從全血和體液中提取基因組DNA的操作步驟
提取DNA需要的儀器和試劑: ⑴ 1.5ml 離心管⑵ 移液管: 1000μl, 200μl, 40μl 各一支和移液管尖頭: 100-1000μl, 1-200μl 各一盒⑶ 微型濾柱(備用)⑷ 小型旋轉混合器一臺⑸ 小型離心機: 可放入1.5ml 離心管和2ml收集管.⑹ 恒溫水浴⑺ 電冰箱: -20℃, 4 ℃⑻ 無水乙醇(自備)⑼ 70% 乙醇(自備)⑽ DNA提取試劑盒。內含: ⑴ 裂解液1 ⑵ 裂解液2 ⑶消化液 ⑷純化液 ⑸彌散液 ⑹蛋白酶K ⑺ 帶鉤細玻棒一盒 ⑻ 微型濾柱若干。一.從1ml全血或體液中提取DNA的步驟:⑴ 裂解1: 取1ml全血,血槳,血清,淋巴細胞放入到1.5ml的離心管中,加入400μl裂解液1。上下翻轉,使沉淀物分散,旋轉脈動15秒后放入離心機中離心,離心速率為8000rpm,1min.。倒掉上層液,可見離心管底部有血色沉淀。重復此裂解步驟一次,這次是加入1ml裂解液1。 最后用移液管......閱讀全文
核酸提取-基因組DNA的提取
?? DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,因此DNA的提取也應是分子生物學實驗技術中的最重要、最基本的操作,如不能有效的完成DNA提取方面的工作,那就根本談不上進行分子生物學方面的實驗。在DNA提取過程中應做到1,根據不同研究需要,保證結構的相應完整性;2,盡
基因組DNA的提取
基因組DNA的提取概 述? 基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中, 可用玻棒將其取出,而小分
基因組DNA的提取
第一節 概 述DNA的提取通常用于構建文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中,可用玻棒將其取出,而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部,
血基因組DNA提取實驗——血基因組DNA-試劑盒提取法
血基因組DNA提取可用于:(1)從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養細胞、病毒和線粒體中提取DNA;(2)用于后續測序、遺傳信息學等研究。實驗方法原理采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。實驗材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA 試劑盒儀
血基因組DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。 實驗材料 抗凝全血
血基因組DNA提取實驗
實驗方法原理 本試劑盒采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。適用于從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養細胞、病毒和線粒體中提取DNA。實驗材料 抗凝全血試劑、試劑盒 血基因組DNA 試劑盒儀器、耗材 96孔深孔板96圓孔板96孔DNA制備板
細菌基因組DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0x109 細菌中獲得多至20 ug 的基因組DNA。用于PCR、Southern 印跡分析、RAPD
細菌基因組DNA提取實驗
細菌基因組DNA提取可應用于:(1)獲得細菌基因組DNA;(2)作為PCR模板;(3)用于測序、遺傳信息分析等。實驗方法原理本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0x109?細菌中獲得多至20 ug 的基因組DN
球蟲卵囊基因組提取
實驗概要卵囊基因組的提取是在基因層面研究球蟲生理活動功能的前提。主要試劑2×CTAB 溶液配制:10ml 1M Tris-HCl(pH7.5或8.0)2g CTAB28ml 5M NaCl4ml 0.5M EDTA(pH 7.5 或8.0)1g亞硫酸氫鈉加雙蒸水至100ml實驗步驟1. ? 先將卵囊
關于土壤基因組DNA提取
土壤樣品含有大量的微生物,其中絕大部分的微生物都是無法直接培養進行繁殖和研究。從土壤樣品中提取?DNA?是研究土壤微生物zui為有效的方法。目前從土壤樣品中提取微生物?DNA?的方法主要有直接法和間接法。直接法是指把土壤樣品放在裂解液中,經過有效的破壁方法使微生物的DNA?全部釋放到裂解液中,然后再
擬南芥基因組DNA的提取
實驗概要本實驗介紹了用CTAB法提取擬南芥基因組DNA。主要試劑CTAB提取液(2%CTAB,50mMEDTA,50mM Tris-HCl,PH 8.0,0.84M NaCI,0.05%巰基乙醇),氯仿,無水酒精,70%的酒精主要設備1.5 mL離心管,65℃水浴鍋,高速離心機,研缽實驗材料擬南芥葉
細菌基因組DNA提取實驗
實驗方法原理 本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0×109 細菌中獲得多至20 μg 的基因組DNA。用于PCR、Southern 印跡分析、RAPD、RFLD 等分子生物學實驗。實驗材料 細菌培養物
植物基因組提取(CATB法)
一、實驗目的?掌握植物總DNA的抽提方法和基本原理。學習根據不同的植物和實驗要求設計和改良植物總DNA抽提方法。?二、實驗原理?通常采用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞,由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響,在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)
血基因組DNA提取實驗——血基因組DNA大量試劑盒提取法
實驗方法原理本試劑盒采用獨特的兩相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DN的目的。適合從5 ml 的抗凝人或哺乳動物全血,或500 ul 抗凝鳥類或兩棲動物全血中獲得多至250 ug 的基因組DNA。實驗材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA大量試劑盒儀器、耗材DNA
從動物組織提取基因組DNA
實驗概要本實驗以哺乳動物新鮮組織為材料,學習基因組DNA提取的一般方法。實驗原理基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀
真核細胞基因組DNA的提取
實驗概要高等動物,高等植物的基因組相當龐大,如人類細胞基因組由30億個堿基對組成,果蠅基因組有1.4×108個堿基對,水稻基因組有1.4×109個堿基對。真核細胞基因組中,約1萬-1.5萬個可表達的結構基因,其它大量存在的是調控序列和內含子序列。可以說某特定物種的基因組,包含了該物種生長,發育,繁殖
全血基因組提取操作步驟
操作步驟((200ul全血))* 第一次使用前請先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水乙醇! 1. 取200ul新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液,放入1.5ml離心管。對如果全血起始量小于200μl,則用緩沖液BB補足到200μl。如果起始量介于200μl-300μl之間,則后續操作需要按照比例增
SDS法提取植物基因組DNA
本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的組織細胞用熱的SDS裂解后,加入高濃度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖類雜質,最后用乙醇或異丙醇沉淀。一 材料、試劑和儀器1 材料 新鮮的組織材料或-80℃凍存的材料2 試劑(1)提取緩沖液Tris-H
細菌基因組DNA提取方法綜述
細菌基因組DNA的提取方法綜述,提供了5種方法。?1 快速微量提取法A.取1.5ml菌體培養物于一滅菌Ep管中,12000rpm離心1min, 丟去上清夜,收集菌體。B.加入400ul裂解液(40mMTris-醋酸,20mM醋酸鈉,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8)混勻,置于37oC水浴1hr
昆蟲全基因組DNA的提取
實驗概要利用改進的CTAB 法提取昆蟲全基因組DNA。主要試劑1. 蛋白酶K[美國Merck公司]2. 三羥甲基氨基甲烷(Tris)[美國Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 瓊脂糖及溴化乙錠(EB)[美國Amresco公司生產]5. 乙二胺四乙酸鈉(Na2ED
質粒dna的提取與基因組dna的提取有何異同
質粒DNA提取一般用沸水浴法和堿裂解法,現在一般都采用堿裂解法,并有試劑盒可用。它主要是將細胞內的環狀質粒提取出來,一般需要用SDS裂解,RNA酶降解,然后過柱,再進行洗脫.過程比較簡單。 而基因組DNA提取則較為復雜,也需要用SDS裂解和RND酶降解,但降解時間較長,同時對有些革蘭氏陽性細菌
酵母基因組DNA簡易高效提取方案
1. 10ml菌液過夜培養至飽和(OD600值為2-3)?2. 離心沉降細胞(Sorvall中以2000rpm的速度),然后以冷的、等體積的無菌蒸餾水洗滌?3. 將細胞沉淀在200μl 裂解緩沖液中重懸浮,然后加入約300μl 玻璃珠和200μl的1:1苯酚:氯仿混和液?4. 漩渦搖勻1-2min?
動物組織細胞基因組DNA提取
一、實驗原理真核生物的一切有核細胞(包括培養細胞)都能用來制備基因組 DNA.真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內,因此,制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K的溶液
單頭昆蟲基因組DNA的提取
實驗概要一種簡單快速提取單頭小型昆蟲基因組DNA的方法。主要試劑1. 蛋白酶K[美國Merck公司]2. 三羥甲基氨基甲烷(Tris)[美國Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 瓊脂糖及溴化乙錠(EB)[美國Amresco公司]5. 乙二胺四乙酸鈉(Na2EDT
動物組織細胞基因組DNA提取
一、實驗原理真核生物的一切有核細胞(包括培養細胞)都能用來制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內,因此,制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K的溶液
提取基因組DNA的方法有哪些
1、苯酚氯仿抽提法優點是采用了實驗室常見的試劑和藥品,做起來成本比較低廉。缺點是由于使用了苯酚、氯仿等試劑,毒性較大,長時間操作對人員健康有較大影響,而且核酸的回收率較低,損失量較大,由于操作體系大,不同實驗人員操作重復性差,不利于保護RNA,很難進行微量化的操作。?2、離心柱法離心柱法DNA提取它
動物細胞基因組DNA提取實驗
實驗原理真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內,制備DNA將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離,同時保持DNA分子的完整。提取DNA的過程是指將分散好的組織細胞在含SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質,再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質,得到的DNA溶液經乙醇沉淀使DNA從
基因組DNA提取與PCR擴增技術
一、基因組DNA提取實驗目的基因組DNA的制備是基因分析的前提。 本實驗要求掌握基因組DNA提取的基本方法。實驗原理 DNA在生物體內是與蛋白質形成復合物的形式存在的。核酸與蛋白質之間的結合力包括離子鍵、氫鍵、范德華力等,破壞或降低這些結合力就可把核酸與蛋白分開。 DNA、RNA所含有的嘌呤環和嘧啶
利用CTAB法提取植物基因組DNA
一、實驗原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)是一種去污劑,可溶解細胞膜并能與核酸形成復合物,該復合物在高離子強度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通過離心可將復合物同蛋白質、多糖類物質分開。在酚仿變性的條件下,去除殘留的CTAB和蛋白質等雜質,然后利用異戊醇或無水乙醇將DNA分
使用離心機提取植物基因組DNA
植物基因組DNA提取使用什么樣的離心機做?具體步驟怎么樣?植物組織提取基因組DNA 一、材料 幼嫩葉子。 二、設備 移液器,冷凍高速離心機,臺式高速離心機,水浴鍋,陶瓷研缽,50ml離心管(有蓋)及5ml和1.5ml離心管,彎成鉤狀的小玻棒。(這時選擇設備的時候注意選擇那種通用性強的,可以一機配多種