論如何從Western Blot中獲得定量數據之前，先定義一下我們所說的“定量”是什么意思是非常有用的，何為定量，必須符合下列準則：?? 使用一個定義的過程進行檢測，即We
western內參多條帶，是什么原因
western內參多條帶可能的原因有：抗體濃度過高；降低一抗、二抗的濃度。一抗的特異性不足；使用單克隆抗體。二抗的非特異性結合，不加一抗，其他操作不變，即可檢測出二抗的非特異性的條帶是否來自二抗的非特異性結合；此時需要重新選擇二抗。內參發生了降解，降解產物成為了一抗或二抗的新的抗原，尤其是在一抗或二
Western－Blot內參的選擇不容忽視
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。因為Western Blot操作相對簡單方便，既可以定性分析表達產物，同時還可以指示目的蛋白量的相對變化。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――
熒光定量PCR實驗中的內參基因
通常它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測基因的表達水平變化時常用它來做參照物。內參基因通常是持家基因（house-keeping gene）因為其表達水平受環境因素影響較小，而且在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續表達變化很小。常用的內參基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti
免疫印跡western實驗中內參蛋白的選擇和注意事項
免疫印跡western實驗中內參基因的選擇和注意事項 Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。 雖然，順利的時候Western blot做
免疫印跡western實驗中內參蛋白的選擇和注意事項
Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候Western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、
什么是內參基因
這個概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要檢測某個基因的表達，降低或者提高，但是當你得出結果以后，你并不知道是它本身的表達降低/提高了，還是你操作過程中造成的誤差（比如提RNA時的損失），所以這個時候需要同時檢測另外的基因作為參照。這個基因就是內參基因，這類基因是生物體或者細胞中穩定表達的基因，
目的基因的Ct值小于內參基因，這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
目的基因的Ct值小于內參基因，這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
western－blot電泳時內參上樣量怎么確定
內參一般是指待測樣品中含有的一個表達水平穩定的蛋白質，而不是與待測樣品相區分的另外一種樣品。樓主所說的內參是否與其他的什么概念混淆了？如果給更具體的信息，我可以繼續回答。Marker上樣量同兩個因素有關，一個是產品本身的濃度，這方面不需要知道確切的濃度，只需要看廠商的推薦用量即可；另一個是膠的性質，
western－blot－能做出內參－為什么沒有目的條帶
western blot能做出內參 沒有目的條帶就說明至少在操作上是沒有問題的同時，試劑，凝膠，膜，抗體等等都沒有問題那么最大的可能就是抗體未能識別出目的蛋白，故未能做出目的條帶也有可能是組分內的目的蛋白總量太少，未能達到檢出限
real－time－PCR實驗為什么要使用內參基因
這個是根據定量PCR算法決定的，如果是相對定量，就需要內參，內參主要是使樣品均一化，你做實驗的時候，可能提取RNA時所用的樣品是相同的，反轉錄時所用的mRNA的量是相同的，做定量PCR時所加的cDNA量也是相同的。但是你的樣品是新長的部分，還是老的部分？反轉錄時是加相同的體積還是相同打質量，這些對結
western中目標抗體出現，內參出不來是為什么
那就算你的內參抗體有問題了，你們購買的哪家的產品呢？放置了多久，既然你自己的抗體可以出條帶，那么組織提取的蛋白肯定是沒有問題的，就只有是你的內參抗體有問題了
western內參都曝不出來是怎么回事
如果上樣量足夠而你Western操作過程沒有問題的話，連內參都出不來那多半是抗體的原因了，你可以逐一排除下是一抗還是二抗的問題，另外就是AB液是不是過期了，兩種試劑混合后最好半小時內使用完畢。
用核蛋白做western，選什么蛋白做內參照
當實驗樣品中只是核蛋白，而不是細胞總蛋白提取液時，可以用組蛋白H（Histone H)，或者核纖層蛋白(nuclear lamina protein)等為核內參抗體。除了這些，其它常見的核蛋白內參還有K70, K80, Lamin A和B
進口內參抗體——在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子
在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？進口內參抗體——在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？???? 要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性
進口內參抗體：在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題，因為擺在面前的只有兩種選擇，β-actin和GAPDH，甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因，對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已，至于為什么要選這兩種，還有沒有其他
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題，因為擺在面前的只有兩種選擇，β-actin和GAPDH，甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因，對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已，至于為什么要選這兩種，還有沒有其他的內參，人們的回答往往
在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子
Western實驗步驟
一、樣品制備?對于Western Blotting實驗而言，樣品處理是關鍵步驟之一，獲得的蛋白樣品必須均質、可溶，并解離成單個多肽亞基，且盡量減少相互間的聚集，使其最終僅依賴本身的分子量大小進行分離。當目標蛋白的含量很低時，需要選取目標蛋白含量較高的組織或細胞器（如核抽提物），或者通過免疫沉淀等方式
Western－Blot中抗體的選擇
Western Blot又稱為蛋白質印跡，是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的基于抗體抗原之間特異免疫反應的一種定量或定性檢測蛋白的實驗方法。基本原理：聚丙烯酰胺凝膠電泳將不同分子量的蛋白質樣品分離，分離后的蛋白被轉移到固相支撐物（雜交膜）上，抗體特異性識別目標蛋白，通過酶促反應或者化學發光等
內參基因拷貝數正常范圍
基因組DNA拷貝數變化在許多人類疾病如腫瘤、遺傳性疾病的發生發展中起重要作用，也是這些疾病的細胞遺傳學表現。染色體顯帶已被運用了幾十年，具有其高度的可靠性并成為染色體分析的金標準，但其分辨率低(約為5～10Mb)，需要中期細胞，操作費時。