臍靜脈內皮細胞培養方法1
一、試劑和緩沖液配制1、胎牛血清(氯化十六烷基吡啶)(1)解凍胎牛血清(2)在56℃加熱30分鐘(脫補體作用,蓋上瓶)(3)取25ml上述液體放在無菌的50ml的falcon里分餾(4)在-20℃冰凍餾份2、磷酸鹽緩沖液(PBS)(1)無鈣鎂離子的100ML的PBS(10×)(生命技術)(2)900ML蒸餾水(3)2克葡萄糖(4)在無菌的FALCON里過濾,分餾,在-20℃冰凍3、膠原蛋白酶(0.2%在PBS溶液里)(1)把0.2克的膠原蛋白酶溶解于100ML的PBS溶液里(2)在暗箱(鋁箔)里混合10分鐘(3)用氫氧化鈉1N調整溶液PH值至7.40(4)過濾(0.22U)(5)分餾和冰凍在-20℃4、保存和運輸臍帶的緩沖液(1)PBS 50ML(2)多粘菌素E,抗敵霉素[多肽類抗生素] 1ML(3)青霉素G 1ML5、培養基(1)M199“stock”M199 Earle 10× 100ml,蒸餾水 900ml(2)M199“......閱讀全文
臍靜脈內皮細胞培養方法1
一、試劑和緩沖液配制1、胎牛血清(氯化十六烷基吡啶)(1)解凍胎牛血清(2)在56℃加熱30分鐘(脫補體作用,蓋上瓶)(3)取25ml上述液體放在無菌的50ml的falcon里分餾(4)在-20℃冰凍餾份2、磷酸鹽緩沖液(PBS)(1)無鈣鎂離子的100ML的PBS(10×)(生命技術)(2)900
臍靜脈內皮細胞培養方法2
(2)術前準備取一根臍帶(離體3個小時內,平均1小時,剪去夾傷部位)2個50ML注射器,1個30ML注射器和1個10ML注射器1個止血鉗,2根插管,14號線2CM長,消毒巾,消毒手術刀和無菌手套手術區域準備:一塊床單和無菌手套封套3 臍帶手術操作和培養(1)用手術刀整齊切斷臍帶兩端(2)靜脈(口徑最
HUVEC人臍靜脈內皮細胞培養要點
1984年,HUVEC細胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan從一段長約10-20cm的人正常臍帶靜脈中獲取、建立。SetsukoShioda等人研究發現,HUVEC細胞株18-30代的倍增時間為23.5個小時,24-27代的倍增時間為67個小時,27-30代的倍
HUVEC人臍靜脈內皮細胞培養要點
1984年,HUVEC細胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan從一段長約10-20cm的人正常臍帶靜脈中獲取、建立。SetsukoShioda等人研究發現,HUVEC細胞株18-30代的倍增時間為23.5個小時,24-27代的倍增時間為67個小時,27-30代的倍
HUVEC人臍靜脈內皮細胞培養要點
1984年,HUVEC細胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan從一段長約10-20cm的人正常臍帶靜脈中獲取、建立。SetsukoShioda等人研究發現,HUVEC細胞株18-30代的倍增時間為23.5個小時,24-27代的倍增時間為67個小時,27-30代的倍
正常人臍靜脈原代內皮細胞培養
PriCells -? 正常人臍靜脈原代內皮細胞培養一、實驗試劑1、培養基:?PriCells?Medium?+?10%?FBS?+?1%?P/S?+?PriCells?Supplement2、凍存液:?PriCells?Medium?+?20%?FBS?+?10%?DMSO3、洗滌液:?1?×?P
臍靜脈內皮細胞傳代培養方法
Sciencell公司的人臍靜脈內皮細胞(貨號#8000、HUVEC)是科研實驗中常用到的內皮細胞,當人臍靜脈內皮細胞達到80-90%融合時,需要對人臍靜脈內皮細胞進行傳代培養。傳代培養方法:1.準備培養瓶:用纖維粘連蛋白(貨號#8248、BPF)以2ug/cm2包被培養瓶,包被時間為37度一小時或
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養1 ).?將15-20cm長的新生兒臍帶放入無菌的PBS溶液中儲存。(注:4℃下最多貯存24小時,室溫下不超過6小時,否則廢棄)2 ).?用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中,用無菌的PBS溶液沖洗3-5次,將污血沖洗干凈為止。3 ).?用手術鉗夾緊臍帶下端,加入15m
人臍靜脈內皮細胞的介紹
人臍靜脈內皮細胞(英Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)在進行血管內皮細胞實驗時,通常選用的細胞模型為人臍靜脈內皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,簡稱HUVECs)。而不是直接采用靜脈血管內皮細
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)可用于:(1)作為體外實驗模型細胞;(2)研究血管內皮細胞的生物學特性及其與各種疾病的關系。實驗方法原理本實驗采用新鮮的健康產婦新生兒臍帶,采用膠原酶Ⅰ型用消化分離得到臍靜脈內皮原代細胞。膠原酶是最理想的血管內皮細胞分離酶,對細胞間質有較強的消化作用,能使上皮細胞與膠原
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養
實驗材料 新生兒臍帶試劑、試劑盒 PBS膠原酶M199培養基胰酶EDTADMEM培養基儀器、耗材 針頭手術鉗離心管低溫離心機彎管明膠恒溫培養箱顯微鏡實驗步驟1. 將15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的PBS 溶液中儲存。(注:4℃下最多貯存24 小時,室溫下不超過6 小時,否則廢棄)2. 用一個
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養
1. 將 15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的 PBS 溶液中儲存。(注:4℃下最多貯存 24 小時,室溫下不超過 6 小時,否則廢棄)2. 用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中,用無菌的 PBS 溶液沖洗 3-5 次,將污血沖洗干凈為止。3. 用手術鉗夾緊臍帶下端,加入 15ml 的膠原酶(1mg
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養
人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養?1. 將 15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的 PBS 溶液中儲存。(注:4℃下多貯存 24 小時,室溫下不超過 6 小時,否則廢棄)?2. 用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中,用無菌的 PBS 溶液沖洗 3-5 次,將污血沖洗干凈為止。?3. 用手術鉗夾緊臍帶
正常人臍靜脈內皮細胞的培養
正常人臍靜脈內皮細胞的培養 實驗材料: 1. 嬰兒臍帶; 2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2; 3. 培養用液:M199培養液(含20%小牛血清);0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA(1:
正常人臍靜脈內皮細胞的培養
實驗材料:1.?嬰兒臍帶;2.?不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;3.?培養用液:M199培養液(含20%小牛血清);0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA(1:1,V:V)混合消化液;D-Hanks液、100IU/ml青霉素和1
臍靜脈內皮細胞相關實驗應注意事項
臍靜脈內皮細胞作為科研工作者很多相關實驗要用到的產品在近年來受到了市場的熱烈追捧。而進行相關實驗的前期準備和對臍靜脈內皮細胞產品的選擇及處理都是尤為重要的,這需要消費者在各個方面都要做到謹慎而嚴密。下面小編就為各位介紹一下臍靜脈內皮細胞相關實驗應注意哪些事項。 一、注意做好實驗前準備科研工作者在做臍
人臍靜脈內皮細胞的形態學觀察和鑒定方法
人臍靜脈內皮細胞爬片準備:細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態及生長特征,并作相差攝影,同時進行常規HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法,在6孔培養板中放置載玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液,待細胞貼壁后,取出載玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖
血管內皮細胞的分離和培養_分離人臍靜脈內皮細胞
實驗方法原理本方法是由 Jaffe 等 [ 1973 ] 的方法改寫的。實驗材料D-PBSA胰蛋白酶EDTA人臍帶膠原蛋內酶H冷的新生小牛血試劑、試劑盒Hank平衡鹽溶液HBSS PSG70%乙醇HUVRC生長培養液儀器、耗材培養瓶手術刀和22號刀片手術針20ml注射器鱷魚夾動脈夾尖頭剪棉紙鋁箔塑料
人臍靜脈內皮細胞分離培養儀器試劑和操作步驟
溶液以及器材:1、用RPMI-1640配I型膠原酶 0.1g/100ml2、配三抗:青霉素:100ku/L鏈霉素:100ku/L慶大霉素:100ku/L3、培養液(M199+ECGS[3ug/ml]+15%胎牛血清)有EGF可以適當加點10ng/ml4、大瓶生理鹽水5、廣口瓶(臍帶數+1)6、止血鉗
從臍靜脈分離干細胞
試劑和材料:1. 培養基:完全LG-DMEM:含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM,添加10%熱滅活胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;2. PBSA;3. 胰蛋白酶,0.05%,含EDTA;4. 膠原酶A,0.1%用PBSA配制;5. 培養瓶;6. 導管;實驗方法:1.
內皮細胞培養以人臍帶靜脈灌流消化法的簡介
1、產后新鮮臍帶,無菌剪取 10—15 厘米長一段,如不能立即培養,可于 12 小 時內保存于 4℃。 2、用三通注射器吸取溫 PBS 液注入臍靜脈中洗去殘血,在入口處用線繩扎緊, 以防液體返流。 3、用血管鉗夾緊臍帶一端,從另一端向臍靜脈中徐徐注入濃度為 0.1%的粗制膠原酶,充滿血管,消
從臍靜脈分離干細胞操作步驟
從臍靜脈分離干細胞試劑和材料:培養基:完全LG-DMEM:含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM,添加10%熱滅活胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;2.A;3.胰蛋白酶,0.05%,含EDTA;4.膠原酶A,0.1%用A配制;5.培養瓶;6.導管;實驗方法:在正常分娩后6
上皮細胞類培養實驗_內皮細胞培養實驗
實驗方法原理內皮細胞易于從血管分離進行培養成單層細胞,對研究內皮細胞再生生、腫瘤促血管生長因子(TAF)等有很大應用價值。人內皮細胞培養可應用人臍帶臍靜脈、動物大動脈等,用灌流消化法獲取細胞最為簡便。實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶消化液PBS儀器、耗材注射器離心管培養基實驗步驟1. ?取產后的新鮮臍
胎兒臍動脈舒張期臍血流缺失病例報告1
隨著社會經濟水平及圍產醫學的不斷發展,圍產兒的預后越來越受到重視,利用及時、高效的宮內監測手段,及時發現、及時干預,以便選擇最佳的分娩時機和分娩方式改善妊娠結局。胎動計數、胎心電子監護是目前比較常用的監護方式,但對于反映胎兒的宮內情況存在一定的局限性。彩色多普勒超聲的發展,已能夠監測宮內胎兒臍血流,
人臍靜脈細胞HUVEC該如何分析檢測?
? 人臍靜脈細胞HUVEC是從臍靜脈分離的原代細胞,這些細胞是用于研究內皮細胞的模型系統。它們用于研究缺氧,炎癥,氧化應激,感染,正常和與腫瘤相關的血管生成。細胞因子(例如TNF-α和IFN-γ)誘導內皮細胞激活(炎癥反應)并導致細胞粘附分子(例如VCAM-1/CD106)的上調,可以通過熒光標記的
正常角膜內皮細胞培養
正常角膜內皮細胞培養實驗材料:1.?角膜材料:可以取自人眼、兔眼或者牛眼,人眼材料最好來自胎兒;2.?清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;3.?特殊器械:虹膜恢復器;4.?消毒液:1:5000的升汞溶液與100IU/ml的慶大霉
血管內皮細胞培養
研究人內皮細胞培養以人臍帶靜脈灌流消化法最為簡便,其法如下:1、產后新鮮臍帶,無菌剪取10—15厘米長一段,如不能立即培養,可于12小時內保存于4℃。2、用三通注射器吸取溫PBS液注入臍靜脈中洗去殘血,在入口處用線繩扎緊,以防液體返流。3、用血管鉗夾緊臍帶一端,從另一端向臍靜脈中徐徐注入終濃度為0.
臍帶和臍血來源干細胞的培養實驗_從臍靜脈分離干細胞
實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶培養基儀器、耗材導管實驗步驟(a)在正常分娩后6?12h內收集和處理臍帶。(b)在臍靜脈內插入導管,用PBSA完全地洗2次。(c)夾住遠端臍帶。(d)用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈。(e)夾住近端臍帶。(f)將臍帶在37℃孵育20min。(g)輕輕按摩臍帶,收集含有內皮和
血管內皮細胞原代培養(人臍帶靜脈灌流消化法)
內皮細胞易于從大血管分離培養成單層細胞,對于研究內皮細胞再生、腫瘤促血管生長因子(tumor angiogenesis factor,TAF)等有很大價值。研究人內皮細胞培養以人臍帶靜脈灌流消化法最為簡便,其法如下:1、產后新鮮臍帶,無菌剪取10—15厘米長一段,如不能立即培養,可于12小時內保存于
人臍動脈平滑肌細胞培養實驗
消化法 貼塊法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 運用消化法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養,并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。