雙酶雙底物的雙重免疫染色—淋巴瘤輕鏈κ、λ的雙重酶標記
實驗步驟1. 石蠟切片常規脫蠟至水(若用含汞固定液固定的組織,則需用內含 0.5% 碘的乙醇溶液脫汞 5 min,乙醇濃度為 70%,經自來水洗后以 2.5% 硫代硫酸鈉浸洗 1 min,水洗)。2. 0.3%H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min,自來水洗,蒸餾水洗,入 PBS(0.01mol/L,pH 7.2)洗。3. 滴加正常羊血清 1:10,濕盒,室溫,10 min,不洗。4. 加一抗(抗人κPcAb 與抗人 McAb 的混合液)1:200,濕盒,37℃,45 min 或更長。5. PBS 洗 5 min×3。6. 加二抗(GARG+GAMG 混合液 1:200),濕盒,37℃,30 min。7. PBS 洗 5 min×3。8. 加酶-抗酶抗體復合物(兔 PAP+鼠 PAP-AP 混合液 1:100)濕盒 37℃,30 min。9. PBS 洗 5 min×3。10. 過氧化物酶顯色反應:以 DAB/H2O2 液顯色 ......閱讀全文
雙酶雙底物的雙重免疫染色—淋巴瘤輕鏈κ、λ的雙重酶標記
實驗步驟1. 石蠟切片常規脫蠟至水(若用含汞固定液固定的組織,則需用內含 0.5% 碘的乙醇溶液脫汞 5 min,乙醇濃度為 70%,經自來水洗后以 2.5% 硫代硫酸鈉浸洗 1 min,水洗)。2. 0.3%H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min,自來水洗,蒸餾水洗,入 PBS(0.01mol/L
雙酶雙底物的雙重免疫染色—多種組織抗原配對的雙重酶
改良的 EnVision-HRP/AP 雙酶雙底物的雙重免疫染色(間接法)——Ki-67-CK20 等多種組織抗原配對的雙重酶實驗步驟1. 恒冷切片或石蠟切片,厚 4~6 μm,常規處理。2. 0.1%NaN3+0.3%H2O2/TBS(50 mmol/L,pH 7.8)或 0.3%H2O2/甲醇,
雙鏈酶試驗的臨床意義
意義SK-SD試驗陰性者,很可能是細胞免疫功能低下,亦可能是被檢者未受相應鏈球菌的感染。此外,尿毒癥者對SK -SD試驗反應常較正常人為低。
雙鏈酶皮內試驗的簡介
細胞免疫皮膚試驗(簡稱皮試)是測定體內免疫功能的方法。此法簡便易行,對于過敏性疾病、傳染病、免疫缺陷病及腫瘤的診斷與防治有重要意義。
雙鏈酶試驗的正常值
局部不出現紅腫反應者陰性,硬結直徑>5mm者為陽性。
限制酶切割雙鏈DNA的方式
限制酶切割雙鏈DNA的方式有兩種,產生的末端也有兩種:第一種是交錯切割,即兩條鏈的切點不在同一水平而是相隔數個堿基,故斷口產生兩小段自身互補的單鏈,這種末端容易互補連接,稱為粘性末端(cohesive terminus);第二種為平整切割。
雙側雙重帶狀皰疹病例分析
1 病歷摘要患者女,64 歲。 因左側頭面及右側腰腹部出現簇 集水皰伴疼痛 7 d 至我院就診。患者 7 d 前無明顯誘因 左側頭皮、額面部疼痛不適,呈間歇性刺痛,不久左側 頭皮、額部開始出現片狀紅斑,其上見散在丘皰疹、水 皰,且右腰腹開始出現簇集丘皰疹,疼痛明顯,無明顯 發熱等癥狀。未行相關治療,
光鏡下雙/多重免疫標記實驗——雙重免疫熒光染色
實驗步驟1. 古茲菲德-雅各氏病(CJD)病人的尸解腦組織,4% 中性甲醛固定,石蠟包埋,連續切片,厚 5 μm(貼片前的載玻片應預涂不含有熒光色素的黏合劑)。2. 常規脫蠟,水化。3. 抗原修復(檸槺酸鹽緩沖液 pH 6.0 中,高壓滅菌器加熱 100℃,20 min)及 96% 甲酸孵育 2 m
光鏡下雙/多重免疫標記實驗——免疫熒光雙重標記TRITCFITC
雙重或多重標記是利用免疫學和細胞化學原理,在同一張切片上同時采用或先后采用不同顏色的熒光色素或酶促產物,或采用不同直徑大小顆粒膠體金來原位標記兩種或兩種以上抗原-抗體復合物,達到在同一細胞或亞細胞水平顯示不同抗原成分(定性、定位、定撤),分析不同抗原成分相互間功能的增消關系,操作遵循的原則與要求同單
雙鏈DNA探針標記法
分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連
雙鏈DNA探針標記法的介紹
分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到
雙鏈酶皮內試驗的正常值
陰性為(-):無紅腫、硬結或硬結直徑15mm。
雙鏈酶試驗抽血前的注意事項
1、抽血前一天不吃過于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會直接影響檢驗結果。 2、體檢前一天的晚八時以后,應禁食,以免影響第二天空腹血糖等指標的檢測。 3、抽血時應放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮,增加采血的困難。
雙鏈酶試驗的注意事項有哪些
一、抽血前的注意事項 1、抽血前一天不吃過于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會直接影響檢驗結果。 2、體檢前一天的晚八時以后,應禁食,以免影響第二天空腹血糖等指標的檢測。 3、抽血時應放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮,增加采血的困難。 二、抽血后應注意 1、抽血后,需
雙鏈DNA探針標記法介紹
分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。1.?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的
免疫學實驗雙鏈酶試驗介紹
雙鏈酶試驗介紹: 用從溶血性鏈球菌培養液中提取的鏈激酶(SK)及鏈道酶(SD)制成的抗原。 雙鏈酶試驗正常值: 局部不出現紅腫反應者陰性,硬結直徑>5mm者為陽性。 雙鏈酶試驗臨床意義: 意義SK-SD試驗陰性者,很可能是細胞免疫功能低下,亦可能是被檢者未受相應鏈球菌的感染。此外,尿毒
用T4噬菌體DNA聚合酶標記雙鏈DNA的3端
實驗材料限制性內切核酸酶T4 噬菌體 DNA 聚合酶模板 DNA試劑、試劑盒醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌體 DNA 聚合酶緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材Sephadex G-50 離心柱水浴實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液醋酸氨(10 mol/L)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和緩沖液適當的
用T4噬菌體DNA聚合酶標記雙鏈DNA的3端
實驗材料 限制性內切核酸酶T4 噬菌體 DNA 聚合酶模板 DNA試劑、試劑盒 醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌體 DNA 聚合酶緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材 Sephadex G-50 離心柱水浴實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液醋酸氨(10 mol/L)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和緩沖
用T4噬菌體DNA聚合酶標記雙鏈DNA的3端
? ? ? ? ? ? 實驗材料 限制性內切核酸酶 T4 噬菌體 DNA 聚合酶 模板 DNA 試劑、試劑盒 醋酸氨
關于酶標記抗體的酶制劑及其底物
凡無毒性又能呈現有色化學反應的酶,原則上均可作為標記用。但作為標記抗體用的酶應滿足下列要求:(1)來源方便,易于純化;(2)比活性高,性質穩定;(3)酶活性和量能用簡單方法測定。在免疫酶技術中常用的酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶,β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋
用大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段標記雙鏈DNA的3’端
實驗材料?限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA試劑、試劑盒?乙酸銨乙醇dNTP 溶液儀器、耗材?Sephadex G-50 離心柱水浴實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨(10 mol/L )乙醇2. 酶和緩沖液適宜的限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚
用大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段標記雙鏈DNA的3’端
? ? ? ? ? ? 實驗材料 限制性內切核酸酶 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 模板 DNA 試劑、試劑盒
用大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段標記雙鏈DNA的3’端
實驗材料限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA試劑、試劑盒乙酸銨乙醇dNTP 溶液儀器、耗材Sephadex G-50 離心柱水浴實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨(10 mol/L )乙醇2. 酶和緩沖液適宜的限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚合酶 I
精準檢測去泛素化酶活性新型雙泛素底物的使用
?? ???泛素-蛋白酶體(ubiquitin-proteasome system,UPS)途徑介導的蛋白降解是機體調節細胞內蛋白水平與功能的一個重要機制。負責執行這個調控過程的組成成分包括泛素及其啟動酶系統和蛋白酶體系統。泛素啟動酶系統負責活化泛素,并將其結合到待降解的蛋白上,形成靶蛋白多聚泛
雙重熒光素酶報告基因優缺點
雙重熒光素酶報告基因優點是具有靈敏度高,缺點是需要多次實驗。雙熒光素酶報告基因檢測系統因其具有靈敏度高、無細胞內源性表達干擾等優勢,現已被廣泛用于基因表達調控的研究中,同批次樣品檢測值也可能出現浮動。所以實驗一般需要做3個或3個以上復孔,并且引入另一個報告基因作為內參。雙熒光素酶報告基因檢測是以熒光
標記雙鏈DNA的3突出端
實驗材料限制性內切核酸酶小牛胸腺末端轉移酶模板 DNA試劑、試劑盒乙酸銨乙醇酚氯仿末端轉移酶緩沖液儀器、耗材Sephadex G-50 離心柱實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨(10 mol/L )乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和緩沖液適當的限制性內切核酸酶小牛胸腺末端轉移酶5X 末端
臨床化學檢查方法介紹雙鏈酶試驗介紹
雙鏈酶試驗介紹: 用從溶血性鏈球菌培養液中提取的鏈激酶(SK)及鏈道酶(SD)制成的抗原。雙鏈酶試驗正常值: 局部不出現紅腫反應者陰性,硬結直徑>5mm者為陽性。雙鏈酶試驗臨床意義: 意義SK-SD試驗陰性者,很可能是細胞免疫功能低下,亦可能是被檢者未受相應鏈球菌的感染。此外,尿毒癥者對SK-
雙脫氧ATP末端標記雙鏈DNA的3突出端
? ? ? ? ? ? 實驗材料 限制性內切核酸酶 小牛胸腺末端轉移酶 模板 DNA 試劑、試劑盒 乙酸銨
雙鏈酶試驗的抽血后注意事項有哪些
1、抽血后,需在針孔處進行局部按壓3-5分鐘,進行止血。注意:不要揉,以免造成皮下血腫。 2、按壓時間應充分。各人的凝血時間有差異,有的人需要稍長的時間方可凝血。所以當皮膚表層看似未出血就馬上停止壓迫,可能會因未完全止血,而使血液滲至皮下造成青淤。因此按壓時間長些,才能完全止血。如有出血傾向,
雙鏈酶試驗的正常值及臨床意義
正常值 局部不出現紅腫反應者陰性,硬結直徑>5mm者為陽性。 臨床意義 意義SK-SD試驗陰性者,很可能是細胞免疫功能低下,亦可能是被檢者未受相應鏈球菌的感染。此外,尿毒癥者對SK -SD試驗反應常較正常人為低。