DNA的酶學操作

DNA的酶學操作

DNA的酶學操作DNA Modifying Enzymes?(Michael Blaber)Introduction to bacterial restriction/modification system. It provides very useful background knowledge

質粒DNA的酶切原理和操作步驟

1．目的學會用限制性內切酶切割質粒DNA。2．原理II型限制性內切酶能識別雙鏈DNA內部的特殊序列并在識別位點處將雙鏈切斷，形成粘性末端或齊平末端，通過電泳酶切后的DNA混合物能夠確認和分離酶切片段。3．器材旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml微量離心管，雙面微量離心管架，水漂，恒溫水

DNA的酶切實驗原理和操作步驟

一、實驗目的 本實驗學習、了解限制性內切酶的特性，學習根據具體目的設計適當的酶切體系并實施之。 二、實驗原理 利用限制性內切酶切割DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一。成功的酶切為后續工作提供了有效的實驗材料。限制性內切酶是細菌體內限制修

可以DNA結合的酶DNA連接酶

DNA連接酶：是能夠使用來自ATP或NAD的化學能將先前切割或斷裂的DNA鏈聚集在一起的酶。連接酶在DNA滯后鏈復制中特別重要，因為它們將岡崎碎片組合成DNA鏈。連接酶在DNA修復和基因重組中也發揮重要作用。

DNA的酶切與連接——質粒DNA酶切

DNA的連接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸內切酶切割DNA和利用DNA連接酶連接DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一；（2）成功的酶切和有效的連接為后續的外源基因進入宿主細胞進行表達提供了有效的實驗材料。實驗方法原理限制性內切酶能夠特異性地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附

DNA酶的簡介

　　Skaggs 化學生物學院的 Gerald F. Joyce 教授領導的研究組，利用體外演化的方法將RNA 酶轉化成了DNA酶，這將有助于了解有關生命的一個最基本問題，即生命如何由RNA世界演化為今天的以DNA和蛋白質為基礎的細胞形式。　　新研究顯示RNA酶要轉化成具有同等功能的為 DNA酶，僅

結合DNA的酶

核酸酶和連接酶：核酸酶是能夠切割DNA鏈的酶，因為它們催化磷酸二酯鍵的水解。從位于DNA鏈末端的核苷酸開始水解DNA的核酸酶稱為核酸外切酶。另一方面，直接切入DNA鏈的那些是內切核酸酶。分子生物學中使用最廣泛的核酸酶，稱為限制性內切酶，以切割特定序列的DNA。在自然界中，這種酶通過在進入細菌細胞時消

DNA酶切

一、 DNA酶切反應?　　1、 將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號,用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl,再加入重蒸水使總體積為19μl,將管內溶液混勻后加入1μl酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻,也可用微量離心機甩一下,使溶液集中在

DNA酶試驗

DNA酶試驗是檢驗技師考試的內容，醫學教育網搜集整理相關內容供大家參考。（1）原理：某些細菌產生DNA酶，可使長鏈DNA水解成寡核苷酸鏈。因為長鏈DNA可被酸沉淀，寡核苷酸鏈則溶于酸，所以當在菌落平板上加入酸后，會在菌落周圍出現透明環。（2）培養基：0.2%DNA瓊脂平板。（3）方法：將被檢菌點種于

DNA酶切

一、 DNA酶切反應?　　1、 將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號,用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl,再加入重蒸水使總體積為19μl,將管內溶液混勻后加入1μl酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻,也可用微量離心機甩一下,使溶

DNA酶試驗

　(1)原理：某些細菌能產生DNA酶，可使長鏈DNA水解成為寡核苷酸鏈。因為長鏈DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸則溶于酸。故在DNA瓊脂平板上加鹽酸后，可在菌落周圍形成透明環。　　(2)培養基：0.2%DNA瓊脂平板。　　(3)方法：在DNA瓊脂平板上點種待檢菌，35℃孵育18~24h，用1mol/L鹽

幾丁質酶的酶學性質

微生物產幾丁質酶的分子量一般在19～110kD之間，不過有的可達到134759kD，大多數微生物的幾丁質酶作用最適pH值在4～6之間，酶穩定的pH范圍一般在4～11之間，等電點一般在pH3.6～8.6之間，作用的最適溫度多為50～60℃，溫度過高，酶活力容易喪失。金屬離子如Ag+、Fe3+、Cu2+

DNA的酶切實驗

采用粘末端連接必須對目的DNA分子和載體分子進行酶切以獲得相應的粘末端進行連接。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。單酶切操作比較簡單，但雙酶切如果兩種酶所用緩沖液成分不同（主要是鹽離子濃度不同）或反應溫度不同，這時可以采用如下措施解決：1）先用一種酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一種酶切；2

DNA聚合酶及DNA連接酶的功能和區別

DNA聚合酶，以已有的核酸序列作為模板，將4種脫氧核苷酸（A、T、G、C）按照模板的堿基排列順序，以“堿基互補原則”依次連接，聚合成為一條新的DNA鏈。 DNA連接酶，是將DNA片段上的缺刻連接起來的酶。? ? 一、DNA聚合酶? ? （一）DNA聚合酶I?? ? DNA聚合酶I（DNA pol

可以DNA結合的酶核酸酶

可以DNA結合的酶聚合酶

聚合酶：聚合酶是從核苷三磷酸合成多核苷酸鏈的酶。它們通過向鏈上存在的先前核苷酸的3'-OH添加核苷酸起作用。因此，所有聚合酶都以5' - 3'方向起作用。DNA復制需要DNA依賴的DNA聚合酶，實現DNA序列的完美拷貝。有些DNA聚合酶具有校對功能，能夠檢測含氮堿基之間的錯配

植酸酶的酶學性質

和其他酶類一樣，植酸酶活力受溫度、環境pH、激活劑、抑制劑、作用時間、底物及產物濃度等多種因素的影響。根據最適pH值的不同，Oh等（2004）將植酸酶（磷酸酯酶）分為兩個亞類：酸性植酸酶和堿性植酸酶。飼料工業中常用的是酸性植酸酶（也稱作組氨酸酸性植酸酶)。這種植酸酶催化活性較強，有最適的酸性pH值（

DNA連接酶(DNA－ligase)介紹

DNA連接酶是1967年在三個實驗室同時發現的。它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-PO4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補鏈配對結合的(T4DNA連接酶除外)，而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA

DNA重組（DNA－recombination）技術：工具酶

一、限制性內切酶限制性內切酶（restriction endonucleases，RE）是其中最重要的工具酶之一。它是一類核酸水解酶，能識別和切割雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列。（一）命名原則限制性內切酶大多從細菌中發現，根據來源進行命名，限制酶的第一個字母（大寫，斜體）為宿主菌的屬名，第二、第三

DNA的酶切與連接——DNA片段連接

實驗方法原理核酸片段可以通過連接酶的作用連接起來而獲得重組分子。實驗材料λDNA EcoT14I：由11條DNA片段組成試劑、試劑盒T4 DNA連接酶及其配套的10×連接緩沖液 0.5×TBE電泳緩沖液 6×Loading Buffer Goldview 瓊脂糖儀器、耗材電泳儀 水浴鍋 移液器 微波

診斷酶學

本世紀初臨床就開始測定體液中的酶來診斷疾病，如Wohlgemuth早在1908年就測定尿液中淀粉酶（AMY）以診斷急性胰腺炎；30年代臨床測定堿性磷酸酶（ALP）用于診斷骨骼疾病，隨后發現不少肝膽疾病特別在出現梗阻性黃疸時此酶常明顯升高。這些酶成為當時臨床實驗室的常規測定項目，直到60年代ALP仍

診斷酶學

本世紀初臨床就開始測定體液中的酶來診斷疾病，如Wohlgemuth早在1908年就測定尿液中淀粉酶（AMY）以診斷急性胰腺炎；30年代臨床測定堿性磷酸酶（ALP）用于診斷骨骼疾病，隨后發現不少肝膽疾病特別在出現梗阻性黃疸時此酶常明顯升高。這些酶成為當時臨床實驗室的常規測定項目，直到60年代ALP仍是

診斷酶學

診斷酶學：本世紀初臨床就開始測定體液中的酶來診斷疾病，如Wohlgemuth早在1908年就測定尿液中淀粉酶（AMY）以診斷急性胰腺炎；30年代臨床測定堿性磷酸酶（ALP）用于診斷骨骼疾病，隨后發現不少肝膽疾病特別在出現梗阻性黃疸時此酶常明顯升高。這些酶成為當時臨床實驗室的常規測定項目，直到60年代

DNA酶切反應

一、 DNA 酶切反應1、將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號，用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl，再加入重蒸水使總體積為19μl，將管內溶液混勻后加入1μl酶液，用手指輕彈管壁使溶液混勻，也可用微量離心機甩一下，使溶液集中在管

診斷酶學：淀粉酶

淀粉酶(amylase)一般作用于可溶性淀粉、直鏈淀粉、糖元等α－1，4-葡聚糖，水解α－1，4-糖苷鍵的酶。分類根據作用的方式可分為α-淀粉酶（EC3．2．1．1．）與β-淀粉酶（EC3．2．1．2．）。（1）α-淀粉酶廣泛分布于動物（唾液、胰臟等）、植物（麥芽、山萮菜）及微生物。微生物的酶幾乎都

植酸酶植酸酶的酶學性質

和其他酶類一樣，植酸酶活力受溫度、環境pH、激活劑、抑制劑、作用時間、底物及產物濃度等多種因素的影響。根據最適pH值的不同，Oh等（2004）將植酸酶（磷酸酯酶）分為兩個亞類：酸性植酸酶和堿性植酸酶。飼料工業中常用的是酸性植酸酶（也稱作組氨酸酸性植酸酶)。這種植酸酶催化活性較強，有最適的酸性pH值（

異淀粉酶的酶學特性

微生物來源的異淀粉酶為誘導型胞外酶。酵母、細菌和某些放線菌均能產生異淀粉酶，但不同來源的異淀粉酶對于底物作用的專一性有所不同，對于各種不同聚合度的支鏈淀粉具有不同的分解能力。酶作用的最適溫度和最適pH環境及金屬離子對酶的影響都有差異。一般而言，酵母異淀粉酶最適pH為6～6.8，最適溫度為20～25℃

植酸酶的酶學性質介紹

和其他酶類一樣，植酸酶活力受溫度、環境pH、激活劑、抑制劑、作用時間、底物及產物濃度等多種因素的影響。根據最適pH值的不同，Oh等（2004）將植酸酶（磷酸酯酶）分為兩個亞類：酸性植酸酶和堿性植酸酶。飼料工業中常用的是酸性植酸酶（也稱作組氨酸酸性植酸酶)。這種植酸酶催化活性較強，有最適的酸性pH值（

植酸酶的酶學性質研究

植酸酶是催化植酸及其鹽類水解成肌醇和磷酸的一類酶的總稱[1]。添加植酸酶能夠顯著提高植物性飼料中磷的利用率，減少飼料中無機磷的添加量以及動物糞便中無機磷的排出，降低植酸磷的抗營養作用，促進動物生長發育，減輕環境的磷污染，提高畜牧生產和生態效益[2]。隨著飼料工業的發展,植酸酶作為一種新型的飼料添加劑

DNA片斷的酶切實驗

限制性內切酶是一類能識別雙鏈DNA分子中特異核苷酸序列的DNA水解酶,這類酶的發現和應用可以用于以DNA重組為基礎的生物工程技術。實驗方法原理酶切指采用粘末端連接必須對目的DNA分子和載體分子進行酶切以獲得相應的粘末端進行連接。實驗材料DNA片段試劑、試劑盒TE緩沖液儀器、耗材離心機恒溫水浴取液器電