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十年代巴斯德畢赤酵母曾被用于生產單細胞蛋白（SCP），有很好的發酵基礎，菌體密度可達100g/L干重。其生長培養液的組分包括無機鹽、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉價而無毒。它能在以甲醇為唯一碳源的培養基中快速生長，其中醇氧化酶AOX——甲醇代謝途徑的關鍵酶可達細胞可溶性蛋白的30%。而在葡萄糖、甘油或乙醇作為碳源的培養細胞中則檢測不到AOX。AOX的合成是在轉錄水平調控的。其基因啟動子具有明顯的調控功能，可用于調控外源基因的表達。此調控作用是由一般碳源抑制/解抑制及碳源特殊誘導又重機制控制的。外源基因在甲醇以外的碳源中處于非表達狀態，而在培養液中加入甲醇后，外源基因即被誘導表達。巴斯德畢赤酵母中存在著一種稱為微體的細胞器，其中大量合成過氧化物酶，因此也稱為過氧化物酶體。合成的蛋白質貯存于微體中，可免受蛋白酶的降解，且不對細胞產生毒害。......閱讀全文
十年代巴斯德畢赤酵母曾被用于生產單細胞蛋白（SCP），有很好的發酵基礎，菌體密度可達100g/L干重。其生長培養液的組分包括無機鹽、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉價而無毒。它能在以甲醇為唯一碳源的培養基中快速生長，其中醇氧化酶AOX——甲醇代謝途徑的關鍵酶可達細胞可溶性蛋白的30%。而在葡萄糖、甘
實驗概要本實驗介紹了畢赤酵母的轉化方法。主要試劑1. 轉化當天，配制下列試劑：存于4度5% SDS溶液RD(Regeneration Dextrose) 融化瓊脂100ml2. 溶液：轉化試劑40%PEG：用水配制40%(w/v)PEG3350(試劑純)CaT：20mMTris pH7.5，20mM
實驗概要本實驗介紹了畢赤酵母電轉化方法。該方法無需產生去壁細胞，是產生畢赤酵母重組子的簡便方法。與去壁細胞效率相似。實驗步驟1. 細胞準備：?? 1) 在含5mlYPD 的50ml 離心管中，培養畢赤酵母，30 度過夜。?? 2) 取0.1-0.5ml 過夜培養物，接種含500ml 新鮮培養基的2L
實驗概要本文介紹了重組畢赤酵母目的基因表達的方法及條件，為畢赤酵母表達因素給予指導，但對于任何表達系統，最優化條件因表達蛋白的特征而不同。實驗步驟1. Mut 胞內或分泌表達：為檢測表達條件是否有效，可培養GS115β-gal (Mut )(胞內表達-半乳糖苷酶)。親代載體轉化GS115 或KM71
實驗概要本文介紹了畢赤酵母LiCl 轉化方法。該程序是電轉化的替代方法。轉化效率為102-103cfu/ug線性化DNA。主要試劑溶液準備：不能用醋酸鋰，一定要用氯化鋰1. 用無菌去離子蒸餾水配制1M LiCl，過濾除菌，用無菌水稀釋2. 用無菌去離子蒸餾水配制50%PEG(3350)，過濾除菌，存
自從1987年Cregg等首次用巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）作為宿主表達外源蛋白以來,作為一種新的高效的表達系統，畢赤酵母越來越引起人們的重視，到1995年，已有四十多種外源蛋白在該宿主菌中獲得表達。而最近幾年每年報道的在畢赤酵母中表達的外源基因就有幾十種，且一年比一年多，與其它
Pichia.pastoris酵母菌體內無天然質粒，所以表達載體需與宿主染色體發生同源重組，將外源基因表達框架整合于染色體中以實現外源基因的表達。包括啟動子、外源基因克隆位點、終止序列、篩選標記等。表達載體都是穿梭質粒，先在大腸桿菌復制擴增，然后被導入宿主酵母細胞。為使產物分泌胞外，表達載體還需帶有
畢赤酵母高效轉化實驗方案1.收集菌體取1mlGS115過夜培養物(OD約6-10) 分裝到1.5ml EP管中，4℃、10000g 離心1min，棄上清，沉淀用無菌水(4℃)洗滌，同樣條件下離心，棄上清。2.菌體處理加入1ml處理液，室溫下放置20min。處理液：10mM LiAc10mM DTT0
實驗概要本實驗介紹了用LiCl法將重組質粒導入畢赤酵母菌X-33的轉化方法。主要試劑甘油，YPD培養基，50% PEG，1 mol/L LiCl，Sac I主要設備搖床，高速離心機，1.5 ml微量離心管，水浴鍋實驗材料重組質粒pPIC6αA-APC，畢赤酵母菌X-33實驗步驟1. 取畢赤酵母甘油種
不太可能，Invitrogen的商業化畢赤酵母表達系統屬于甲醇酵母表達系統，用的是畢赤酵母獨有的AOX1啟動子，由甲醇誘導；釀酒酵母用的啟動子大多用的是GAPDH或Gal啟動子等，由葡萄糖和半乳糖誘導。雖然兩種菌株有很多基因具有較高的同源性，但不能通用。建議使用畢赤酵母表達系統，釀酒酵母表達量低，誘