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    利用大引物PCR在同一試管中進行高效快速定點誘變實驗

    試劑、試劑盒 擴增緩沖液含有四種 dNTP 的混合溶液熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠正向和反向內引物誘變引物模板 DNA儀器、耗材 帶屏障裝置的自動移液器用吸頭微型離心機用離心管可調式移液器實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液,緩沖液和試劑的成分請參閱附錄 1。將貯存液稀釋到合適的濃度。10x 擴增緩沖液含有四種 dNTP 的混合溶液,每一種 dNTF 的濃度為 2.5 mmol/L酶和緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶 [Hot-Tub DNA 聚合酶(Amersham) 或同類產品]大多數 DNA 聚合酶保存在含 50% 甘油的貯存液中。這種溶液非常粘稠,很難準確取量。最簡單的方法是在微型離心機上將含酶的離心管在 4°C 以最大轉速離心 10s, 然后用一個可調式移液器取出所需數量的酶。用一個帶屏障裝置的自動移液器裝配 PCR 反應成分。凝膠1% 的瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠(含 0.5ug/ml 溴化乙錠)......閱讀全文

    含尿嘧啶的單鏈噬菌體 M13 DNA 制備實驗

    經典的 Kunfcel 寡核苷酸指導的誘變方法利用大腸桿菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特異地篩除去含尿嘧啶堿基的 DNA 的選擇性作用(請參考寡核苷酸誘變信息欄)。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩

    寡核苷酸指導的單鏈 DNA 誘變實驗

                實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌 試劑、試劑盒

    寡核苷酸指導的單鏈 DNA 誘變實驗

    實驗材料 適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態菌試劑、試劑盒 ATPPE1緩沖液PE2 緩沖液噬菌體 T4 DNA 連接酶噬菌體 T4 多核苷酸激酶大腸桿菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段M13 噬菌體通用測序引物含 4 種 dNTP 的 dNTP 溶液誘變的 M

    寡核苷酸指導的單鏈 DNA 誘變實驗

    本文介紹了由 Zoller 和 Smith 的雙引物技術(1984,1987) 結合 Kunkel 的誘變體產量富集方法(1985) 構成的經典方案。本方案中使用的單鏈 DNA 模板含有較高的尿嘧啶殘基,因為它們是從生長于 dut 和 ung 基因突變大腸菌中的 M13 噬菌體中制備的(見方案 1)

    含尿嘧啶的單鏈噬菌體 M13 DNA 制備實驗

                試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 乙醇 氯化鈉 苯酚 醋酸鈉 TE 瓊

    含尿嘧啶的單鏈噬菌體 M13 DNA 制備實驗

    試劑、試劑盒 緩沖液和溶液乙醇氯化鈉苯酚醋酸鈉TE瓊脂糖凝膠原始的重組 M13 噬菌體單鏈 DNAYT 培養基儀器、耗材 Corex 離心機管巴斯德滴管柱層析樹脂大腸桿菌菌株 CJ236大腸桿菌菌株 TG1JM109 或相當的菌株實驗步驟 材料緩沖液和溶液各種貯存液,緩沖液和試劑成分請參閱附錄 1。

    蛋白質組與蛋白質組學簡介-1

    一、蛋白質組概念:一個細胞、一個組織或一個機體全部基因所表達的全部蛋白質。 二、蛋白質組學研究范疇 1.蛋白質和蛋白質間 2.蛋白質和核酸之間 3.蛋白質及其組成質點的分離、分析、鑒定 4.蛋白質結構分析 5.生理、病理或不同發育狀態下蛋白質組表

    中科大施蘊渝院士JBC發表新成果

      6月15日,國際學術期刊《Journal of Biological Chemistry》在線刊登了中國科技大學的一項研究成果,題為“Structural Basis for the Specific Recognition of RhoA by the Dual GTPase-activati

    DNA序列測定的技術和策略

    目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭,但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸,每組寡核苷酸都有固定的起點,但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿

    DNA序列測定技術(Sanger雙脫氧鏈終止法與Maxam-Gilbert ...

    選擇隨機定向測定策略的影響因素(1)計算設備 任何大規模的測序計劃將在很大程度上依賴計算機程序對原始序列資料進行分類、整理和排列(Staden,1986)。在權衡隨機法的利與弊之時,必須將與適當的計算機設備進行聯機的問題放到壓倒一切的位置上來考慮。如果這些設備尚無從適當的計算機設備進行聯機的問題

    CRISPR大戰落下帷幕

      美國專利局審查與上訴委員會近日就CRISPR專利糾紛作出裁決,麻省理工學院和哈佛大學共同創建的布羅德研究所可繼續保有此前獲批的“基因剪刀”技術專利。這意味著這場價值數十億美元的專利案糾紛以張鋒一方獲勝暫告一段落。CRISPR技術先驅(從左到右):George Church、Jennifer Do

    提高蛋白質的穩定性的一些方法

    1.葡萄糖異構酶(GI)在工業上應用廣泛,為提高其熱穩定性,朱國萍等人在確定第138位甘氨酸(Gly138)為目標氨基酸后,用雙引物法對GI基因進行體外定點誘變,以脯氨酸(Pro138)替代Gly138,含突變體的重組質粒在大腸桿菌中表達,結果突變型GI比野生型的熱半衰期長一倍;最適反應溫度提高10

    離心機在血型選取上的應用

    輸血時如血型不合會造成患者出現輸血的不良反應,因此使用相符的血型是輸血安全的前提保證。而作為人類的重要遺傳標志-血型,在近年科學的發展下,人們逐步探索分析,已發現300余種現人類紅細胞血型抗原。當今,世界多國正努力建立稀有血型細胞血庫,當中對所發現的稀有血型,如Rh、MNSs、P、Kell、Kidd

    外切核酸酶 Ⅲ 消化產生多組嵌套缺失突變體

    試劑、試劑盒 dNTP 溶液乙醇外切核酸酶Ⅲ緩沖液核酸酶 S1 停止反應混合液酚氯仿醋酸鈉外切核酸酶ⅢKlenow 混合物連接混合物核酸酶 S1 反應混合物限制性內切酶凝膠靶 DNA儀器、耗材 微量離心管或帶 U-型孔的微量滴定板水浴裝置實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液,緩沖液和試劑的成分清參閱附錄

    聚合酶鏈反應(PCR)技術的發展和應用-1

    第一節 概述  聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction, PCR),又稱無細胞克隆技術(“free bacteria”cloning technique),是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。該方法一改傳統分子克隆技術的模式,不通過活細胞,操作

    諾貝爾化學獎全收錄(1901-2018)

      當地時間10月3日,2018年度諾貝爾化學獎獲得者揭曉。瑞典皇家科學院決定將2018年的諾貝爾化學獎授予美國加州理工學院科學家Frances H. Arnold在“酶的定向進化(the directed evolution of enzymes)”方面的研究,另一半授予美國密蘇里大學科學家Geo

    一些提高蛋白質的穩定性的方法

    1.葡萄糖異構酶(GI)工業上應用廣泛,為提高其熱穩定性,朱國萍等人在確定第138位甘氨酸(Gly138)為目標氨基酸后,用雙引物法對GI基因進行體外定點誘變,以脯氨酸(Pro138)替代Gly138,含突變體的重組質粒在大腸桿菌中表達,結果突變型GI比野生型的熱半衰期長一倍;最適反應溫度提高10~

    外切核酸酶 Ⅲ 消化產生多組嵌套缺失突變體

    逐步地從靶 DNA 的一端或另一端刪除多個寡核苷酸的嵌套式缺失突變方法被用來確定功能性順式調控元件的邊界,早先曾作為指導 DNA 測序的模板。該方法依賴于核酸酶,這些核酸酶均以可預測的方式消化 DNA, 其中外切核酸酶 HI 是目前最好的。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J.

    第四屆藥物代謝ISSX/CSSX學術會議精彩報告

      2013年5月17日-19日,在開封河南大學,第四屆國際藥物代謝學會/中國藥代專業委員會(ISSX/CSSX)學術會議順利召開。本屆會議由國際藥代學會 (ISSX)、中國藥物代謝專業委員會 (CSSX)、河南省科學技術協會主辦。參加會議的代表包括國內外藥物代謝動力學領域專家,全國各地高等院校、研

    外切核酸酶 Ⅲ 消化產生多組嵌套缺失突變體

                試劑、試劑盒 dNTP 溶液 乙醇 外切核酸酶Ⅲ緩沖液 核酸酶 S1 停止反應混合液 酚

    低能離子植物誘變機理研究方面取得新進展

      日前,在國家自然科學基金和中科院重點創新項目的支持下,等離子體所離子束生物工程學院重點實驗室植物研究組的相關研究取得了新的進展。   低能離子輻射的誘變機理一直是學術界關注的焦點。該研究小組建立了以同源重組頻率和AtRAD54基因的表達水平作為主要遺傳檢測終點的輻射長程效應研究體

    定點誘變實驗——基本方案

    定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組,也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化),包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征,是基因研究工作中一種非常有用的手段。實驗材料DNA試劑、試劑盒TE寡核

    植物生物學研究數據庫

    實驗概要植物生物學研究數據庫實驗步驟http://bioinf.scri.sari.ac.uk/cgi-bin/plant_snorna/home 英國 Top 植物種的snoRNA基因數據庫。 綜合 http://bioinformatics.psb.ugent.be/webt

    小麥抗病關鍵生物技術研究獲突破

      普通小麥(Triticum aestivum L., 2n = 42, AABBDD)是世界上最重要的糧食作物之一,為人類提供約20%的能量。普通小麥是異源六倍體,基因組龐大(17,000Mb, 約是人類基因組的5倍)且含有高達80%-90%的重復序列,因此,針對小麥的基因功能研究及遺傳育種都非

    生命科學研究中常見模式生物簡介(一)

    模式生物由于其結構簡單、生活周期短、培養簡單、基因組小等特點,在生物醫學等領域發揮重要作用。模式生物作為材料不僅能回答生命科學研究中最基本的生物學問題,對人類一些疾病的治療也有借鑒意義。常見的模式生物有有真菌中的酵母,原核生物中的大腸桿菌,低等無脊椎動物中的線蟲,昆蟲綱的果蠅,魚綱的斑馬魚,哺乳綱的

    分子標記

    內容:一、遺傳標記 二、DNA分子標記 三、染色體原位雜交 四、DNA分子標記的應用 長期以來,植物育種中選擇都是基于植株的表型性狀進行的,當性狀的遺傳基礎較為簡單或即使較為復雜但表現加性基因遺傳效應時,表型選擇是有效的。但水稻的許多重要農藝性狀為數量性狀,如

    引發倫理爭議和憂慮 基因編輯CRISPR/Cas9新技術路在何方?

    正在生物體內發揮功能的CRISPR/Cas9系統  ■新視野  CRISPR/Cas9這項新技術使人們能更精準地對DNA代碼進行控制,引發了遺傳學和細胞生物學領域的革新,科學家們對它寄予厚望,希望借助它的力量,治療包括癌癥在內的疾病并進一步解開人類細胞身上籠罩的謎團。  但這一基

    基因編輯CRISPR/Cas9新技術路在何方?

      CRISPR/Cas9這項新技術使人們能更精準地對DNA代碼進行控制,引發了遺傳學和細胞生物學領域的革新,科學家們對它寄予厚望,希望借助它的力量,治療包括癌癥在內的疾病并進一步解開人類細胞身上籠罩的謎團。  但這一基因編輯技術也引發了科學家們的憂慮。據美國趣味科學網站報道,有科學家擔心,這一新工

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