PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯酰胺凝膠上,短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象,一個堿基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構,這種二級結構依賴于其堿基組成,即使一個堿基的不同,也會形成不同的二級結構而出刺同的遷移率。由于該法簡單快速,因而被廣泛用于未知基因突變的檢測。用PCR-SSCP法檢測小于200bp的PCR產物時,突變檢出率可達70%-95%,片段大于400bp時,檢出率僅為50%左右,該法可能會存在1%的假陽性率。應用PCR-SSCP法應注意電泳的最佳條件,一般突變類型對檢測的靈敏度無大的影響,同時該法不能測定突變的準確位點,還需通過序列分析來確定。Sarkar等認為對于大于200bp的片段,用其RNA分子來做SSCP會提高其錄敏度。應用PCR-SSCP檢測點突變已見報道于人類大部分的腫瘤組織或細胞,如乳腺癌、食管......閱讀全文
DNA重組技術(或基因工程)是20世紀生物學的偉大成就,并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域,為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用,著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
常用分子生物學和細胞生物學實驗技術介紹! 核酸分子雜交技術 由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
實時熒光定量PCR (real time fluorogenetic quantitative PCR, FQ-PCR),是在PCR定性技術基礎上發展起來的核酸定量技術。它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時檢測整個PCR過程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方
實時熒光定量PCR (real time fluorogenetic quantitative PCR, FQ-PCR),是在PCR定性技術基礎上發展起來的核酸定量技術。它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時檢測整個PCR過程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析
在體外將兩個或多個來源相同或不相同的DNA片段連接成新的重組DNA分子,再轉到特定宿主細胞中進行自主復制并表達。這是分子生物學中的基本技術。DNA重組技術的基本程序包括:(1)獲得外源DNA:外源DNA是進行DNA重組的目的DNA片段,一般采用 DNA聚合酶鏈式反應(PCR)或逆轉錄-DNA聚合酶鏈
在體外將DNA分子片段與載體DNA片段連接,轉入細胞獲得大量拷貝的過程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步驟包括:制備目的基因→將目的基因與載體用限制性內切酶切割和連接,制成DNA重組→導入宿主細胞→篩選、鑒定→擴增和表達。載體(vecors)在細胞內自我復制,并帶動重組的分子片段共同增殖,從而
核酸原位雜交用特定標記的已知順序核酸作為探針與細胞級或組織切片中核酸進行復性雜交并對其實行檢測的方法,稱為核酸原位雜交(nucleic acid hybridization in situ)。用來檢測DNA在細胞核或染色休上的分布,與細胞內RNA進行雜交以研究該組織細胞中特定基因表達水閏;還
基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遺傳物質,在體外切割,拼接和重新組合,然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞,使外源DNA 在受體細胞中進行復制和
基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遺傳物質,在體外切割,拼接和重新組合,然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞,使外源DNA 在受體細胞中進行復制和表達。按人們
基因工程基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遺傳物質,在體外切割,拼接和重新組合,然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞,使外源DNA 在受體細胞中進行復制和表達
醫學真菌學檢查是診斷真菌病的重要依據,隨著真菌感染病例的日益增多,對實驗室的診斷也提出了更高的要求。不論是患者淺部或深部感染診斷,幾乎全依賴于臨床標本的真菌學檢查。特別是系統性真菌感染,其早期特異的診斷方法是挽救患者生命的關鍵,而病原真菌的形態結構十分多樣,在不同條件下同一真菌也可有不同特點的形態。
第一章 總則 第一條 為加強我省醫療機構臨床實驗室的建設與管理,提高臨床檢驗水平,保證醫療質量和醫療安全,根據《醫療機構臨床實驗室管理辦法》,結合我省實際,制定本實施細則。  
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數,具有速度快、精度高、準確性好的優點,是當代最先進的細胞定量分析技術之一。光源、液流通路、信號檢測傳輸和數據的分析系統是流式細胞儀的主要組成
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗