雙酶雙底物的雙重免疫染色—多種組織抗原配對的雙重酶
改良的 EnVision-HRP/AP 雙酶雙底物的雙重免疫染色（間接法）——Ki-67-CK20 等多種組織抗原配對的雙重酶實驗步驟1. 恒冷切片或石蠟切片，厚 4～6 μm，常規處理。2. 0.1％NaN3+0.3％H2O2/TBS（50 mmol/L，pH 7.8）或 0.3％H2O2/甲醇，室溫 20 min（阻斷內源性過氧化物酶活性）。3. TBS 洗 5～10 min×3。4. 一抗 CK20（McAb）1:100，4℃，過夜。5. TBS 洗 5 min×3。6. EnVision-HRP（羊抗鼠）試劑，室溫 30 min。7. TBS 洗 5 min×3。8. 正常鼠血清 1:10，室溫 15 min（封閉前重標記一抗的游離位點）。9. TBS 洗 5 min×3。10. 第二種特異性一抗 Ki-67（McAb）1:100，37℃ 孵育 120 min，TBS 洗 5 min×3。11. 生物素化羊抗鼠 IgG1......閱讀全文
雙酶雙底物的雙重免疫染色—多種組織抗原配對的雙重酶
改良的 EnVision-HRP/AP 雙酶雙底物的雙重免疫染色（間接法）——Ki-67-CK20 等多種組織抗原配對的雙重酶實驗步驟1. 恒冷切片或石蠟切片，厚 4～6 μm，常規處理。2. 0.1％NaN3+0.3％H2O2/TBS（50 mmol/L，pH 7.8）或 0.3％H2O2/甲醇，
雙酶雙底物的雙重免疫染色—淋巴瘤輕鏈κ、λ的雙重酶標記
實驗步驟1. 石蠟切片常規脫蠟至水（若用含汞固定液固定的組織，則需用內含 0.5％ 碘的乙醇溶液脫汞 5 min，乙醇濃度為 70％，經自來水洗后以 2.5％ 硫代硫酸鈉浸洗 1 min，水洗）。2. 0.3％H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min，自來水洗，蒸餾水洗，入 PBS（0.01mol/L
雙側雙重帶狀皰疹病例分析
1 病歷摘要患者女，64 歲。 因左側頭面及右側腰腹部出現簇 集水皰伴疼痛 7 d 至我院就診。患者 7 d 前無明顯誘因 左側頭皮、額面部疼痛不適，呈間歇性刺痛，不久左側 頭皮、額部開始出現片狀紅斑，其上見散在丘皰疹、水 皰，且右腰腹開始出現簇集丘皰疹，疼痛明顯，無明顯 發熱等癥狀。未行相關治療，
精準檢測去泛素化酶活性新型雙泛素底物的使用
?? ???泛素-蛋白酶體（ubiquitin-proteasome system，UPS）途徑介導的蛋白降解是機體調節細胞內蛋白水平與功能的一個重要機制。負責執行這個調控過程的組成成分包括泛素及其啟動酶系統和蛋白酶體系統。泛素啟動酶系統負責活化泛素，并將其結合到待降解的蛋白上，形成靶蛋白多聚泛
雙重熒光素酶報告基因優缺點
雙重熒光素酶報告基因優點是具有靈敏度高，缺點是需要多次實驗。雙熒光素酶報告基因檢測系統因其具有靈敏度高、無細胞內源性表達干擾等優勢，現已被廣泛用于基因表達調控的研究中，同批次樣品檢測值也可能出現浮動。所以實驗一般需要做3個或3個以上復孔，并且引入另一個報告基因作為內參。雙熒光素酶報告基因檢測是以熒光
【共享】雙酶切
1、 在雙酶切載體時如果2個酶切位點靠得很近，必須注意酶切順序。因為有的限制性內切酶要求其識別序列的兩端至少保留有若干個堿基才能保證酶的有效切割。有的酶要求識別序列兩端有多個堿基的，則必須先切，否則就可能造成酶切失敗。2、 回收PCR產物：回收的PCR產物片段=1：10 ，一般取前者0.03pmol
雙酶切反應
雙酶切buffer的選擇： 1、U ：Supplied with its own unique reaction buffer that is different from the four standard NEBuffers. Its compatibility with the fou
雙酶切反應酶活性分析及雙酶切建議緩沖液
同步雙酶切是一種省時省力的常用方法。選擇能讓兩種酶同時作用的最佳緩沖液是非常重要的一步。NEB每一種酶都隨酶提供相應的最佳 NEBuffer，以保證100%的酶活性。NEBuffer的組成及內切酶在不同緩沖液中的活性見《內切酶在不同緩沖液里的活性表》及每支酶的說明書。能在最大程度上保證兩種酶活性
雙酶切反應酶活性分析
同步雙酶切是一種省時省力的常用方法。選擇能讓兩種酶同時作用的最佳緩沖液是非常重要的一步。NEB每一種酶都隨酶提供相應的最佳NEBuffer，以保證100%的酶活性。NEBuffer的組成及內切酶在不同緩沖液中的活性見《內切酶在不同緩沖液里的活性表》及每支酶的說明書。能在最大程度上保證兩種酶活性的緩沖
質粒DNA的雙酶切
實驗概要掌握質粒DNA雙酶切的原理和操作方法。實驗原理分子生物學實驗中，基因的重組與分離涉及到一系列的酶促反應。許多種酶在基因克隆實驗中有著廣泛的用途。限制性內切酶是一類能識別雙鏈DNA分子特異性核酸序列的DNA水解酶。多種細菌能合成限制性核酸酶，這是它們保護自己，降解外來DNA分子的重要手段。每一
“雙反”案的雙重啟示－是經濟賬更是戰略賬
“雙反”案的背后，不僅是經濟賬，還有戰略賬。在計算“雙反”案可能導致中歐多大的雙輸的同時，它也提醒我們：發展一個新型戰略產業，如何才能少走彎路。 大棒終于落下。北京時間6月4日晚，歐盟委員會正式就去年9月啟動的對華光伏產品“雙反”調查作出初裁，決定從2013年6月6日起至8月
免疫酶細胞化學技術中的雙PAP法檢測微量抗原
在復合物體系中連接更多的PAP復合物，來進一步放大抗原，從而使靈敏度更為增強，適用于檢測微量抗原。實驗方法：?將固定后的標本用PBS漂洗；2.?于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內源性過氧化物酶；3.?PBS漂洗2次，每次3min；4.?在室溫下用二抗的正常血
光鏡下雙/多重免疫標記實驗——免疫熒光雙重標記TRITCFITC
雙重或多重標記是利用免疫學和細胞化學原理，在同一張切片上同時采用或先后采用不同顏色的熒光色素或酶促產物，或采用不同直徑大小顆粒膠體金來原位標記兩種或兩種以上抗原-抗體復合物，達到在同一細胞或亞細胞水平顯示不同抗原成分（定性、定位、定撤），分析不同抗原成分相互間功能的增消關系，操作遵循的原則與要求同單
雙熒光素酶驗證
miR 和LncRNA/circRNA/mRNA 結合雙熒光素酶驗證方案 一、 檢測原理全基因合成 miR 潛在結合位點上下游~500bp（ LncRNA、circRNA 或 mRNA 的3’UTR）野生形式 WT 及結合位點的突變形式 Mut，克隆到 psiCHECK-2 多克隆位點處
雙酶切小技巧
A．任何時候2 種酶的總量不能超過反應體系的1/10體積。B．雙酶切時如果兩種酶反應溫度一致而buffer不同時，可查閱內切酶供應商在目錄后的附錄中提供的各種酶在不同buffer中的活力表（也可以向ebiotrade.com客戶服務部索取），如果有一種buffer能同時使2 種酶的活力都超過70
酶免疫技術酶與底物
酶結合物是酶與抗原或者抗體、半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,是 ELISA 成敗的關鍵試劑。它不僅具有抗原抗體的特異性反應,還具有酶促反應的特性,最終產生生物放大的特性。酶免疫反應中,最常用的酶是辣根過氧化物酶,HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染
溫度對酶活性影響具有雙重性指的是什么？
化學速度隨溫度升高而加快，酶反應也不例外。 Q10值即溫度增加10℃，化學速度的變化率。酶的Q10值約在1.5～2.5。（溫度每增加10℃，酶促反應速度增加1～2倍左右。） 當溫度超過一定范圍，反應速度下降，（酶蛋白變性）應選最適反應溫度。 37℃是目前使用最廣泛的 測定酶催化活性濃度的溫
光鏡下雙/多重免疫標記實驗——雙重免疫熒光染色
實驗步驟1. 古茲菲德-雅各氏病（CJD）病人的尸解腦組織，4％ 中性甲醛固定，石蠟包埋，連續切片，厚 5 μm（貼片前的載玻片應預涂不含有熒光色素的黏合劑）。2. 常規脫蠟，水化。3. 抗原修復（檸槺酸鹽緩沖液 pH 6.0 中，高壓滅菌器加熱 100℃，20 min）及 96％ 甲酸孵育 2 m
酶免疫技術中酶和酶作用底物
酶和酶作用底物（一）酶的要求：?一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合：1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。3.作用專一性強 ，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢
免疫酶技術中常用的酶底物系統
各種免疫酶技術,最終都是以某種顯色反應而揭示待測物質來進行定性和定量分析。不同酶要選擇相應的底物,見下表。免疫酶技術中常用的酶-底物系統酶底物顯色反應測定波長/nm辣根過氧化物酶二氨基聯苯胺深褐色沉淀5-氨基水楊酸棕色449鄰苯二胺橘紅色492/460鄰聯甲苯胺藍色4254-硝基酚磷酸黃色400堿性
什么是雙熒光素酶
熒光素酶（Luciferase）是催化瑩光素氧合而發光的蛋白酶即[讓螢火蟲尾部熒光素發出熒光的蛋白質]瑩光素+ATP+O2-->氧合瑩光素+AMP+PPi+熒光
什么是雙熒光素酶
熒光素酶（Luciferase）是催化瑩光素氧合而發光的蛋白酶即[讓螢火蟲尾部熒光素發出熒光的蛋白質]瑩光素+ATP+O2-->氧合瑩光素+AMP+PPi+熒光
雙熒光素酶實驗原理
雙熒光素酶實驗原理：利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特點，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游，構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對感興趣
雙熒光素酶實驗原理
雙熒光素酶實驗原理：利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特點，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游，構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對感興趣
雙熒光素酶實驗原理
雙熒光素酶實驗原理：利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特點，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游，構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對感興趣
雙熒光素酶實驗原理
雙熒光素酶實驗原理：利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特點，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游，構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對感興趣
雙熒光素酶實驗原理
雙熒光素酶實驗原理：利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特點，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游，構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對感興趣
重組質粒雙酶切鑒定
既然你的質粒已經提出來了，那么感受態、轉化等因素就不必再考慮了。 你看看雙酶切后載體的位置有幾條帶，如果是兩條，那說明酶切不完全，如果是一條，那說明酶切效率沒問題。 pET28a分子量為5.6k，你的插入片段為500bp，如果你的質粒完全切開，載體和插入片段的摩爾比為1：1，質量比就是5.6
雙熒光素酶實驗原理
雙熒光素酶實驗原理：利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特點，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游，構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對感興趣
雙熒光素酶實驗原理
雙熒光素酶實驗原理：利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特點，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游，構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對感興趣