用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 實驗材料 含蛋白質的樣品試劑、試劑盒 100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）實驗步驟 1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30 min （或在冷凍箱內放置 15 min ）；3. 10 000 ×g 離心 5 min；4. 棄去上清并用吸管吸凈殘留液；5. 將沉淀再懸浮于50～100％ 0.1N NaOH 溶液，混勻。注意事項 1. 用 TCA 沉淀蛋白質，所需最低的蛋白質濃度是 5 ug／ml。2. 有時需要用 10％ TCA 或乙醇-乙醚（1：1）洗滌 TCA 沉淀的蛋白質，以除去 TCA。3. 第 5 步不用 NaOH 溶液再懸浮 TCA 沉淀，而是用乙醇-乙醚（1：1 ）洗滌 TCA 沉淀 ，并用緩沖液再懸浮沉淀，可能更易操作。4......閱讀全文
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 含蛋白質的樣品
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 實驗材料?含蛋白質的樣品試劑、試劑盒?100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）實驗步驟 1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗——丙酮沉淀法
實驗材料含蛋白質的樣品試劑、試劑盒丙酮（或其他有機溶劑如乙醇或甲醇）儀器、耗材Eppendorf 管（小塑料離心管）Eppendorf 管離心機（小型臺式離心機）混旋器實驗步驟1. 加 1 ml冷丙酮（-20℃）至 200 ul 樣品溶液，混勻。2. -20℃： 放置 10 min。3. 小型臺式離
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗——三氯醋酸沉淀法
實驗材料含蛋白質的樣品試劑、試劑盒100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）實驗步驟1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30 min （或在冷凍
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌，以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物，蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說，純化的蛋
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌，以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物，蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說，純化的蛋白質
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
免疫沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定
有機溶劑沉淀法濃縮蛋白質實驗
有機溶劑沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將有機溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白質溶液時，和高濃度鹽類似產生沉淀，這是因為它們能夠降低蛋白質的溶解度。在溫度為 10 ℃ 左
有機溶劑沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 將有機溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白質溶液時，和高濃度鹽類似產生沉淀，這是因為它們能夠降低蛋白質的溶解度。在溫度為 10 ℃ 左右時蛋白質在有機溶劑中容易變性，所以在沉淀時必須特別注意冷卻溶液和離心轉頭（0 ℃～4 ℃ 為佳），建議離子強度為 0.05～0.2 mol/L。有機溶劑
聚乙二醇沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 聚乙二醇（PEG）是一個非離子水溶性多聚體，使用 PEG 沉淀蛋甶質時，只在個別濃度下才使蛋白質稍有變性。由于 PEG 溶解時散熱低，形成沉淀的子衡時間短等特點，使它在蛋白質的組分分離以及結晶中成為一個有用的試劑。通常 PEG 終濃度達 30％ 時，蛋白質就能夠達到最大量沉淀。
硫酸銨沉淀法濃縮蛋白質實驗
硫酸銨沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 當高濃度鹽存在時，蛋白質往往凝聚并析出沉淀。這一技術稱為「鹽析」。不同的蛋白質在不同濃度的鹽中形成沉淀，所以鹽析常用于蛋白質的分離
聚乙二醇沉淀法濃縮蛋白質實驗
聚乙二醇法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 聚乙二醇（PEG）是一個非離子水溶性多聚體，使用 PEG 沉淀蛋甶質時，只在個別濃度下才使蛋白質稍有變性。由于 PEG 溶解時散
聚乙二醇沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理聚乙二醇（PEG）是一個非離子水溶性多聚體，使用 PEG 沉淀蛋甶質時，只在個別濃度下才使蛋白質稍有變性。由于 PEG 溶解時散熱低，形成沉淀的子衡時間短等特點，使它在蛋白質的組分分離以及結晶中成為一個有用的試劑。通常 PEG 終濃度達 30％ 時，蛋白質就能夠達到最大量沉淀。實驗材料蛋
硫酸銨沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 當高濃度鹽存在時，蛋白質往往凝聚并析出沉淀。這一技術稱為「鹽析」。不同的蛋白質在不同濃度的鹽中形成沉淀，所以鹽析常用于蛋白質的分離純化。幾種因素如 pH 、溫度、蛋白質純度在測定各種蛋白質的鹽析時起著重要作用。選擇硫酸銨是因為它具有一些優良性質，如鹽析的有效性、pH 范圍廣、溶解度高、
有機溶劑沉淀法濃縮蛋白質實驗——有機溶劑沉淀法
實驗方法原理將有機溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白質溶液時，和高濃度鹽類似產生沉淀，這是因為它們能夠降低蛋白質的溶解度。在溫度為 10 ℃ 左右時蛋白質在有機溶劑中容易變性，所以在沉淀時必須特別注意冷卻溶液和離心轉頭（0 ℃～4 ℃ 為佳），建議離子強度為 0.05～0.2 mol/L。有機溶劑的濃度按體
硫酸銨沉淀法濃縮蛋白質實驗——硫酸銨沉淀法
實驗方法原理當高濃度鹽存在時，蛋白質往往凝聚并析出沉淀。這一技術稱為「鹽析」。不同的蛋白質在不同濃度的鹽中形成沉淀，所以鹽析常用于蛋白質的分離純化。幾種因素如 pH 、溫度、蛋白質純度在測定各種蛋白質的鹽析時起著重要作用。選擇硫酸銨是因為它具有一些優良性質，如鹽析的有效性、pH 范圍廣、溶解度高、溶
批量層析法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 批量層析的特點在于層析用樹脂不放在柱中，而是放在燒杯或瓶子的容器中；通過攪拌或搖動而混內層析；以過濾或離心的辦法分出層析液。實驗材料 蛋白質溶液儀器、耗材 離子交換層析裝置實驗步驟 1. 在燒杯或錐形瓶中平衡樹脂，不斷攪拌以促進平衡；2. 傾瀉掉大部分溶液，保留的溶液置要使樹脂能輕松的
批量層析法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理批量層析的特點在于層析用樹脂不放在柱中，而是放在燒杯或瓶子的容器中；通過攪拌或搖動而混內層析；以過濾或離心的辦法分出層析液。實驗材料蛋白質溶液儀器、耗材離子交換層析裝置實驗步驟1. 在燒杯或錐形瓶中平衡樹脂，不斷攪拌以促進平衡；2. 傾瀉掉大部分溶液，保留的溶液置要使樹脂能輕松的攪拌；3
超濾法濃縮蛋白質溶液實驗
實驗方法原理超濾濃縮蛋白質是通過外力使蛋白質溶液通過濾膜而仍保留目的蛋白質的方法。實驗室超濾主要是針對小體積蛋白質溶液（幾毫升），用離心力的方法使溶液很容易通過濾膜。我們以 Amicon 系作為超濾的實例進行描述。這個方法不易引起蛋白質變性。微型濃縮器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg/ml
批量層析法濃縮蛋白質實驗
批量層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 批量層析的特點在于層析用樹脂不放在柱中，而是放在燒杯或瓶子的容器中；通過攪拌或搖動而混內層析；以過濾或離心的辦法分出層析液。
超濾法濃縮蛋白質溶液實驗
超濾法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 超濾濃縮蛋白質是通過外力使蛋白質溶液通過濾膜而仍保留目的蛋白質的方法。實驗室超濾主要是針對小體積蛋白質溶液（幾毫升），用離心力的方法使溶
超濾法濃縮蛋白質溶液實驗
實驗方法原理 超濾濃縮蛋白質是通過外力使蛋白質溶液通過濾膜而仍保留目的蛋白質的方法。實驗室超濾主要是針對小體積蛋白質溶液（幾毫升），用離心力的方法使溶液很容易通過濾膜。我們以 Amicon 系作為超濾的實例進行描述。這個方法不易引起蛋白質變性。微型濃縮器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 一、層析 在過去的 2 0 年中，蛋白質組學技術的日益
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗
預計在新奇的一級分子和生物仿制藥實體方面將會有突出的增長。一些進步的是改良的分析、開發和相互作用。現在已有許多用于去除關的方法，包括凍干、反向萃取、溶質析出，precipitation、透析(溶劑交換） 、超濾和層析技術。值得注意的是，在眾多微和設備發展的支持下，小型化和高通量的蛋白質分析取得了極大
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗—依賴環核苷酸
試劑、試劑盒激酶分析緩沖液組蛋白 2B 儲存液環核苷酸依賴的蛋白質激酶分析緩沖液環核苷酸儲存液實驗步驟1. 在置于冰上的離心管內配制含下列成分的 20 μl 反應混合物：5X 激酶分析緩沖液 4 μl，10 mg/ml 組蛋白 2B 儲存液 1 μl，[γ-32P] ATP（終濃度為 5 μCi/5
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（一）
一、層析在過去的 2 0 年中，蛋白質組學技術的日益廣泛應用，使蛋白質濃縮和脫鹽的層析技術得到不斷革新。蛋白質組學通常需要從少量復雜的混合物中富集蛋白質，包括選擇性地濃縮特定種類的蛋白質。由于質譜 (M S ) 和基于抗體檢測技術的高靈敏度及可提供詳細生化特征的性質，它們在臨床診斷、
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（二）
5 生 產 規 模 的 層 析類似于分析用的小規模提取，制備規模和生產規模的蛋白質回收往往包括濃縮和脫鹽 。柱層析仍然是蛋白質純化的核心技術，這歸因于其可實現的高選擇性，同時具有方便耐用的填充樹脂床，原料在樹脂中通過流動而進行傳送。商業化生產酶和生物藥品通常需要加工數千升的初始原料。為了盡量
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（四）
1.超濾膜一 般 情 況 下 ，大 多 數 超 濾 膜 包 含 一 個 堅 固 的 支 撐 結 構 (如 T y v e k ? ) ，并 在 這 一 基 礎 上附加了一個非常薄的聚合物層。實際上正是這一薄層提供了選擇性通透膜所需的性質，并決定了流阻。用于超濾的膜的生產技術在過去幾十年里都沒
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（三）
三、透析透析是基于分子質量大小的液相分離技術，它由透過半透膜的選擇性擴散來實現。這種技術被認為是從大分子蛋白質中去除小分子溶質的最流行方法。特別是，這種非變性的脫鹽技術允許在良性或生理條件下更換緩沖液，其影響目標蛋白質性質的風險可降到最低限度。過去的十年里，透析的原理并沒有改變，但用于透析的技術和工
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗（五）
五、冷 凍 干 燥溶液中溶質的濃縮可以從熱力學上通過驅使溶劑變成氣態進人頂部空間 (蒸發) 或煮沸而實現。不幸的是，不穩定的溶質(如蛋白質分子)可以被用于除去溶劑所需的熱量快速降解。由于溶液的沸點是溶液的蒸氣壓等于大氣壓 (頂部空氣壓力） 時的溫度，因此，通過增加溶液的溫度或通過降低大氣壓力