蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（五）
五、冷 凍 干 燥溶液中溶質的濃縮可以從熱力學上通過驅使溶劑變成氣態進人頂部空間 (蒸發) 或煮沸而實現。不幸的是，不穩定的溶質(如蛋白質分子)可以被用于除去溶劑所需的熱量快速降解。由于溶液的沸點是溶液的蒸氣壓等于大氣壓 (頂部空氣壓力） 時的溫度，因此，通過增加溶液的溫度或通過降低大氣壓力 (如采用真空) 都可以使溶劑沸騰。其中后者被稱為真空濃縮 ( v a c u u m concentration)。在冷凍干燥的過程中，樣品的溫度比溶液的凝固點要低 ，溶劑通過升華而被去除。冷凍和真空可同時進行，熱量和頂部的空氣此時被除去，從而對感興趣的產品進行濃縮。將要被冷凍干燥的液態蛋白質產品通常含有生物活性成分 、溶劑體系和幾種膨脹劑及穩定劑。膨脹劑為活性分子提供支撐結構，而穩定劑則在冷凍干燥之前和樣品重新組成之后的液態形式下，對目標蛋白質活性的維持發揮重要的作用 。冷凍干燥一般分為 3 個主要的步驟 （C......閱讀全文
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（五）
五、冷 凍 干 燥溶液中溶質的濃縮可以從熱力學上通過驅使溶劑變成氣態進人頂部空間 (蒸發) 或煮沸而實現。不幸的是，不穩定的溶質(如蛋白質分子)可以被用于除去溶劑所需的熱量快速降解。由于溶液的沸點是溶液的蒸氣壓等于大氣壓 (頂部空氣壓力） 時的溫度，因此，通過增加溶液的溫度或通過降低大氣壓力
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 一、層析 在過去的 2 0 年中，蛋白質組學技術的日益
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗
預計在新奇的一級分子和生物仿制藥實體方面將會有突出的增長。一些進步的是改良的分析、開發和相互作用。現在已有許多用于去除關的方法，包括凍干、反向萃取、溶質析出，precipitation、透析(溶劑交換） 、超濾和層析技術。值得注意的是，在眾多微和設備發展的支持下，小型化和高通量的蛋白質分析取得了極大
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（一）
一、層析在過去的 2 0 年中，蛋白質組學技術的日益廣泛應用，使蛋白質濃縮和脫鹽的層析技術得到不斷革新。蛋白質組學通常需要從少量復雜的混合物中富集蛋白質，包括選擇性地濃縮特定種類的蛋白質。由于質譜 (M S ) 和基于抗體檢測技術的高靈敏度及可提供詳細生化特征的性質，它們在臨床診斷、
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（二）
5 生 產 規 模 的 層 析類似于分析用的小規模提取，制備規模和生產規模的蛋白質回收往往包括濃縮和脫鹽 。柱層析仍然是蛋白質純化的核心技術，這歸因于其可實現的高選擇性，同時具有方便耐用的填充樹脂床，原料在樹脂中通過流動而進行傳送。商業化生產酶和生物藥品通常需要加工數千升的初始原料。為了盡量
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（四）
1.超濾膜一 般 情 況 下 ，大 多 數 超 濾 膜 包 含 一 個 堅 固 的 支 撐 結 構 (如 T y v e k ? ) ，并 在 這 一 基 礎 上附加了一個非常薄的聚合物層。實際上正是這一薄層提供了選擇性通透膜所需的性質，并決定了流阻。用于超濾的膜的生產技術在過去幾十年里都沒
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（三）
三、透析透析是基于分子質量大小的液相分離技術，它由透過半透膜的選擇性擴散來實現。這種技術被認為是從大分子蛋白質中去除小分子溶質的最流行方法。特別是，這種非變性的脫鹽技術允許在良性或生理條件下更換緩沖液，其影響目標蛋白質性質的風險可降到最低限度。過去的十年里，透析的原理并沒有改變，但用于透析的技術和工
溶質的種類和應用
溶質，溶液中被溶劑溶解的物質。溶質可以是固體（如溶于水中的糖）、液體（如溶于水中的酒精）、或氣體（如溶于碳酸飲料中的二氧化碳）。其實在溶液中，溶質和溶劑只是一組相對的概念。一般來說，相對較多的那種物質稱為溶劑，而相對較少的物質稱為溶質。
批量層析法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 批量層析的特點在于層析用樹脂不放在柱中，而是放在燒杯或瓶子的容器中；通過攪拌或搖動而混內層析；以過濾或離心的辦法分出層析液。實驗材料 蛋白質溶液儀器、耗材 離子交換層析裝置實驗步驟 1. 在燒杯或錐形瓶中平衡樹脂，不斷攪拌以促進平衡；2. 傾瀉掉大部分溶液，保留的溶液置要使樹脂能輕松的
批量層析法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理批量層析的特點在于層析用樹脂不放在柱中，而是放在燒杯或瓶子的容器中；通過攪拌或搖動而混內層析；以過濾或離心的辦法分出層析液。實驗材料蛋白質溶液儀器、耗材離子交換層析裝置實驗步驟1. 在燒杯或錐形瓶中平衡樹脂，不斷攪拌以促進平衡；2. 傾瀉掉大部分溶液，保留的溶液置要使樹脂能輕松的攪拌；3
超濾法濃縮蛋白質溶液實驗
實驗方法原理超濾濃縮蛋白質是通過外力使蛋白質溶液通過濾膜而仍保留目的蛋白質的方法。實驗室超濾主要是針對小體積蛋白質溶液（幾毫升），用離心力的方法使溶液很容易通過濾膜。我們以 Amicon 系作為超濾的實例進行描述。這個方法不易引起蛋白質變性。微型濃縮器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg/ml
批量層析法濃縮蛋白質實驗
批量層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 批量層析的特點在于層析用樹脂不放在柱中，而是放在燒杯或瓶子的容器中；通過攪拌或搖動而混內層析；以過濾或離心的辦法分出層析液。
超濾法濃縮蛋白質溶液實驗
實驗方法原理 超濾濃縮蛋白質是通過外力使蛋白質溶液通過濾膜而仍保留目的蛋白質的方法。實驗室超濾主要是針對小體積蛋白質溶液（幾毫升），用離心力的方法使溶液很容易通過濾膜。我們以 Amicon 系作為超濾的實例進行描述。這個方法不易引起蛋白質變性。微型濃縮器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg
超濾法濃縮蛋白質溶液實驗
超濾法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 超濾濃縮蛋白質是通過外力使蛋白質溶液通過濾膜而仍保留目的蛋白質的方法。實驗室超濾主要是針對小體積蛋白質溶液（幾毫升），用離心力的方法使溶
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（五）
六、CID、ECD和 ETD的對比 基于質譜的蛋白質組學分析依賴于氣相中肽段在低碰撞能量下斷裂, 在質量譜圖中形成峰。進而通過峰圖確定肽段序列，再推斷出相關蛋白質。完成肽段斷裂最主要的方法就是碰撞誘導解離（collision induced dissociation，C I
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（五）
六、CID、ECD和 ETD的對比基于質譜的蛋白質組學分析依賴于氣相中肽段在低碰撞能量下斷裂, 在質量譜圖中形成峰。進而通過峰圖確定肽段序列，再推斷出相關蛋白質。完成肽段斷裂最主要的方法就是碰撞誘導解離（collision induced dissociation，C I D ) ( S w
使用Microlute－P3－PL微孔板去除板去除蛋白質和磷脂
P3板去除蛋白質類似，確定了從生物樣品中去除不需要的磷脂。?P3 PL板結合了我們備受推崇的蛋白質沉淀技術和可以選擇性去除血清樣品中離子化磷脂的部分。已知這些會引起離子抑制，在使用最敏感的儀器（例如三重四極桿和TOF-MS單元）進行LC-MS分析時，可能導致假陽性或假陰性結果。?該裝備易于使用且遵循
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌，以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物，蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說，純化的蛋
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌，以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物，蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說，純化的蛋白質
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
免疫沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 含蛋白質的樣品
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 實驗材料?含蛋白質的樣品試劑、試劑盒?100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）實驗步驟 1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30
蛋白質的濃縮技術
實驗概要蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段，現介紹幾種常用的濃縮技術。實驗步驟1. 透析袋濃縮法利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替），結扎，把高分子（6000－12000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。
蛋白質的濃縮方法
蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段，現介紹幾種常用的濃縮技術。（一）透析袋濃縮法利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替），結扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸水劑
蛋白質的濃縮技術
蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段，現介紹幾種常用的濃縮技術。（一）透析袋濃縮法利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替），結扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸
蛋白質的濃縮方法
蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段，現介紹幾種常用的濃縮技術。（一）透析袋濃縮法利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替），結扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸水劑
有機溶劑沉淀法濃縮蛋白質實驗
有機溶劑沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將有機溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白質溶液時，和高濃度鹽類似產生沉淀，這是因為它們能夠降低蛋白質的溶解度。在溫度為 10 ℃ 左
有機溶劑沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 將有機溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白質溶液時，和高濃度鹽類似產生沉淀，這是因為它們能夠降低蛋白質的溶解度。在溫度為 10 ℃ 左右時蛋白質在有機溶劑中容易變性，所以在沉淀時必須特別注意冷卻溶液和離心轉頭（0 ℃～4 ℃ 為佳），建議離子強度為 0.05～0.2 mol/L。有機溶劑
植物蛋白質組學和糖基化實驗（五）
1. 含高甘露糖型 N-糖苷糖蛋白的鑒定本方法是我們實驗室以油菜籽為實驗材料建立的，本方法也適用于其他植物材料。( 1 ) 將 6 g 植物材料放入 4°C 預冷的研缽中，加入 50 ml 預冷的 TBS 緩沖液，研磨萃取蛋白質（見注釋 13)，接著 10000 g 離心萃取物 30 min，去
蛋白質的濃縮技術方法
（一）濃縮膠濃縮法 濃縮膠是一種高分子網狀結構的有機聚合物，具有很強的吸水性能。每克干膠可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物質，如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等，適宜濃縮10 000分子量以上的生物大分子物質。濃縮后，蛋白質的回收率可達80％～90％。比濃縮膠應用方便，直接加入被