農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物 遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養 3、煙草葉片與對數生長期農桿菌的共培養 4、抗性再生植株的篩選 【用具】：超凈工作臺、搖床、恒溫培養室、高壓滅菌器、冰箱、培養瓶，培養皿、500 mL三角瓶、50 mL與500 mL燒杯、酒精燈、槍形鑷子、手術刀。 【藥品與水】：① 按照培養基要求準備藥品；② 材料表面消毒劑：70%乙醇0.1% HgCl2③ 無菌水；④ 卡那霉素（kan）、羧芐青霉素(Cb)；⑤ 帶有外源基因的農桿菌由實驗室提供。 培養基: 1、LB培養基100ml； 2、MS 鹽溶液（pH 7.0）100ml,分裝到50ml三角瓶中，25ml/ 瓶；......閱讀全文
農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物 ?遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養 3、煙草葉片與對
農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養
農桿菌介導的植物遺傳轉化
實驗概要以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。主要試劑70%乙醇0.1% HgCl2無菌水卡那霉素(kan)羧芐青霉素(Cb)培養基：LB培養基100ml；MS 鹽溶液(pH 7.0)100ml，
農桿菌介導的遺傳轉化程序
實驗概要農桿菌侵染實驗實驗步驟(1) 農桿菌菌液的制備??將農桿菌接種于附加50mg/L Km、50mg/L Sm、50mg/L Rif的YEB固體培養基上，28℃暗培養，至長出單菌落。用接菌環挑取單菌落，接種在5mL含相應抗生素的YEB液體培養基中，于28℃，200r/min 培養過夜。待
農桿菌介導水稻轉化
實驗概要本實驗介紹了農桿菌介導的水稻轉化。主要試劑GUS染色液：100 mmol/L NaPO4 (pH7.0)；0.1% Triton X-100；10 mmol/L EDTA；0.5 mmol/L亞鐵氰化鉀頭抱霉素，乙醇，次氯酸鈉溶液主要設備高速離心機，培養箱，人工氣候室實驗材料水稻種子實驗步驟
農桿菌介導轉化擬南芥
實驗概要1. 學習真核生物的轉基因技術及農桿菌介導的轉化原理。2. 掌握農桿菌介導轉化擬南芥 的實驗方法，了解擬南芥的生理特點及在基因工程實驗中應用實驗原理擬南芥（Arabidopsis thaliana）是一種十字花科植物，二年生草本，高7～40厘米，花期3～5月。廣泛用于植物遺傳學、發育生物學和
根癌農桿菌介導的植物轉化－葉盤轉化法
一、原理以根癌農桿菌介導的遺傳轉化是目前最有效的途徑之一。根癌農桿菌對植物釋放的化學物質產生趨化反應，向植物受傷組織集中。經共培養后，受傷部位的化學誘導物透過農桿菌的細胞膜使Ti質粒上的Vir基因活化。Vir基因產物使Ti質粒上的T－DNA進入植物細胞，并整合到植物核基因組中。插入在T－DNA左右邊
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗
試劑、試劑盒緩釋肥乙酰丁香酮儀器、耗材盆缽植物支撐器LB 培養基通用型試管YEP 固體培養基TSIM 培養基實驗步驟一、材料1. 母體植株的生長( 1 ) 將母體植株種植于 12 , 7F ( 直徑為 13 cm) 的盆缽中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons? M2 培養土，并施用
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗
試劑、試劑盒：緩釋肥 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?乙酰丁香酮? 儀器、耗材：盆缽 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料植物凝膠pBract 質粒pSoup 質粒試劑、試劑盒利福平卡那霉素儀器、耗材MG L 培養基實驗步驟1. 組織培養基的準備提前準備好所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 3 ) 。所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適的
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料?植物凝膠pBract 質粒pSoup 質粒試劑、試劑盒?利福平卡那霉素儀器、耗材?MG L 培養基實驗步驟 1. 組織培養基的準備提前準備好所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 3 ) 。所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料：植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? pBract 質粒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗（二）
5. 轉基因幼苗的生長需要用到以下材料：( 1 ) Jiffy 7 泥炭顆粒（Jiffy 產品， Norway)( 2 ) 播種托盤及相應的 24 孔穴盤（可任選供應商）( 3 ) 適合播種盤大小的培養箱（可任選供應商）6. 轉基因植株的生長需要用到以下材料：( 1 ) 12F（直徑 12 cm）盆
植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗（一）
試劑、試劑盒 緩釋肥乙酰丁香酮儀器、耗材 盆缽植物支撐器LB 培養基通用型試管YEP 固體培養基TSIM 培養基實驗步驟 一、材料1. 母體植株的生長( 1 ) 將母體植株種植于 12 , 7F ( 直徑為 13 cm) 的盆缽中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons ?M2 培養土，
轉基因技術農桿菌介導轉化方法的介紹
農桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，并誘導產生冠癭瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。 因此，農桿菌是一
農桿菌介導法簡介
農桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位 [1] ，并誘導產生冠癭瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。因此，農桿
農桿菌介導法概述
農桿菌介導法起初只被用于雙子葉植物中，農桿菌的介導轉化在一些單子葉植物(尤其是水稻)中也得到了廣泛應用。此外，生物技術學家還可以通過發根農桿菌轉化，在液體培養基中培養高密度的根，作為一種在轉基因植物中獲得大量蛋白質的方法。 農桿菌Ti質粒的T-DNA可高效率地整合到植物受體細胞的染色體上并得到
簡述轉基因植物的農桿菌介導法
農桿菌的Ti質粒可以作為載體。Ti質粒上有兩個區域，一個是T-DNA區，這是能夠轉移并整合進植物受體的區段；另一個是Vir區，它編碼實現質粒轉移所需的蛋白質。將待轉化的外源基因先克隆在大腸桿菌質粒上，然后將此質粒轉入不會引起冠癭瘤的農桿菌（這種菌的Ti質粒已除去了T-DNA），使外源基因通過同源
農桿菌的轉化
實驗概要本實驗介紹了農桿菌感受態細胞的制備及轉化方法。主要試劑YEP固體培養基，含有相應抗生素的YEP培養基，0.15mM NaCl，20mM CaC12，液氮，選擇平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )主要設備培養箱，搖床，離心機，-80℃冰箱實驗步驟1.
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗
實驗材料?農桿菌細胞試劑、試劑盒?根癌農桿菌甘油原液抗生素儀器、耗材?MG L 液體培養基實驗步驟 1. 從根癌農桿菌甘油原液中吸取 400 μl 加入含 10 ml MG/L 液體培養基并添加相應抗生素的 50 ml 無菌管中，28℃、250 r/min 搖床振蕩培養過夜（17~20 h) 至 O
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗
實驗材料農桿菌細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒根癌農桿菌甘油原液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?抗生
農桿菌介導法的過程介紹
根癌農桿菌的Ti質粒上有一段轉移DNA（T-DNA），具有向植物細胞傳遞外源基因的能力，而細菌本身并不進入受體細胞。農桿菌轉化植物細胞涉及一系列復雜的反應，主要包括：①受傷的植物細胞為修復創傷部位，釋放一些糖類、酚類等信號分子。 ②在信號分子的誘導下，農桿菌向受傷組織集中，并吸附在細胞表面。
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗1
根癌農桿菌菌液的準備 實驗材料 農桿菌細胞 試劑、試劑盒 根癌農桿菌甘油原液抗生素 儀器、耗材 MG L 液體培養基 實驗步驟 1. 從根癌農桿菌甘油原液中吸取 400 μl 加入含 10 ml MG/L 液體培養基并添加相應抗生素的 50 ml
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗6
轉基因植株的鑒定及種子的收獲實驗材料再生苗儀器、耗材Magenta 盒實驗步驟1. 經第二輪選擇后，挑出根莖生長良好的再生苗（見注 16 ) 移栽于土壤中。首先，將各株再生苗移入 8 cm2?的盆缽里生長 1~2 周，使它們能夠逐漸適應溫室條件。當小苗足夠大時，再取葉片提取 DNA 用于 PCR 和
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗7
轉化效率的計算儀器、耗材Southern 雜交分析實驗步驟1. 轉化效率通常用百分比表示。計算方法為：確定的獨立轉基因單株總數 x100 /侵染的總幼胚數。2. 如果一個胚得到一株以上的轉基因植株，這視為一個獨立轉化事件，來自同一轉化事件的其他所有單株視為姐妹株。這些姐妹株有可能來源于不同的細胞，屬
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗——選擇
實驗材料愈傷組織儀器、耗材選擇培養基Magenta 培養盒實驗步驟1. 將培養物轉移至第一輪選擇培養基中（表 5.1，選擇培養基 1 ) ( 見注 15)。一些愈傷組織在轉移時會自然散開，盡管這無關緊要，但放置時應將散開的愈傷塊彼此靠近，以標記它們是來自同一幼胚。2. 培養 3 或 4 周后，篩選出
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗2
根癌農桿菌接種外植體的準備（見注 6)實驗材料面包小麥硬粒小麥試劑、試劑盒乙醇儀器、耗材層流罩超凈臺實驗步驟1. 面包小麥和硬粒小麥開花后 12~16 天剪下幼穗，將種子幼體用 70% ( V/V）的乙醇浸泡 1 min，再換用 10% 乙醇（V/V）輕輕晃動 10 min 進行表面消毒，最后用足量
農桿菌介導的小麥新鮮離體幼胚的轉化實驗4
胚性愈傷的誘導和再生實驗材料胚儀器、耗材誘導培養基再生培養基實驗步驟1. 共培養 2~3 天后，將胚轉移至誘導培養基以誘導胚性愈傷（表 5.1，誘導培養基 a 適用于面包小麥，誘導培養基 b 適用于硬粒小麥）。記錄下轉移的胚的個數以便計算轉化效率，轉移時確保胚的盾片仍朝上。22~23℃ 避光培養。2
農桿菌轉化法培養抗蟲棉
（1）圖中A為基因表達載體；農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，在構建基因表達載體時，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．（2）①過程是將基因表達載
農桿菌轉化法的原理
選擇一種特制的空質粒載體（如PBI121質粒載體），其上要求含有T-DNA邊界序列（此處可參見詞條雙元表達載體系統），在序列之間含有復制原點、抗性基因、GUS報告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位點（以上這些構成了一個T-DNA區）。先通過雙酶切反應酶切空質粒載體和目的基因，再通過酶連反應連