免疫組化雙染實驗protocol
第一抗體的染色： 1、 將切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10分鐘，PBS沖洗2分鐘×3次 2、 加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗） 3、 加入一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件） 4、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)，沖洗2分鐘×3次 5、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（試劑2)，室溫孵育10分鐘 6、 使用含有0.05％吐溫20的PBS( TPBS)沖洗2分鐘×3次 7、 加入100ul（2滴）鏈霉親和素-AP（試劑3）的二抗，室溫孵育10分鐘 8、 使用含有0.05％......閱讀全文
免疫組化雙染實驗protocol
第一抗體的染色：??1、?將切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10分鐘，PBS沖洗2分鐘×3次??2、?加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）??3、?加入一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件）??4、?使用含有0.05％吐溫20的PBS(?TPB
免疫組化雙染實驗流程
一、脫蠟和水化方法同SP法。二、第一抗體的染色1、將切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10 min，PBS沖洗3 min×3次；2、加100 ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10 min，倒掉（不能沖洗）；3、加入一抗（按照說明書推薦濃度和孵育條件）；4、使用含有0.05
銀染實驗
試劑、試劑盒 甲醇（50% 和5%v v)二硫蘇糖醇 AgNO3檸檬酸（固態)顯影液實驗步驟 試劑甲醇（50% 和5%v/v)10umol/L二硫蘇糖醇（DTT)AgNO3(0.1%w/v)檸檬酸（固態)顯影液操作程序此操作程序是根據Merril(1987)的方法修改而成。室溫下，凝膠在旋轉平臺上緩
銀染實驗
試劑、試劑盒甲醇（50% 和5%v v)二硫蘇糖醇AgNO3檸檬酸（固態)顯影液實驗步驟試劑甲醇（50% 和5%v/v)10umol/L二硫蘇糖醇（DTT)AgNO3(0.1%w/v)檸檬酸（固態)顯影液操作程序此操作程序是根據Merril(1987)的方法修改而成。室溫下，凝膠在旋轉平臺上緩慢搖動
銀染實驗
銀染實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲醇（50% 和5%v v) 二硫蘇糖醇 AgNO3
Annexin－VPI雙染法
Annexin V-PI 雙染法在細胞凋亡的早期就有細胞膜表面破損發生。破損時凋亡細胞表面的磷脂腺絲氨酸(PS)可以從細胞內膜翻轉至細胞的外膜。該過程發生在DNA片段化之前，因而檢測PS的表達，能反映早期凋亡。AnnexinV是相對分子質量為35 000大小的Ca2+依賴的磷脂結合蛋白，對PS有很高
tunel和dapi雙染的意義
為維持內環境穩定，能夠與DNA強力結合的熒光染料。1、細胞凋亡是指為維持內環境穩定，生物體內細胞在特定的內源或外源信號誘導下，其死亡途徑被激活，并在有關基因的調控下發生的程序性死亡過程。2、DAPI，即4'，6-二脒基-2-苯基吲哚，是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料，常用于熒光顯微鏡觀測
Western－Blot－Protocol實驗步驟
一、提取抗原蛋白??將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒精重懸
單染和雙染有什麼區別
不是太懂，知道多少說多少了，單染是染缸中只加入一種染料，雙染是加入兩種染料，比如染全滌的加入一種就行了，染陽離子和滌混紡的就要加入兩種染料對其分別上色
銀染實驗用水指南
SDS聚丙烯酰胺凝膠染色是蛋白質研究的一個基礎方法。染色方法有很多，實際應用中，考馬斯亮藍染色（考染）和銀染是運用的最多的方法。考馬斯亮藍G250在游離狀態下呈紅色，它與蛋白質結合后變為藍色，結合物在595 nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。銀染實驗中
Western－Blot－Protocol實驗操作步驟
一、提取抗原蛋白 將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置 ?5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心 ?10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒
實現蛋白marker與Annexin－V雙染的同時檢測的實驗方法
要用AnnexinV雙染法測凋亡，又想同時標記蛋白marker，甚至還有胞內指標，可是PI和7-AAD都不能洗，怎么辦？ eBioscience的可固定細胞活力染料Fixable Viability Dye幫您完美解決固定、破膜以及洗滌步驟不影響Fixable Viability Dye的染色，
免疫組化實驗
實驗方法原理 免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水
PCR－產物電泳銀染實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性
PCR－產物電泳銀染實驗
常用的核酸電泳法有兩種。①水平電泳：瓊脂糖凝膠，紫外光下判斷條帶。此法經濟省時，但分辨率較低。②垂直電泳：聚丙烯酰胺凝膠，可見光下判斷條帶。此法相對費力，但分辨率較高。分辨率高是聚丙烯酰胺電泳法被優先用于克隆性基因重排條帶判斷的關鍵。在聚丙烯酰胺凝膠上較寬彌散被判斷為假陽性（陰性）的條帶，在瓊脂糖膠
PCR－產物電泳銀染實驗
實驗方法原理 聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性較差，通常 2 個月內用完為好。
銀染實驗的操作流程
實驗目的檢測聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質。實驗原理在堿性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。試劑：乙醇、冰醋酸（純乙酸）、乙酸鈉、硫代硫酸鈉
病毒RNA提取實驗方法（protocol）
1，用異硫氰酸胍提取提禽流感病毒的詳細步驟，可參考（我提過N次做定量PCR都沒問題）：1.取200ul樣品數+陰性對照+陽性對照個1.5ml滅菌eppendorf管2.加600ul異硫氰酸胍，然后加入對照和樣品，再加200ul氯仿，顛倒混勻3.13000rpm離心15min4.在第3步離心快結束時，
雙染檢測助力宮頸癌前病變診斷
研究發現，全球99%以上的宮頸癌病例都是由人乳頭瘤病毒（HPV）所引起，宮頸癌是目前唯一病因明確、可早期預防和治療、并可實現治愈的惡性腫瘤。然而，HPV感染相當常見，大多數是一過性感染，會被人體自身免疫系統清除。只有長期持續感染高危型HPV病毒才會導致高級別宮頸上皮內瘤變（CIN），進而發展為
免疫組化實驗原理
? ? 首先來談一下免疫組織化學（IHC, Immunohistochemistry）、免疫細胞化學（ICC, Immunocytochemistry）和免疫熒光(IF, immunofluorescence technic )的共通之處和區別。? ? 平常說的 免疫組化 就是用石蠟切片做的免疫組織
脂染介導的－DNA－轉染實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養物 試劑、試劑盒 脂染試劑 NaCl 枸櫞酸鈉
脂染介導的－DNA－轉染實驗
下述方法是 Mark Evans 所研究的一種方法的改進（Alexion Pharmaceuticals,New Haven,Connecticut)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養物試劑、試劑盒脂染試劑N
AOEB雙染試劑盒說明書
產品簡介：吖啶橙能透過胞膜完整的細胞，嵌入細胞核DNA，與雙鏈DNA結合后發出綠色熒光，溴化乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細胞，嵌入核DNA，發橘紅色熒光。凋亡的細胞呈現為染色增強，熒光更為明亮，均勻一致的圓狀或固縮狀、團塊狀結構。非凋亡細胞核呈現熒光深淺不一的結構樣特征。二者很容易判別。在熒光顯微
轉基因小鼠制備實驗方法（protocol)
1、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，
Western－blotting－Protocol(試劑配方和實驗操作)
一、 試劑配方：1X TBS: Tris-base 12.11gNacl 8.775g用HCl 調pH7.4，用純水稀釋至1L5X Transfer buffer: Tris-base 15.1gGlycine 72.0gTo 1 L10X堿性磷酸酶緩沖液： 1 mol/L Tris-HCl pH
石蠟切片免疫組化實驗
即用型(Envision)快速酶免疫組化二步法免疫組化可應用于：（1）確定組織細胞內抗原 (多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究；（2）診斷異常細胞，指導治療。實驗方法原理根據聚合酶技術把辣根過氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子結合在多聚酶上形成多聚物分子,其與待檢的抗原特異性的結合后，加入
石蠟切片免疫組化實驗
實驗方法原理 根據聚合酶技術把辣根過氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子結合在多聚酶上形成多聚物分子,其與待檢的抗原特異性的結合后，加入底物顯色。實驗材料 石蠟切試劑、試劑盒 PBS檸檬酸鹽緩沖液蒸餾水增強劑酶標抗鼠 兔聚合物蘇木素酒精二甲苯樹膠鹽酸二氨基聯苯胺儀器、耗材 烘箱微波盒塑料切片架顯微鏡膠頭
石蠟切片免疫組化實驗
即用型(Envision)快速酶免疫組化二步法 鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結SP法 卵白素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC）法 鏈霉親和素—生物素—過氧化物酶復合物（SABC）法 ? ? ? ? ? ?
免疫組化實驗方法
一、免疫組化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）原理免疫組化是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 （熒光素、酶、金屬離子、同位素） 顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質
銀染實驗的操作注意事項
1．固定時間較長，則加一步水洗30min，以免膠太脆而破碎。2．甲醛在使用前加入。3．最好多配制一份顯色液，第一次顯色到溶液變混濁時換一份顯色液，顯色到點清晰。4．顯色過程很快，要注意把握時間，避免染色過度。5．銀染液和顯色液需要預冷。6．所用器皿要很潔凈，不用手直接接觸，以免雜蛋白污染！7．清洗用