RNA酶的用途及破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法
RNA酶又名核糖核酸酶，為白色凍干粉末 ，可以殺滅許多腫瘤細胞系，可以抑制導致艾滋病的HIV-1病毒在細胞中的復制，可以治療乙肝。RNA酶用途說明：生化研究，測定核酸的結構RNase 保護檢測去除非特異結合的RNA分析RNA 序列水解蛋白樣品中的RNA純化DNA此外，它具有顯著的細胞毒性，可以殺滅許多腫瘤細胞系，可以抑制導致艾滋病的HIV-1病毒在細胞中的復制，可以治療乙肝。破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法用強烈變性如鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白質， 導致細胞結構破碎，核蛋白由于其二級結構的破壞而從核酸上解離下來。RNA酶可耐受多種處理等，因此可聯用上述試劑，從組織中，如富含RNA酶的胰腺中，提取完整無損的RNA。下述實驗程序系列利用RNA酶抑制劑和（或）能迅速滅活RNA酶的有關方法從組織或細胞培養物中分離總RNA、核內RNA和胞質內RNA。RNase酶非常穩定，是導致RNA降解主要的物質。它在一些極端的條件可以暫時失......閱讀全文
RNA酶保護試驗
? ? RNA酶保護試驗((RNase Protection Assay,RPA)是通過液相雜交的方式,用反義RNA探針與樣品雜交，以檢測RNA表達的技術。與Northern雜交和RT-PCR比較，RPA有以下幾個優點：1．?檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉膜和洗
RNA酶活性的控制
為了獲得高質量的真核細胞mRNA， 必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNA酶的活性。同時，避免偶然引入實驗室內其他潛在的痕量RNA酶也很重要。下面列舉避免RNA酶法染問題的一些注意事項。大多數有經驗的研究者并不拘泥于這些注
RNA酶活性的控制
為了獲得高質量的真核細胞mRNA， 必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNA酶的活性。同時，避免偶然引入實驗室內其他潛在的痕量RNA酶也很重要。下面列舉避免RNA酶法染問題的一些注意事項。大多數有經驗的研究者并不拘泥于這些注
如何防止RNA酶污染
在所有RNA實驗中，最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定，一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解，而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果，所
防止RNA酶污染方法
防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）。3. 有機玻璃的電泳槽等，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室溫10mi
RNA聚合酶的類別
通常可根據生物的類別，將RNA聚合酶分為原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特點，但在結構、組成和性質等方面又不盡相同。（1）原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大腸桿菌RNA聚合酶。該酶是由五種亞基組成的六聚體（α2ββ'ωσ）分子量約500
RNA－SI－核酸酶作圖
實驗材料 [γ-32P」ATP合適的寡核苷酸DNA 模板l10XdNTP 混合物KLenow 片段合適的限 制性內切核酸酶X 射線膠片洗脫緩沖液tRNA 石蠟油S1 核酸酶試劑、試劑盒 10X 激酶緩沖液PNK10X 復性緩沖液6% 聚丙烯酰胺 8mol L 尿素溶液 (溶于 0.5XTBE) 及甲
RNA－SI－核酸酶作圖
? ? ? ? ? ? 實驗材料 [γ-32P」ATP 合適的寡核苷酸 DNA 模板l 10XdNTP 混合物 KLenow 片段 合適的限 制性內切核酸酶
防止RNA酶污染的措施
在所有RNA實驗中，最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定，一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解，而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果，所
RNA修飾相關酶PCR芯片
應用場景：通過關鍵酶/蛋白的RNA表達變化，確定樣品表型與特定RNA 修飾的聯系 優勢：預制的PCR板,覆蓋68個針對不同RNA修飾的Writers/Erasers/Readers基因。精心優化的引物Tm值均一，并經過了嚴格的預實驗驗證，無須摸索引物設計和測試。工業化生產的高度均一的PCR
RNA復制酶的相關介紹
即“RNA依賴的RNA聚合酶（RdRp）”RNA聚合酶的一種,存在于大部分RNA病毒中。和細胞中用來轉錄的RNA聚合酶（DdRp）不同,RNA復制酶的模板是RNA分子。 某些RNA復制酶還有解旋酶活性,正鏈RNA或雙鏈RNA病毒復制時都會產生雙鏈RNA,RNA復制酶可以解開這些雙鏈,保證RNA
RNA聚合酶的結構
為什么細菌的RNA聚合酶需要這么大和復雜的分子結構呢?而某些噬菌體特有的RNA聚合酶則要小得多，僅由一條多肽鏈組成。這證明RNA合成所需的機構可以遠比宿主的酶小。這種情況說明，噬菌體內的轉錄僅需一條"最小"的機構。然而這種酶只能識別噬菌體本身所有的少數幾個啟動子；它們不能識別其他啟動子。例如噬菌
什么是端粒酶RNA？
端粒酶RNA(TR)，是端粒酶的一個組成部分，由端粒酶RNA基因(TERC)編碼。端粒酶RNA在脊椎動物中，纖毛蟲和酵母菌的序列和結構之間有很大的不同，但它們共享一個5'假結結構的模板序列。脊椎動物端粒酶RNA的3'H / ACA snoRNA的域。
RNA酶保護試驗方法
RNA酶保護法是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針（32P或生物素）與待測的RNA樣品液相雜交，標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合，形成雙鏈RNA；未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待測目的基因與特
RNA聚合酶的特點
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板；②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸；③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應；④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
RNA聚合酶的作用
RNA聚合酶（RNA polymerase）的作用是轉錄RNA。有的RNA聚合酶有比較復雜的亞基結構。如大腸桿菌RNA聚合酶有四條多肽鏈，另有一個促進新RNA分子合成的σ因子，因此它的組成的是α2ββσ。這種結構稱為全酶（holoenzyme），除去了σ因子的酶稱為核心酶。噬菌體RNA聚合酶則沒
RNA聚合酶的分類
通常可根據生物的類別，將RNA聚合酶分為原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特點，但在結構、組成和性質等方面又不盡相同。（1）原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大腸桿菌RNA聚合酶。該酶是由五種亞基組成的六聚體（α2ββ'ωσ）分子量約500
避免RNA酶污染的方法
RNase酶非常穩定，是導致RNA降解最主要的物質。它在一些極端的條件可以暫時失活，但限制因素去除后又迅速復性。用常規的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑不能使所有的RNase完全失活。為了獲得高質量的真核細胞mRNA，必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度
用T4－RNA－連接酶連接－RNA－分子
實驗材料 T4RNA連接酶供體RNA受體RNA試劑、試劑盒 10XT4RNA連接酶緩沖液無核酸酶的水FEGRNA酶抑制劑實驗步驟 一材料與設備1)10XT4RNA 連接酶緩沖液：50 mmol/LTris (pH7,8)，l0 mmol/L MgCl2，5 mmol/LDTT,1 mmol/L AT
用T4－RNA－連接酶連接－RNA－分子
? ? ? ? ? ? 實驗材料 T4RNA連接酶 供體RNA 受體RNA 試劑、試劑盒 10XT4RNA連接酶緩沖液
提質粒后有RNA污染，可以加點RNA酶處理嗎
實驗室一直都是用日常型質粒抽提試劑盒，轉染細胞沒問題。我覺得只要是注意以下2點就可以了：1，注意大腸桿菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌體沉淀時防止菌液散落，經常用75%的乙醇擦拭手套。2，最后洗脫時最好使用無內毒素的水，我們是用注射用水的。無論是小提還是大提我們都是用的日常型
提取質粒還沒加Rna酶為何電泳中不見Rna
一般來說，提取質粒所用的試劑盒已經加入了RNase，所以電泳跑膠不會出現RNA條帶。即使是采用的人工方法提取，也不可避免的空氣中，汗液，唾液等中豐富的RNase的降解。此外，按照你的問題來看，你應該是再提取質粒，提取質粒然后電泳渴望觀察到RNA的條帶，殊不知質粒分子一般較大，其所用的瓊脂糖膠濃度一般
3.6.2－用T4－RNA－連接酶連接－RNA－分子
T4RNA 連接酶已經用來生成很多位點特異修飾的 RNA，尤其是寡核苷酸修飾和用反義密碼 tRNA 修飾的 RNA。另外，T4RNA 連接酶還可用于 RNA/DNA 分子內/分子間連接、甲鏈寡脫氧核苷酸的連接、克隆全長 cDNA 及將非天然氨基酸摻入蛋白分子中。實驗材料T4RNA連接酶供體RNA受體
RNA聚合酶的催化特點
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板；②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸；③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應；④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
RNA聚合酶的催化特點
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板；②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸；③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應；④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
RNA聚合酶的特點介紹
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點： ①以DNA為模板； ②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸； ③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應； ④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸； ⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
RNA聚合酶的參與過程
該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）作為RNA聚合酶的底物，DNA為模板，二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為：（NMP）n+NTP→（NMP）n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3'，第一個核苷酸帶有3個磷酸基。其后
5.5－RNA－SI－核酸酶作圖
SI 核酸酶是種內切酶，它是從米曲霉米曲霉 (Aspergillusoryzae) 中分離得到。它能降解單鏈核酸，卻不能降解雙鏈核酸。此外，它能高靈敏度地降解局部錯配的雙鏈分子，即使只有一對堿基錯配，也能因 S1 核酸酶的切割而被檢測出來。用 S1 核酸酶來識別和切割錯配或未復性的區域，再通過變性內
細胞化學詞匯RNA復制酶（RdRp）
即“RNA依賴的RNA聚合酶（RdRp）”RNA聚合酶的一種，存在于大部分RNA病毒中。和細胞中用來轉錄的RNA聚合酶（DdRp）不同，RNA復制酶的模板是RNA分子。某些RNA復制酶還有解旋酶活性，正鏈RNA或雙鏈RNA病毒復制時都會產生雙鏈RNA，RNA復制酶可以解開這些雙鏈，保證RNA的復制順
RNA聚合酶的功能特點
RNA聚合酶（RNA polymerase）是以一條DNA鏈或RNA為模板，三磷酸核糖核苷為底物、通過磷酸二酯鍵而聚合的合成RNA的酶，因為在細胞內與基因DNA的遺傳信息轉錄為RNA有關，所以也稱轉錄酶。