細胞膜流動性測定實驗_熒光探針標記法
實驗方法原理常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后，介質粘度增加，順反異構受到抑制，成為唯一能發光的全反構型。實驗材料腫瘤細胞試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液DPH儀器、耗材熒光分光光度計離心機實驗步驟1. 取對數生長期的腫瘤細胞，以pH7.2，0.01 mol/l 磷酸鹽緩沖液洗滌兩次。2. 取107個細胞，離心，加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。3. 25℃振蕩溫育30 min，再以PBS洗滌1次。4. 懸浮于4 ml PBS溶液中。5. 測定儀器為熒光分光光度計，在激發波長362 nm，發射波長432 nm，狹縫10條件下測定熒光強度。注意事項由于DPH可進入細胞內部，后來又合成了其陽性離子衍生物1-（4-三甲胺苯基）-6-苯基-1,3,5-己三烯（TMDPH）。TMDPH不能透過......閱讀全文
細胞膜流動性測定實驗_熒光探針標記法
實驗方法原理常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后，介質粘度增加，順反異構受到抑制，成為唯一能發光的全反構型。實驗材料腫瘤細胞試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液DPH儀器、耗材熒光分光光度計離心機實驗步驟1. ?取對數生長期的腫瘤細胞，以pH
細胞膜流動性測定實驗
實驗方法原理 常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后，介質粘度增加，順反異構受到抑制，成為唯一能發光的全反構型。實驗材料 腫瘤細胞試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖液DPH儀器、耗材 熒光分光光度計離心機實驗步驟 1. ?取對數生長期的腫瘤細
細胞膜流動性測定實驗
熒光探針標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后，介質粘度增加，順反異
細胞膜流動性測定實驗
熒光探針標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后，介質粘度增加，順反異
細胞凋亡檢測實驗——熒光探針雙標記法
實驗方法原理本實驗用1μg/ml 三尖杉酯堿HT在體外誘導培養的HL-60細胞發生凋亡，同時也有少數細胞發生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）對細胞進行雙重染色，可以區別凋亡、壞死及正常細胞。三尖杉酯堿（HT）是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病，
細胞膜流動性測定
熒光探針標記法 電子自旋共振法 實驗材料 對數生長期腫瘤細胞 試劑、試劑盒
細胞膜流動性測定實驗_電子自旋共振法
實驗材料對數生長期腫瘤細胞試劑、試劑盒PBS游離5NSA儀器、耗材毛細管離心機離心管試管燒杯電子自旋共振儀膜的流動性是生物膜結構的基本特征之一，主要指膜脂肪酸鏈部分及膜蛋白的運動狀態。膜脂類分子在相變溫度以上條件下主要有側向擴散、旋轉、左右搖擺、伸縮振蕩、翻轉及異化運動等方式。膜蛋白的運動方式大體分
關于活性氧分子熒光探針標記法的應用
眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中產生
關于活性氧分子熒光探針標記法的應用介紹
眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中
關于活性氧分子熒光探針標記法的應用介紹
眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產生副產品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結構造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中
科學家發展細胞膜“緩沖熒光探針”
近日，中國科學院大連化學物理研究所副研究員喬慶龍和研究員徐兆超團隊發展了組裝介導的細胞膜緩沖熒光探針，實現了對細胞質膜的長時間穩定標記和超分辨動態熒光成像，觀察到了質膜絲狀偽足的動態運動和細胞外囊泡的分泌過程，發現了兩種細胞外囊泡的融合模式，為細胞質膜的超分辨動態成像提供了工具。相關成果發表在ACS
科學家發展細胞膜“緩沖熒光探針”
近日，中國科學院大連化學物理研究所副研究員喬慶龍和研究員徐兆超團隊發展了組裝介導的細胞膜緩沖熒光探針，實現了對細胞質膜的長時間穩定標記和超分辨動態熒光成像，觀察到了質膜絲狀偽足的動態運動和細胞外囊泡的分泌過程，發現了兩種細胞外囊泡的融合模式，為細胞質膜的超分辨動態成像提供了工具。相關成果發表在ACS
LSCM細胞膜流動性
?細胞膜流動性?采用熒光光漂白恢復(FRAP)技術還可對細胞膜流動性進行研究。利用NBD-C6-HPC熒光探針標記細胞膜磷脂，然后用高強度的激光束照射活細胞膜表面的某一區域(1～2μm)，使該區域的熒光淬滅或漂白，再用較弱的激光束照射該區域。可檢測到細胞膜上其他地方未被漂白的熒光探針流動到漂白區域時
PCR擴增標記法探針標記
PCR擴增標記法探針標記???? PCR擴增標記法的原理與普通的核酸PCR相同。即Taq?DNA多聚酶以DNA為模板，在特異引物引導下，在PCR儀中合成cDNA探針。由于在反應體系中加入一定量的標記dNTP，因此擴增的同時又是一個標記過程。cDNA探針PCR擴增法標記原理
雙鏈DNA探針標記法
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連
雙鏈DNA探針標記法介紹
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。1.?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的
差示反轉錄PCR實驗——熒光標記法
實驗方法原理熒光，又作“螢光”，是指一種光致發光的冷發光現象。當某種常溫物質經某種波長的入射光（通常是紫外線或X射線）照射，吸收光能后進入激發態，并且立即退激發并發出比入射光的的波長長的出射光（通常波長在可見光波段）；而且一旦停止入射光，發光現象也隨之立即消失。具有這種性質的出射光就被稱之為熒光。在
雙鏈DNA探針標記法的介紹
分子生物研究中,最常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到
分子雜交技術的核酸探針標記法
核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。 分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA
關于細胞膜的流動性的介紹
細胞膜是由磷脂雙分子層和鑲嵌、貫穿在其中及吸附在其表面的蛋白質組成的，磷脂雙分子層疏水的尾部在內，親水頭部在外。磷脂由分子層構成了膜的基本支架,這個支架不是靜止的。磷脂雙分子層是輕油般的液體,具有流動性.蛋白質分子有的鑲在磷脂分子層表面,有的部分或全部嵌入磷脂雙分子層中,有的橫跨整個磷脂雙分子層
什么是熒光標記法
熒光物標記法，神經纖維的末梢可以吸收很多熒光化合物或熒光染料,經軸突逆向運輸到細胞體內,從而建立逆行熒光標記法。例如:Kuypers等(1977)用這種方法在熒光顯微鏡下根據所用熒光物標記物特有的波長顯示吸收熒光物的神經細胞。目前用于神經元標定的熒光物質有十多種。可以根據實驗的要求進行單熒光物、雙標
切口平移法雙鏈DNA探針標記法
?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'
鈣離子熒光探針：比值型熒光探針
前面我們介紹了熒光指示劑法可以將Ca2+檢測的實驗與其他技術結合使用，如可以與流式細胞儀、熒光分光光度計、或者熒光顯微鏡進行聯合檢測 。紫外光型主要包括Quin-2、Indo-1、Fura-2等，數量較少，可見光型數目較多，包括Fluo-3、鈣黃綠素、Rhod-2等。熒光指示劑根據測光原理和數據
生物熒光標記法是什么
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
生物熒光標記法是什么
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
生物熒光標記法是什么
熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發成為激發態，當從激發態恢復基態時，發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡
隨機引物合成法雙鏈DNA探針標記法
隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度為400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優點是：(1)Klenow片段沒有5'→3'外切酶活
末端標記法介紹DNA探針的標記方法
末端標記法不是將DNA進行全長標記，只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針，因為攜帶的標記分子較少，所以標記比活性不高。
免疫電鏡膠體金標記法（簡稱金標法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金標記法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，載于200～300網孔的鎳網上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蠟板上，將網的載片面輕浮于液滴上10min至1h；（3）雙蒸水洗3次，每次10分鐘。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛雙蒸水的注射器沿鎳網面沖洗，水流
改良過碘酸鈉標記法制備酶標抗體
HRP分子中與酶活性無關的糖基被過碘酸鈉氧化為醛基，再與抗體蛋白的氨基形成Schiff堿。為了防止酶蛋白的氨基與醛基發生自身偶聯，在標記前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封閉酶蛋白中殘留的a-和e-氨基。酶與抗體的結合反應后，再加入硼氫化鈉還原成穩定的結合物。 (1) 取HRP 5mg溶