從化學和生物學的意義上理解,探針是一種已知特異性的分子,它帶有合適的標記物供反應后檢測。探針和靶的相互反應如抗原-抗體、血凝素-碳水化合物、親合素-生物素、受體和配體,以及核酸與其互補核酸間的雜交等反應均屬此類。用核酸探針與待檢標本中核酸雜交,形成雜交體,再用呈色反應顯示。此方法用于疾病的診斷,稱為分子雜交基因診斷。此法開始用于遺傳性疾病的診斷如血紅蛋白病的診斷、先天性遺傳病的產前診斷。近來,已發展為診斷外源性病原體如病毒、細菌、原蟲等的方法;內源性病變基因研究如癌基因檢測、基因突變、基因缺失或變異引起的疾病的基因診斷;人類基因識別及其生理功能和衰老有關研究;在法醫檢測中有關性別鑒別和DNA指紋譜的鑒定。基因探針的研究引起了人們高度重視,在探針的制備技術上有重大突破。可將核酸分子探針檢測比喻為在柴草堆中去找一根針的神奇技術。據美國華爾街分析家預言:“在生物技術市場中,下一個突破和具有吸引力的是基因探針”。它的巨大的開發潛力和經濟......閱讀全文
實驗材料dCTP
實驗材料dCTP試劑、試劑盒乙醇次氯酸鈉β-葡萄糖醛酸酶基因活性測定液溴化乙錠儀器、耗材培養室MS 培養基實驗步驟一、轉基因插入位點的數目第一代( T0)轉基因植株外源基因的插入位點數目,一般都是通過遺傳方法進行鑒定。雖然遺傳分析可以在任何世代進行,但是一般選擇轉基因植株自交,或與野生型測交后得到的
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸擴增的有效工具,由于其靈敏、特異、快速等優點,在醫學上已廣泛應用與病毒、細菌病原體及遺傳病、腫瘤的早期診斷。隨著PCR技術的發展,特別是病毒或腫瘤的治療監測、疾病的診斷、機體基因表達調控方面,不僅需要檢測其存在是否
基因診斷的概念 一、基本概念: 1.人類的絕大多數疾病都與基因有關,基因變異引起疾病兩種類型: 1) 內源基因變異:由于先天遺傳和后天內外環境因素的影響,人類的基因結構及表達的各個環節都可發生異常,從而導致疾病。
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法,而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具[1]。隨著分子生物學技術研究的不斷進展,定量PCR技術取得了突飛猛進的發展,不僅建立了一系
劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術,該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針,具有可實時監測,高靈敏性,高特異性和高精確性的特點,極大地克服了原有PCR儀技術的不足,擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr;熒光;基因Flu
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測,必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記,這條鏈就稱為核酸探針。因此,核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測,必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記,這條鏈就稱為核酸探針。因此,核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
5.核酸探針雜交技術原理 根據完成雜交反應所處介質的不同,分成固相雜交反應和液相雜交反應。固相雜交反應是在固相支持物上完成的雜交反應,如常見的印跡法和菌落雜交法。事先破碎細胞使之釋放DNA/RNA然后把裂解獲得的DNA/RNA固定在硝基纖維素薄膜上,再加標記探針雜交,依顏色變化確定結果,該法是
自天然耐受現象的發現,克隆選擇學說的提出為免疫生物學的發展奠定了理論基礎,使現代免疫學的發展方向發生了重大變化。使免疫學從抗感染免疫的概念中解脫出來,進而發展為生物機體對“自己”和“非己”的識別,藉以維持機體穩定性的生物學概念。這一發展時期自60年代迄今發現了胸腺的免疫功能,確認了淋巴
互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方
一、目的本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。二、原理原位雜交組化(簡稱原位雜交,in situ hybridization histochemistry;ISHH)屬于分子雜交的一種,是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交,再應用標記物相關的
一、目的 本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。 二、原理 原位雜交組化(簡稱原位雜交,in situ hybridization histochemistry;ISHH)屬于分子雜交的一種,是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交,再應用標記物相關
基因芯片(gene chip)的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法,即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法,可以基因芯片的測序原理用圖11-5-1來說明。在一塊基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG,與
DNA的變性 DNA的復性 核酸分子雜交 變性(denaturation)和復性(renaturation) 是雙鏈核酸分子的二個重要物理特性。也是核酸研究中經常引用的術語。雙鏈DNA,RNA雙鏈區,DNA: RNA雜種雙鏈(hybrid duplex)以及其它異源
3. 跨世代 Southern 分析Southern 分析一般用于鑒定各個轉基因插入位點的排列形式(見 3 .2 節中“ Southern分析” )。當然,通過對不同世代轉基因植株雜交檢測結果的比較,它也可以用于轉基因插入位點數的測定。例如,根 據 T。代和自交所得到凡代植株的 Sout
摘要:食品工業為保證產品質量以及對加工過程進行人為的控制,需要比較合適的分析方法。隨著生物技術的發展,生物檢測技術在食品檢驗中的應用也越來越廣泛,本文就食品檢測中主要生物檢測方法及其主要應用領域進行了綜述,旨在為生物技術在食品檢驗中的進一步應用提供參考。 1 前言 隨
分析測試百科網訊 2016年12月17日,由國家自然科學基金委員會化學科學部主辦,南京大學、北京大學、清華大學和中國科學院化學研究所共同承辦的2016年全國生命分析化學學術大會在南京國際展覽中心召開。 開幕當天的大會報告分別由俞汝勤、陳洪淵、萬立駿和梁文平主持,柴之芳、葉朝輝、張玉奎、楊秀榮、
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
第六節 自動化技術在微生物檢驗中的應用 微生物鑒定的自動化技術近十幾年得到了快速發展。數碼分類技術集數學、計算機、信息及自動化分析為一體,采用商品化和標準化的配套鑒定和抗菌藥物敏感試驗卡或條板,可快速準確地對臨床數百種常見分離菌進行自動分析鑒定和藥敏試驗。目前自動化微生物鑒定和藥敏分析系統已
6 基因組信息6.1 數據庫6.1.1 Entrez GenomeEntrez Genome數據庫收錄了850多種微生物、3100多種病毒以及1600多種真核生物細胞器的完整基因組數據以及將近50種動物、綠色植物和真菌的700多條染色體信息,總共收錄有6200多條序列,其中有882條是去年新增的序列
第六節 自動化技術在微生物檢驗中的應用 微生物鑒定的自動化技術近十幾年得到了快速發展。數碼分類技術集數學、計算機、信息及自動化分析為一體,采用商品化和標準化的配套鑒定和抗菌藥物敏感試驗卡或條板,可快速準確地對臨床數百種常見分離菌進行自動分析鑒定和藥敏試驗。目前自動化微生物鑒定和藥敏分析系統已在世界
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
二、生物素標記cRNA探針在原位雜交組織化學中的應用 (一)光敏生物素標記cRNA探針的應用 以線性質粒DNA為模板合成未加標記物的cRNA探針,使其最終濃度為0.5~1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再與等體積的光敏生物素(1μg/μl)混合。在150瓦鹵素燈下,距離光源20c
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測,與免疫組化技術的結合應用,能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交,此后得益于分子克隆技術的發展,及不同探針標記系統和檢測系統
是用標記的核酸探針,使用非放射檢測系統或放射自顯影系統,在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法,具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一,廣泛應用于腫瘤生物學、血液病理學、遺傳、微生物學、細胞和分子生物學、神經內分
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因,也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種,如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等,其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應(PCR)或逆轉錄-
生物傳感器是一類集成生物識別元件(如酶、抗體或核酸等)和物理、化學換能模塊的器件(信號轉導易與細胞中的信號轉導混淆)。生物傳感器已經廣泛用于家庭監護和現場檢測,目前的穿戴式和床邊檢測(POCT)生物傳感研究可能對疾病監控模式產生深刻影響。然而,有別于均相反應體系,生物傳感器本質上是一個異相界面反應過
劉曉燕 (公安縣人民醫院檢驗科,湖北公安434300)王 紅 (湖北中醫藥大學醫學檢驗與技術學院,湖北武漢430065)[關鍵詞] 臨床檢驗技術;耐藥基因;分子生物學技術一份準確全面的醫學檢驗報告是醫生做出準確診斷與制定正確治療方案必不可少的依據。因此,臨床醫學檢驗是一門極其重要的醫學學科