CsCl法從培養細胞中提取RNA
試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖溶液 硫氰酸胍溶液CsClTES 緩沖液 乙酸鈉緩沖液無水乙醇 經 DEFC 處理的水。儀器、耗材 離心機 注射器及20W針頭實驗步驟 一 材料與設備1) 磷酸鹽緩沖溶液 (PBS)2) 硫氰酸胍溶液：4mol/L 硫氰酸胍，0.lmmol/LTris-HClpH7.5，1%β-巰基乙醇3)CsCl5.7mol/：L(DEPC 處理）4)TES 緩沖液:0.1%SDS，10 mmol/LTris-ClpH7.4，lmmol/LEDTA5)3 mmol/L 乙酸鈉緩沖液 (PH5.2，DEPC 處理）6) 無水乙醇7) 經 DEFC 處理的水8) 離心機9)6 ml 注射器及 20W 針頭二 操作方法1. 單層培養細胞1) 室溫下用 PBS 洗滌細胞，每平皿 5 ml 洗滌 2 次。2) 在不超過 105 個細胞中加人 3.5 ml 硫氰酸胍溶液，使之遍布整個平皿。用橡膠細胞刮于擦刮平皿，回收黏稠的細胞裂解......閱讀全文
CsCl法從培養細胞中提取RNA
試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖溶液 硫氰酸胍溶液CsClTES 緩沖液 乙酸鈉緩沖液無水乙醇 經 DEFC 處理的水。儀器、耗材 離心機 注射器及20W針頭實驗步驟 一 材料與設備1) 磷酸鹽緩沖溶液 (PBS)2) 硫氰酸胍溶液：4mol/L 硫氰酸胍，0.lmmol/LTris-HClpH7.5，1%
CsCl法從培養細胞中提取RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖溶液 硫氰酸胍溶液 CsCl TES 緩沖液 乙酸鈉緩沖液 無水乙醇 經 DEFC 處理的水
2.1.5－CsCl法從培養細胞中提取RNA
通過硫氰酸胍提取和氯化銫離心法制備 RNA，適于分離細胞質和細胞核難分開的細胞以及富含 RNase 的細胞中的 RNA。試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖溶液硫氰酸胍溶液CsClTES 緩沖液乙酸鈉緩沖液無水乙醇經 DEFC 處理的水。儀器、耗材離心機注射器及20W針頭實驗步驟一 材料與設備1) 磷酸鹽緩沖溶液
CsCl法從組織中提取RNA
試劑、試劑盒 液氮 組織胍溶液 十二烷基肌氨酸鈉 CsCl 組織重懸液 乙酸鈉酚 氯仿 異戊醇 異戊醇 無水乙醇儀器、耗材 組織搗碎機 離心機實驗步驟 一 材料與設備1）液氮2）組織胍溶液：590.8 g 異硫氰酸胍溶于 400ulDEPC 處理的水中，加入 25 mmol/LTris-Cl(p
CsCl法從組織中提取RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 液氮 組織胍溶液 十二烷基肌氨酸鈉 CsCl 組織重懸液 ? 乙酸鈉 酚 氯仿
2.1.6－CsCl法從組織中提取RNA
由于一些組織（如胰臟和睥臟）含有高濃度的內源性 RNA 酶，因此純化源于組織的 RNA 須更加小心。試劑、試劑盒液氮組織胍溶液十二烷基肌氨酸鈉CsCl組織重懸液乙酸鈉酚氯仿異戊醇異戊醇無水乙醇儀器、耗材組織搗碎機離心機實驗步驟一 材料與設備1）液氮2）組織胍溶液：590.8 g 異硫氰酸胍溶于 40
總RNA提取實驗——CsCl法
實驗材料RNA試劑、試劑盒PBS異硫氰酸胍CsClDEPC無水乙醇儀器、耗材注射器電泳儀離心機培養箱實驗步驟一、 用于單層培養細胞?1. ?室溫下用PBS冼滌細胞，每平皿用5 ml，洗2次。2. ?在不超過108細胞中加入異硫氰酸胍溶液，并使之遍布整個平皿。3. ?用橡皮細胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的
純化RNA實驗——從培養的細胞中純化總RNA
實驗材料細胞試劑、試劑盒RNA 提取緩沖液變性液水飽和酚儀器、耗材培養皿Falcon 2063 管實驗步驟1. 取 1 個細胞已長滿的 100 ml 培養皿，吸出培養液，加 2 ml RNA 提取緩沖液，用橡膠刮棒刮下細胞。RNA 提取緩沖液：變性液，20 mlβ-巰基乙醇，0.144 ml2 mo
RNA提取心得（組織RNA提取和培養細胞的RNA提取）
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好，這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的（最好在半年之內，-80℃或者液氮中凍存的）組織，注意不要反復凍融，從冰凍狀態拿到0-4℃，注意不要拿到常溫，待組織解凍后，用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織，稱重后，放到預冷的勻漿器中，然后
從有限的細胞中提取－RNA－實驗
RNA 樣品可以在-80°C 中保存 6 個月。總細胞 RNA 采用 StratageneRNA 提取試劑盒，按照說明書進行。另外，也可選用 PicoPureRNA 提取試劑盒，尤其是細胞較少時。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗材料LCM 帽子試劑、試劑盒乙醇糖原R
從有限的細胞中提取－RNA－實驗
實驗材料 LCM 帽子試劑、試劑盒 乙醇 糖原RNA 提取試劑盒 超純水儀器、耗材 移液器實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、試劑和溶液75% 乙醇 (超純水配制）糖原，5 mg/ml(Ambion，Austin，TX)StratageneRNA 提取試劑盒（200345，StratageneCloni
從有限的細胞中提取－RNA－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 LCM 帽子 試劑、試劑盒 乙醇 糖原 RNA 提取試劑盒 ?超純
從外周血淋巴細胞中提取RNA
實驗概要本實驗從外周血淋巴細胞(PBls)中分離得到RNA樣品。主要試劑1. Ficoll(Amersham Biosciences)2.?冰冷磷酸鹽緩沖液(PBS)，pH 7.43. 裂解緩沖液：5mol/L單巰基氰酸胍，10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)，50mmol/L Tris—HCl
如何從凍存的細胞提取RNA
1). 將凍存管從液氮或冰箱中取出；2). 不待細胞溶解，將Trizol500ul-1ml直接放入凍存管中，此時Trizol會凍成冰狀；3). 將凍存管緩慢融化，并用加樣器吹打混勻；4). 將細胞裂解液移至Eppendorf管中，16000′g離心1min，吸出管底絮狀沉淀;注釋：該步驟并非必要，多
培養細胞的RNA提取方法介紹
1. 貼壁細胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到離心管中，離心，去上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。懸浮細胞，直接用吸管或者加樣槍吹打評壁，以使細胞基本可以被吹下來。然后離心去上清，不需要用PBS洗。2. 然后將少量細胞懸液轉移到預冷的DEPC泡過的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的
培養細胞中RNA檢測
實驗概要掌握培養細胞中RNA的檢測方法。實驗步驟1．制膠(1％)：??瓊脂糖 2.5g??? 10×Mops緩沖液 25.0ml??? H2O 192.0ml2．在微波爐中加熱煮沸使膠完全溶于水并滅菌。3．取出膠冷卻到60℃，于通風柜中加45ml甲醛，混勻。4．加20μl溴化乙錠，混勻。5．令膠液再
如何從細胞中提取高質量RNA？必看！
在實驗室中，尤其是分子生物類的實驗室中不可避免的會遇到細胞總RNA提取實驗，所提RNA樣品的質量和純度直接影響下一步的實驗，如逆轉錄，RT-PCR, microarray 等。下面我們來介紹如何提取細胞中的總RNA 。首先，我們要知道什么是總RNA。總RNA包括mRNA和miRNA等，其中mRNA也
TRIzol法提取組織和細胞總RNA
（一）試劑準備1 ． TRIzol 試劑。2 ．氯仿3 ．異丙醇4 ． 75% 乙醇（ DEPC H2O 配制）5 ． DEPC H2O （二）操作步驟 1 ． 樣品處理： （１）培養細胞：收獲細胞 1-5×10 7 ，移入 1.5ml 離心管中，加入 1ml Trizol ，混勻，室溫
提取總RNA，最少需要多少培養的細胞
用Trizol來提取細胞總RNA的話，一個6孔板的細胞足夠了。對于貼壁培養的細胞，可將培養基吸出后直接向培養板中加入Trizol來溶解細胞，然后分次移出細胞裂解物進行后續操作即可。值得注意的是，對于所加Trizol的量，是依據培養板的面積而不是依據細胞的數量來決定用量的（一般每10cm2加1ml）。
提取總RNA，最少需要多少培養的細胞
用Trizol來提取細胞總RNA的話，一個6孔板的細胞足夠了。對于貼壁培養的細胞，可將培養基吸出后直接向培養板中加入Trizol來溶解細胞，然后分次移出細胞裂解物進行后續操作即可。值得注意的是，對于所加Trizol的量，是依據培養板的面積而不是依據細胞的數量來決定用量的（一般每10cm2加1ml）。
怎樣從總RNA中提取mRNA
大多數真核細胞mRNA的3’端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脫氧核糖核苷（OligoT）可以與之配對結合，這就是提取mRNA最基本的原理。具體到實驗手段上，現在磁珠法、纖維素柱層析法都有在用。磁珠法一般是用生物素標記OligoT，親和素標記磁珠（生物素和親和素間具有高
怎樣從總RNA中提取mRNA
大多數真核細胞mRNA的3’端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脫氧核糖核苷（OligoT）可以與之配對結合，這就是提取mRNA最基本的原理。具體到實驗手段上，現在磁珠法、纖維素柱層析法都有在用。磁珠法一般是用生物素標記OligoT，親和素標記磁珠（生物素和親和素間具有高
從果蠅胚胎中提取總－RNA－或－poIy(A)－+RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 0.lmol LNaOH ?乙醇 ?3mol L 乙酸鈉 ? 苯酚 ?無 SDS 的結合緩沖液 含 SDS 的結合緩沖
從果蠅胚胎中提取總－RNA－或－poIy(A)－+RNA
試劑、試劑盒 0.lmol LNaOH 乙醇 3mol L 乙酸鈉 苯酚 無 SDS 的結合緩沖液 含 SDS 的結合緩沖液 TE 緩沖液 SEVAG 漂白劑（Bleach) 含 MgCl2 的 PBS(pH7.2) 果蠅勻漿緩沖液實驗步驟 一 材料與設備1)0.lmol/LNaOH2)70%(V/
培養細胞中RNA檢測－Northern－Blot
培養細胞中RNA檢測－Northern Blot1．制膠：（1％）瓊脂糖????????????????2.5g10×Mops緩沖液???25.0mlH2O???????????????192.0ml2．在微波爐中加熱煮沸使膠完全溶于水并滅菌。3．取出膠冷卻到60℃，于通風柜中加45ml甲醛，混勻。
總RNA的提取（Trizol法提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻進行RNA制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。1.????? 提取組織RNA時，每50～100mg組織用1ml
提取懸浮細胞RNA
提取RNA器械：離心管2支，吸管4個，酒精燈，打火機，記號筆，200ul,1000UL槍，DEPC泡過的槍頭EP管，紫外照過的手套。濾紙，DEPC純水（750ml無水乙醇＋150mlDEPC水,劇烈振蕩，使勁的搖晃，直至混勻），氯仿，75％酒精，異丙醇，Trizol，預冷的離心機（兩種），EP管架（
從RNA中提取mRNA的方法步驟
從總RNA中分離mRNA采用Promega公司的PolyATract? mRNA Isolation System III。 使用該試劑盒，mRNA產量極低，因此下述方法是以Promega公司試劑盒操作手冊為基礎，并采用儲昭暉碩士(作物遺傳改良國家重點實驗室植物分子生物學水稻分室)所建議的改進方
2.3.1－從果蠅胚胎中提取總－RNA－或－poIy(A)－+RNA
試劑、試劑盒0.lmol LNaOH乙醇3mol L 乙酸鈉苯酚無 SDS 的結合緩沖液含 SDS 的結合緩沖液TE 緩沖液SEVAG漂白劑（Bleach)含 MgCl2 的 PBS(pH7.2)果蠅勻漿緩沖液實驗步驟一 材料與設備1)0.lmol/LNaOH2)70%(V/V) 乙醇3)3mol/
組織/細胞RNA快速提取
?操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）提示：??第一次使用前請先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量無水乙醇!??操作前在裂解液RLT中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現用現配。配好的RLT 4℃可放置一個月。1.?組織培養細胞a.?收