關于活性氧分子熒光探針標記法的應用
眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中產生的一系列活性氧簇（ReactiveOxygenSpecie），包括：O2·-、H2O2及HO2-·以及-OH等。目前研究發現ROS可雙向調控某些腫瘤細胞的凋亡和增殖，并發現了自由基與細胞信號轉導之間的內在關聯。例如DNA損傷，以前的研究表明癌細胞要比正常的細胞積累著更多的ROS，而且癌細胞中水平增高的ROS一直被認為一件不好的事情，促進細胞中DNA損傷、遺傳不穩定性和藥物抗性。 目前細胞內ROS含量水平通常采用化學發光法、紫外-可見吸收分光光度法、熒光光度法、電子自旋探針以及選擇性電極法等。目前較為普通的方式是熒光探針標記方法，檢測是......閱讀全文
關于活性氧分子熒光探針標記法的應用
眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中產生
關于活性氧分子熒光探針標記法的應用介紹
眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中
關于活性氧分子熒光探針標記法的應用介紹
眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中
細胞凋亡檢測實驗——熒光探針雙標記法
實驗方法原理本實驗用1μg/ml 三尖杉酯堿HT在體外誘導培養的HL-60細胞發生凋亡，同時也有少數細胞發生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）對細胞進行雙重染色，可以區別凋亡、壞死及正常細胞。三尖杉酯堿（HT）是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病，
檢測酶活性的熒光探針
檢測酶活性的熒光探針?共聚焦激光掃描顯微鏡除了具備熒光顯微鏡檢測熒光酶細胞化學的作用以外，在檢測活細胞酶活性動態變化方面有著無可比擬的優勢。通過對細胞施予不同的處理因素可檢測細胞內相應的酶被激活或滅活的動態變化過程。有的酶熒光探針是自身就可發出熒光、有的是與酶結合后發出熒光、有的則是被酶分解后發出熒
細胞膜流動性測定實驗_熒光探針標記法
實驗方法原理常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后，介質粘度增加，順反異構受到抑制，成為唯一能發光的全反構型。實驗材料腫瘤細胞試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液DPH儀器、耗材熒光分光光度計離心機實驗步驟1. ?取對數生長期的腫瘤細胞，以pH
PCR擴增標記法探針標記
PCR擴增標記法探針標記???? PCR擴增標記法的原理與普通的核酸PCR相同。即Taq?DNA多聚酶以DNA為模板，在特異引物引導下，在PCR儀中合成cDNA探針。由于在反應體系中加入一定量的標記dNTP，因此擴增的同時又是一個標記過程。cDNA探針PCR擴增法標記原理
雙鏈DNA探針標記法
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連
熒光探針的分類及應用
受到激發光激發后，從激發態單重態回到基態，在紫外-可見-近紅外區有特征發光，稱之為熒光。熒光性質（激發和發射波長、強度、壽命、偏振等）可隨所處環境的性質，如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子，被稱為熒光探針。熒光探針分類很多，可以根據材料屬性分為有機和無機探針，可以根據探針尺寸分為
近紅外熒光探針檢測活性氧/活性硫交互響應
健康的生態環境是人類生存發展的物質基礎，環境受到破壞將危害人類健康。生物細胞內活性硫物種在調節環境和人體平衡方面起著重要的作用。“活性硫物種”是含硫生物分子的集合名詞，該類分子作為硫信號轉導的關鍵位點，在生命體的生理和病理過程中發揮著至關重要的作用。硫化氫（H2S）作為活性硫物種家族的一員，其對
雙鏈DNA探針標記法的介紹
分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到
分子雜交技術的核酸探針標記法
核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。 分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA
雙鏈DNA探針標記法介紹
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。1.?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的
研究揭示葉綠體識別活性氧分子的分子機制
6月27日，中國科學院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所上海植物逆境生物學研究中心Chanhong Kim研究組在《自然-通訊》（Nature Communications）發表了題為Oxidative post-translational modification of EXECUT
鋅離子熒光染料探針的應用
鋅離子在許多生理和病理過程中都起到至關重要的作用,因此對鋅離子進行探測和識別有重要理論和實際意義。熒光探針因其設計簡單、易于操作、靈敏度高、可細胞成像等諸多優點而廣泛應用于鋅離子的識別研究。鋅是生物中含量第二高的過渡金屬（僅次于鐵), 大腦中大多數Zn?2+緊密結合，因此細胞外和細胞內的游離Zn?2
什么是熒光標記法
熒光物標記法，神經纖維的末梢可以吸收很多熒光化合物或熒光染料,經軸突逆向運輸到細胞體內,從而建立逆行熒光標記法。例如:Kuypers等(1977)用這種方法在熒光顯微鏡下根據所用熒光物標記物特有的波長顯示吸收熒光物的神經細胞。目前用于神經元標定的熒光物質有十多種。可以根據實驗的要求進行單熒光物、雙標
末端標記法介紹DNA探針的標記方法
末端標記法不是將DNA進行全長標記，只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針，因為攜帶的標記分子較少，所以標記比活性不高。
切口平移法雙鏈DNA探針標記法
?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'
鈣離子熒光探針：比值型熒光探針
前面我們介紹了熒光指示劑法可以將Ca2+檢測的實驗與其他技術結合使用，如可以與流式細胞儀、熒光分光光度計、或者熒光顯微鏡進行聯合檢測 。紫外光型主要包括Quin-2、Indo-1、Fura-2等，數量較少，可見光型數目較多，包括Fluo-3、鈣黃綠素、Rhod-2等。熒光指示劑根據測光原理和數據
關于DNA探針的應用介紹
DNA探針可以用來診斷寄生蟲病，現場調查及蟲種鑒定，可用于病毒性肝炎的診斷，遺傳性疾病的診斷，可用于檢測飲用水病毒含量。具體方法：用一個特定的DNA片段制成探針，與被測的病毒DNA雜交，從而把病毒檢測出來。與傳統方法相比具有快速、靈敏的特點。傳統的檢測一次，需幾天或幾個星期的時間，精確度不高，而
生物熒光標記法是什么
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
生物熒光標記法是什么
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
生物熒光標記法是什么
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
隨機引物合成法雙鏈DNA探針標記法
隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度為400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優點是：(1)Klenow片段沒有5'→3'外切酶活
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（二）
圖5.EGFR在細胞中轉運的實時記錄。（a）示意圖，用于解釋如何利用FAPL探針來實時追蹤EGFR相關的細胞膜轉運過程。（b）COS7細胞中表達的EGFR用DRBG-488標記（綠色），溶酶體用lysosometracker（紅色）標記。（c）對表達SNAP-EGFR–CFP的MDCK細胞進行共聚焦
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（三）
細胞骨架如微管、微絲等一直是生命科學研究的重點。近期Johnsson等科學家將SiR直接標記于與微管和微絲分別特異性結合的小分子docetaxel和jasplakinolide，即形成SiR-tubulin和SiR-actin，實現了在不對細胞或組織進行任何轉染或基因組修飾的條件下直接進行活細胞成像
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（五）
SNAP-tag技術在STED超高分辨率顯微成像中的應用近十年中，顯微成像技術得到了飛躍的發展，填補光學顯微鏡（~200 nm）到電子顯微鏡（~0.1 nm）分辨率缺口，打破光學衍射極限的超高分辨率顯微鏡也越來越趨于成熟化。其中，德國馬普研究所的Stefan Hell教授憑借其研發的受激發射
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（四）
熒光顯微鏡在研究活細胞中蛋白質分子的定位、相互作用及動力學等生命活動中起著不可或缺的作用。將熒光蛋白如綠色熒光蛋白和目的蛋白融合表達，然后利用熒光蛋白發出的特異性熒光來觀察和追蹤目的蛋白分子在科學研究中得到了廣泛的應用。但是熒光蛋白具有量子產量低、成熟速度受限、光譜容易受到環境因素影響及容易形成聚集
活細胞熒光成像的新型標記法及其在STED中的應用（一）
如何免除活細胞標記中的清洗（washout）步驟？SNAP-tag等標記方法為活細胞顯微成像帶來了革命性的變化，也因此被Nature雜志評為2004年最熱門的科研技術之一。但是傳統的SNAP-tag標記仍然有很大的缺陷。將帶有熒光探針的底物BG加入細胞后需要多次清洗細胞，才能將未結合的BG去除從而消
改良過碘酸鈉標記法制備酶標抗體
HRP分子中與酶活性無關的糖基被過碘酸鈉氧化為醛基，再與抗體蛋白的氨基形成Schiff堿。為了防止酶蛋白的氨基與醛基發生自身偶聯，在標記前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封閉酶蛋白中殘留的a-和e-氨基。酶與抗體的結合反應后，再加入硼氫化鈉還原成穩定的結合物。 (1) 取HRP 5mg溶