RNA酶保護實驗(RNaseProtectionAssay,RPA)簡介
簡介： RNA酶保護試驗(RNase Protection Assay，RPA)是通過液相雜交的方式,用反義RNA探針與樣品雜交，以檢測RNA表達的技術。 1. 原理：雙鏈RNA（雜交的）能夠抵抗RNA酶的降解。 2. 應用：檢測RNA表達 3. 與Northern雜交和RT-PCR比較，RPA有以下幾個優點： （1） 檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失，使靈敏度下降，而RPA將所有雜交體系進行電泳，故損失小，提高了靈敏度。 （2）由于PCR擴增過程中效率不均一和反應“平臺”問題，基于PCR產物量進行分析所得數據的可靠性將下降，而RPA沒有擴增過程，因此，分析的數據真實性較高。 （3）由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進行分析。 （4）步驟較少，耗時短。與Nort......閱讀全文
RNA酶保護試驗
? ? RNA酶保護試驗((RNase Protection Assay,RPA)是通過液相雜交的方式,用反義RNA探針與樣品雜交，以檢測RNA表達的技術。與Northern雜交和RT-PCR比較，RPA有以下幾個優點：1．?檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉膜和洗
防止RNA酶污染方法
防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）。3. 有機玻璃的電泳槽等，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室溫10mi
如何防止RNA酶污染
在所有RNA實驗中，最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定，一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解，而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果，所
RNA酶活性的控制
為了獲得高質量的真核細胞mRNA， 必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNA酶的活性。同時，避免偶然引入實驗室內其他潛在的痕量RNA酶也很重要。下面列舉避免RNA酶法染問題的一些注意事項。大多數有經驗的研究者并不拘泥于這些注
RNA酶活性的控制
為了獲得高質量的真核細胞mRNA， 必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNA酶的活性。同時，避免偶然引入實驗室內其他潛在的痕量RNA酶也很重要。下面列舉避免RNA酶法染問題的一些注意事項。大多數有經驗的研究者并不拘泥于這些注
RNA修飾相關酶PCR芯片
應用場景：通過關鍵酶/蛋白的RNA表達變化，確定樣品表型與特定RNA 修飾的聯系 優勢：預制的PCR板,覆蓋68個針對不同RNA修飾的Writers/Erasers/Readers基因。精心優化的引物Tm值均一，并經過了嚴格的預實驗驗證，無須摸索引物設計和測試。工業化生產的高度均一的PCR
什么是端粒酶RNA？
端粒酶RNA(TR)，是端粒酶的一個組成部分，由端粒酶RNA基因(TERC)編碼。端粒酶RNA在脊椎動物中，纖毛蟲和酵母菌的序列和結構之間有很大的不同，但它們共享一個5'假結結構的模板序列。脊椎動物端粒酶RNA的3'H / ACA snoRNA的域。
RNA復制酶的相關介紹
即“RNA依賴的RNA聚合酶（RdRp）”RNA聚合酶的一種,存在于大部分RNA病毒中。和細胞中用來轉錄的RNA聚合酶（DdRp）不同,RNA復制酶的模板是RNA分子。 某些RNA復制酶還有解旋酶活性,正鏈RNA或雙鏈RNA病毒復制時都會產生雙鏈RNA,RNA復制酶可以解開這些雙鏈,保證RNA
RNA聚合酶的結構
為什么細菌的RNA聚合酶需要這么大和復雜的分子結構呢?而某些噬菌體特有的RNA聚合酶則要小得多，僅由一條多肽鏈組成。這證明RNA合成所需的機構可以遠比宿主的酶小。這種情況說明，噬菌體內的轉錄僅需一條"最小"的機構。然而這種酶只能識別噬菌體本身所有的少數幾個啟動子；它們不能識別其他啟動子。例如噬菌
RNA聚合酶的特點
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板；②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸；③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應；④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
RNA聚合酶的作用
RNA聚合酶（RNA polymerase）的作用是轉錄RNA。有的RNA聚合酶有比較復雜的亞基結構。如大腸桿菌RNA聚合酶有四條多肽鏈，另有一個促進新RNA分子合成的σ因子，因此它的組成的是α2ββσ。這種結構稱為全酶（holoenzyme），除去了σ因子的酶稱為核心酶。噬菌體RNA聚合酶則沒
RNA聚合酶的類別
通常可根據生物的類別，將RNA聚合酶分為原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特點，但在結構、組成和性質等方面又不盡相同。（1）原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大腸桿菌RNA聚合酶。該酶是由五種亞基組成的六聚體（α2ββ'ωσ）分子量約500
避免RNA酶污染的方法
RNase酶非常穩定，是導致RNA降解最主要的物質。它在一些極端的條件可以暫時失活，但限制因素去除后又迅速復性。用常規的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑不能使所有的RNase完全失活。為了獲得高質量的真核細胞mRNA，必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度
RNA－SI－核酸酶作圖
實驗材料 [γ-32P」ATP合適的寡核苷酸DNA 模板l10XdNTP 混合物KLenow 片段合適的限 制性內切核酸酶X 射線膠片洗脫緩沖液tRNA 石蠟油S1 核酸酶試劑、試劑盒 10X 激酶緩沖液PNK10X 復性緩沖液6% 聚丙烯酰胺 8mol L 尿素溶液 (溶于 0.5XTBE) 及甲
RNA聚合酶的分類
通常可根據生物的類別，將RNA聚合酶分為原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特點，但在結構、組成和性質等方面又不盡相同。（1）原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大腸桿菌RNA聚合酶。該酶是由五種亞基組成的六聚體（α2ββ'ωσ）分子量約500
防止RNA酶污染的措施
在所有RNA實驗中，最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定，一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解，而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果，所
RNA－SI－核酸酶作圖
? ? ? ? ? ? 實驗材料 [γ-32P」ATP 合適的寡核苷酸 DNA 模板l 10XdNTP 混合物 KLenow 片段 合適的限 制性內切核酸酶
RNA酶保護試驗方法
RNA酶保護法是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針（32P或生物素）與待測的RNA樣品液相雜交，標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合，形成雙鏈RNA；未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待測目的基因與特
用T4－RNA－連接酶連接－RNA－分子
實驗材料 T4RNA連接酶供體RNA受體RNA試劑、試劑盒 10XT4RNA連接酶緩沖液無核酸酶的水FEGRNA酶抑制劑實驗步驟 一材料與設備1)10XT4RNA 連接酶緩沖液：50 mmol/LTris (pH7,8)，l0 mmol/L MgCl2，5 mmol/LDTT,1 mmol/L AT
用T4－RNA－連接酶連接－RNA－分子
? ? ? ? ? ? 實驗材料 T4RNA連接酶 供體RNA 受體RNA 試劑、試劑盒 10XT4RNA連接酶緩沖液
提取質粒還沒加Rna酶為何電泳中不見Rna
一般來說，提取質粒所用的試劑盒已經加入了RNase，所以電泳跑膠不會出現RNA條帶。即使是采用的人工方法提取，也不可避免的空氣中，汗液，唾液等中豐富的RNase的降解。此外，按照你的問題來看，你應該是再提取質粒，提取質粒然后電泳渴望觀察到RNA的條帶，殊不知質粒分子一般較大，其所用的瓊脂糖膠濃度一般
提質粒后有RNA污染，可以加點RNA酶處理嗎
實驗室一直都是用日常型質粒抽提試劑盒，轉染細胞沒問題。我覺得只要是注意以下2點就可以了：1，注意大腸桿菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌體沉淀時防止菌液散落，經常用75%的乙醇擦拭手套。2，最后洗脫時最好使用無內毒素的水，我們是用注射用水的。無論是小提還是大提我們都是用的日常型
3.6.2－用T4－RNA－連接酶連接－RNA－分子
T4RNA 連接酶已經用來生成很多位點特異修飾的 RNA，尤其是寡核苷酸修飾和用反義密碼 tRNA 修飾的 RNA。另外，T4RNA 連接酶還可用于 RNA/DNA 分子內/分子間連接、甲鏈寡脫氧核苷酸的連接、克隆全長 cDNA 及將非天然氨基酸摻入蛋白分子中。實驗材料T4RNA連接酶供體RNA受體
RNA聚合酶的催化特點
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板；②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸；③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應；④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
RNA聚合酶的功能特點
RNA聚合酶（RNA polymerase）是以一條DNA鏈或RNA為模板，三磷酸核糖核苷為底物、通過磷酸二酯鍵而聚合的合成RNA的酶，因為在細胞內與基因DNA的遺傳信息轉錄為RNA有關，所以也稱轉錄酶。
RNA聚合酶的參與過程
該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）作為RNA聚合酶的底物，DNA為模板，二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為：（NMP）n+NTP→（NMP）n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3'，第一個核苷酸帶有3個磷酸基。其后
RNA酶污染的預防措施
RNA的的化學性質比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團能直接被RNA酶利用來作為活性因子，從而使得RNases無需金屬離子就能發揮活性。由于RNA酶在環境中廣泛存在，特別是RNase A，結構極其穩定，不能通過高溫高壓滅菌失活，因而極難消除，對保持RNA樣品的完整性構成極大
RNA聚合酶的特點介紹
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點： ①以DNA為模板； ②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸； ③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應； ④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸； ⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
細胞化學詞匯RNA復制酶（RdRp）
即“RNA依賴的RNA聚合酶（RdRp）”RNA聚合酶的一種，存在于大部分RNA病毒中。和細胞中用來轉錄的RNA聚合酶（DdRp）不同，RNA復制酶的模板是RNA分子。某些RNA復制酶還有解旋酶活性，正鏈RNA或雙鏈RNA病毒復制時都會產生雙鏈RNA，RNA復制酶可以解開這些雙鏈，保證RNA的復制順
RNA聚合酶的催化特點
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板；②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸；③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應；④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。