WIKI資訊
III. Methods for DNA isolationA. Large scale double-stranded DNA isolationThe method used for the isolation of large scale cosmid and plasmid DNA is an unpublished modification (16) of an alkaline lysis procedure (17,18) followed by equilibrium ultracentrifugation in cesium chloride-ethidium bromide gradients (1). Briefly, cells containing the desired plasmid or cosmid are harvested by centrifugation, incubated in a ......閱讀全文
提要 染色體顯微切割技術是細胞遺傳學與分子遺傳學相結合的一項橋梁技術。近年來，該技術在同源基因的定位和克隆的價值深受關注。本文結合顯微切割的經驗，對其應用和新進展進行了綜述。 完成人類基因組計劃的全序列分析，需要構建基因高
一、限制性內切酶限制性內切酶（restriction endonucleases，RE）是其中最重要的工具酶之一。它是一類核酸水解酶，能識別和切割雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列。（一）命名原則限制性內切酶大多從細菌中發現，根據來源進行命名，限制酶的第一個字母（大寫，斜體）為宿主菌的屬名，第二、第三
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的
實驗材料 λ噬菌體臂 大腸桿菌菌株 用于λ噬菌體的包裝抽提物 試劑、試劑
摘要： 可以在蛋白質水平和目的基因功能水平等各個層次鑒定重組子。可以在 蛋白質 水平和目的基因功能水平等各個層次鑒定重組子.基因水平的鑒定有酶切鑒定、 PCR 鑒定、核酸雜交和基因序列分析等.蛋白質水平鑒定有插入失活雙 抗生素 對照篩選(例如 Te
實驗方法原理 SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、
1 基因芯片技術分離目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介質上的生物信息分子的微列陣。列陣中每個分子的序列及位置都是已知的，并按預先設定好的順序點陣。基因芯片是生物芯片的一種，其上固定的是核算類物質，主要用于DNA、RNA分析。分為DNA芯片和微點陣兩種。分離目的基因是是指從基因組中發現或找出某個
蛋白質表達、分離、純化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理；（2）供作結構與功能的研究；（3）作為催化劑、營養劑等。實驗方法原理攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共
重組DNA技術可以用于：（1）據需要選擇目的基因（DNA片段）在體外與基因運載體重組，轉移至另一細胞或生物體內，以達到改良和創造新的物種和治療人類疾病的目的；（2）是現代分子生物技術發展中最重要的成就之一，即是基因工程(Gene Engineering)的核心技術。實驗方法原理Adeasy系統利用了
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
Linker scanner mutations （接頭分區突變）：體外在限制性片段加上位點，使兩個DNA分子發生重組產生，結果在重組的位點加上連接序列。實驗材料DNA試劑、試劑盒霧水乙醇EDTAT4 DNA連接酶TENaCl儀器、耗材培養箱水浴鍋實驗步驟1. 用Bal 31或外切核酸酶
下面講述的 Polybrene 與 DMSO 轉染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改進。利用此方法可以有效地將質粒 DNA 轉染中國倉鼠卵巢細胞與角化細胞，產生的轉化體比磷酸鈣-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 時兩種方法的轉染效率無明顯差別。本實驗來源于分子克
PCR體外擴增法 實驗方法原理 Adeasy系統利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度濃縮等優點，并
本方法中，兩條寡核苷酸引物雜交到變性重組質粒 DNA 雙鏈的同一條鏈上。一條引物（誘變引物）攜帶一個擬引進靶 DNA 序列的突變，第二條引物攜帶一個能破壞質粒單一限制酶位點的突變。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶 mutS 表型（
PCR技術必須有人工合成的合理引物和提取的樣品DNA，然后才進行自動熱循環，最后進行產物鑒定與分析。引物設計與合成目前只能在少數技術力量較強的研究院、所進行，臨床應用只需購買PCR檢測試劑盒就可開展工作，PCR自動熱循環中影響因素很多，對不同的DNA樣品，PCR反應中各種成份加入量和溫度循環參數均不
上一期為大家介紹了過去一年里CRISPR技術在動物造模及單堿基技術方面取得的重大突破。本期繼續為大家從功能基因組篩選、細胞譜系示蹤及疾病診斷方面談談CRISPR-Cas系統的技術運用。 一、大規模基因功能的篩選 盡管測序和基因組編輯技術取得了重大進展，但是解析復雜的基
基因重組—層析法 實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPT
實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸（NTA）使鎳離子（Ni2+）固相化的層析介質加以提純，實為金屬熬合親和層析（MCAC）。蛋白質的純化程
以下問題是以Promega公司試劑盒為例。凝膠遷移實驗1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互
利用 Polybrene 進行 DNA 轉染實驗 實驗材料 指數生長的哺乳動物
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中的多聯體。構建在 λ 噬菌體中的文庫以具有感染性的重組噬菌體形式貯存和增殖。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞試劑、試劑盒 DMSO(30%) 含血清培養基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸鈉要轉染的 DNA儀器、耗材 最低基礎培養基組織培養皿實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需濃度。DMSO(30%)/含血清培養基第 3
上一期為大家介紹了過去一年里CRISPR技術在動物造模及單堿基技術方面取得的重大突破。本期繼續為大家從功能基因組篩選、細胞譜系示蹤及疾病診斷方面談談CRISPR-Cas系統的技術運用。 一、大規模基因功能的篩選 盡管測序和基因組編輯技術取得了重大進展，但是解析復雜的基因型-表型關系仍
3.5 Pichia酵母表達直接PCR鑒定重組子的方法3.5.1 模板的處理：1. 平板上的菌落長到肉眼可見時（約12小時）；2. 將除了模板之外的其它PCR反應液的組分準備好，并分裝。引物最好使用Kit中已有的檢測專用的引物，或者或者一條使用載體上的引物，一條使用基因的特異性引物（這樣做可以鑒定非
蛋白酶生化性質的改善可以通過對該酶基因的錯摻突變和 DNA 混編方法實現。混編技術可用于同一基因的一組突變體，或者對相關家族基因的片段進行新的組合，產生嵌合突變基因產物。本實驗來源「現代蛋白質工程實驗指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒編著。實驗材料pBSII KS 質粒大腸桿菌 DH5α試劑、
實驗方法原理 在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中
實驗方法原理 在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中的多聯體。構建在 λ 噬菌體中的文庫以具有感染性的重組噬菌體形式貯存和增殖。實驗材料 T4 噬菌體 DNA 連接酶牛小腸堿
實驗目的： 了解常規DNA序列分析技術（Sanger雙脫氧法）的原理及操作步驟。 實驗原理： 在分子生物學研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等（1977）發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam和Gilbert（1977）發明的化學