免疫組化實驗原理和步驟（二）
免疫組化問題解答1、染色過強 a 抗體濃度過高戒孵育時間過長 。降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時、或4度過夜 b 孵育溫度過高超過37度。 一般在室溫20-28度 c DAB顯色時間過長戒濃度過高 顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準。2、非特異性背景染色a 操作過程中沖洗不充分 ：每步沖洗3次每次5分鐘。b 組織中含過氧化物酶未阻斷：可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長。c 組織中含內原性生物素：正常非免疫動物血清再封閉。d 血清蛋白封閉不充分：延長血清蛋白封閉時間。3、染色弱a 抗體濃度過低、孵育時間過短：提高抗體濃度、孵育時間不能少于60分鐘。b 試劑超過有效使用時間：應更換試劑。c 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干：每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液使試劑稀釋（應防止切片干燥）。d 室溫太低：低于15度，要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘，或4度冰箱過夜。e蛋白封閉過度：封閉不要......閱讀全文
免疫組化實驗
實驗方法原理 免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水
免疫組化實驗原理
? ? 首先來談一下免疫組織化學（IHC, Immunohistochemistry）、免疫細胞化學（ICC, Immunocytochemistry）和免疫熒光(IF, immunofluorescence technic )的共通之處和區別。? ? 平常說的 免疫組化 就是用石蠟切片做的免疫組織
石蠟切片免疫組化實驗
即用型(Envision)快速酶免疫組化二步法免疫組化可應用于：（1）確定組織細胞內抗原 (多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究；（2）診斷異常細胞，指導治療。實驗方法原理根據聚合酶技術把辣根過氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子結合在多聚酶上形成多聚物分子,其與待檢的抗原特異性的結合后，加入
石蠟切片免疫組化實驗
實驗方法原理 根據聚合酶技術把辣根過氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子結合在多聚酶上形成多聚物分子,其與待檢的抗原特異性的結合后，加入底物顯色。實驗材料 石蠟切試劑、試劑盒 PBS檸檬酸鹽緩沖液蒸餾水增強劑酶標抗鼠 兔聚合物蘇木素酒精二甲苯樹膠鹽酸二氨基聯苯胺儀器、耗材 烘箱微波盒塑料切片架顯微鏡膠頭
石蠟切片免疫組化實驗
即用型(Envision)快速酶免疫組化二步法 鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結SP法 卵白素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC）法 鏈霉親和素—生物素—過氧化物酶復合物（SABC）法 ? ? ? ? ? ?
免疫組化實驗方法
一、免疫組化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）原理免疫組化是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 （熒光素、酶、金屬離子、同位素） 顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質
石蠟切片免疫組化實驗2
鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結SP法實驗方法原理SP（streptavidin-perosidase）法，即鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法。SP法是最常使用的方法。試劑、試劑盒二甲苯酒精PBS雙氧水枸櫞酸緩沖液羊血清工作液辣根過氧化物酶鏈霉素卵白素蘇木素DAB儀器、耗材冰箱顯微鏡燒杯玻璃缸
石蠟切片免疫組化實驗3
卵白素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC）法實驗材料蠟塊切片試劑、試劑盒多聚甲醛蒸餾水蔗糖過氧化氫甲醇PBS酒精KPBS牛血清白蛋白疊氮納一抗二抗儀器、耗材冰箱顯微鏡燒杯實驗步驟1. ?4%多聚甲醛常規灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01 M KPBS清洗5
石蠟切片免疫組化實驗4
實驗方法原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一種顯示組織和細胞中抗原分布的簡便而敏感的免疫組化染色方法，是眾多免疫組織化學方法的一種。SABC法：一抗+ 生物素標記二抗+ 滴加試劑SABC（鏈霉卵白素+ 辣根酶標記生物素）+ 辣根酶底物顯色。目前常用的親和素從
免疫組化實驗注意事項
當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。那么在做免疫組化實驗注意事項有哪些呢？下面我們來詳細了解一下：??? 對照/標本無染色??? ① 確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。??? ② 確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育
石蠟切片免疫組化實驗步驟
脫蠟和水化1. 將切片依次浸入二甲苯Ⅰ10 min，二甲苯Ⅱ（10 min）。2. 再次浸入無水乙醇Ⅰ（5 min）-無水乙醇Ⅱ（5 min）-95%酒精（5 min）-80%酒精（5 min）-70%酒精（5 min），然后去離子水沖洗2次，每次2 min。 抗原修復?(可選)3. 將組織切片放入
免疫組化雙染實驗protocol
第一抗體的染色：??1、?將切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10分鐘，PBS沖洗2分鐘×3次??2、?加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）??3、?加入一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件）??4、?使用含有0.05％吐溫20的PBS(?TPB
免疫組化雙染實驗流程
一、脫蠟和水化方法同SP法。二、第一抗體的染色1、將切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10 min，PBS沖洗3 min×3次；2、加100 ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10 min，倒掉（不能沖洗）；3、加入一抗（按照說明書推薦濃度和孵育條件）；4、使用含有0.05
免疫組化實驗原理和步驟
實驗原理： 抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由于抗原與抗體的復合物是無色的，因此還必須借助于組織化學的方法將抗原
免疫組化的實驗試劑及實驗步驟
一、試劑（1）PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。（2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉 3g，檸檬酸 0.4g。（3）0.
免疫組化
免疫組織化學又稱免疫細胞化學，可以用于：（1）顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應；（2）是對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。實驗方法原理帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的
免疫組化
一，免疫組織化學簡介免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應炕原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞
免疫組化
一，免疫組織化學簡介免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應炕原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞
如何實現完美的免疫組化實驗
（一）、儀器設備1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫用微波爐；2）水浴鍋（二）、試劑1）PBS 緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，p
免疫組化實驗中常用染色方法
根據標記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標法，親和組織化學法，后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。
免疫組化實驗操作步驟有哪些
免疫組化實驗所需試劑 1）PBS緩沖液（pH7.2~7.4）：NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L. 2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB,pH6.0,1000ml）：檸檬酸三鈉
免疫組化技術實驗原理及分類
免疫組化技術實驗原理： 抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究。眾所周知，抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某
免疫組化實驗原理和步驟（二）
免疫組化問題解答1、染色過強?a 抗體濃度過高戒孵育時間過長 。降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時、或4度過夜?b 孵育溫度過高超過37度。 一般在室溫20-28度 c DAB顯色時間過長戒濃度過高 顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準。2、非特異性背景染色a 操作過程中沖洗不充分 ：
免疫組化技術實驗原理及分類
免疫組化技術實驗原理： 抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究。 眾所周知，抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將
免疫組化實驗原理和步驟（三）
免疫組化技術的關鍵問題1.組織處理恰當的組織處理是做好免疫組化染色的先決條件，也是決定染色成敗的內部因素，在組織細胞材料準備過程中，不僅要求保持組織細胞形態完整，更要保持組織細胞的抗原性不受損戒彌漫，防止組織自溶。如果出現自溶壞死的組織，抗原已經丟失，即使用很靈敏的檢測抗體和高超的技術，也很難檢出所
小鼠組織切片免疫組化實驗步驟
實驗概要免疫組化，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學
免疫組化實驗原理和步驟（一）
實驗原理：抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由于抗原與抗體的復合物是無色的，因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結合的部
免疫組化實驗原理和步驟（五）
（6）結果判斷免疫組化的結果判斷有兩種方法：一是對以檢測結果陽性細胞指數來定性(如核抗原的標記)，判斷方法是以一個規野中陽性細胞數不總細胞癿百分比，再取10個相同視野算取平均指數。另一種方法以染色陽性強度和陽性檢出率相結合而定，一般陽性細胞數在0-25為陰性，25-50為十，50-75為十十，75以
免疫組化實驗操作步驟有哪些？
? 免疫組化實驗所需試劑??? 1）PBS緩沖液（pH7.2~7.4）：NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L.??? 2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB,pH6.0,1000ml）：檸檬酸三鈉 3g,
小鼠組織切片免疫組化實驗步驟
材料二甲苯 酒精（100％，95％） EDTA抗原修復工作液（pH8.0，稀釋50倍使用） 0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀釋10倍使用） DAB顯色液（臨用前配制：試劑盒A、B、C各50ul，于1ml水中混勻）。方法1.? 石蠟切片置60℃烘箱中烘烤過夜 2.?