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實驗方法原理 實驗材料 待標記的培養細胞試劑、試劑盒 37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材 樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性吸管 橡皮細胞刮子Sorvall 冷凍離心機(或其他)樹脂玻璃薄板／4℃ 樹脂玻璃管架實驗步驟 實驗試劑儀器的具體要求見「其他」。1. 培養待標記的細胞至適當的生長期。生長旺盛的細胞中磷酸鹽轉運達到最高峰，除非研究靜止期細胞的蛋白質磷酸化，一般待標記的細胞生長密度不要達到匯片，標記前 3～18 h 換新鮮的培養液培養將有利于標記。2. 吸去培養液，用 37℃ 的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽的培養液，吸盡該培養液。3. 加入預熱的標記培養液，加入量為：（0.5～1 ml）/35 mm 培養皿，（1～2 ml）/50 m......閱讀全文
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 實驗材料 培養細胞
一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA 四、血小板
實驗方法原理 檢測出目標蛋白是磷蛋白后，可將這個蛋白質的磷酸化過程在無細胞系統或天然細胞系統中進行研究。大多數蛋白激酶除了在細胞內還可在胞外進行許多底物的磷酸化。天然細胞的滲透化處理為得到滿意結果提供了一個有效的實驗方法，通過使用一些不同的試劑可以使細胞處于短暫的滲透狀態。這個過程使反應發生在細胞內
流式細胞儀實驗方法 一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．C
基本方案 溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞）基本方案 溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞）SDS煮沸法裂解細胞實驗方法原理實驗材料待標記的培養細胞
基本方案 帶分析 備擇方案1 制備用于SDS-PAGE的天然細胞樣品 備擇方案2 制備用于等電聚焦的天然細胞樣品
本實驗討論用三磷酸核苷在可滲透細胞和分離的細胞組分體外標記蛋白的策略。這類實驗在大多數情況下還是以 [γ-32P] ATP 作為外源性磷酸供體。盡管在特殊情況下[γ-32P] GTP 也能被用于蛋白質標記。實驗方法原理檢測出目標蛋白是磷蛋白后，可將這個蛋白質的磷酸化過程在無細胞系統或天然細胞系統中進
基本方案 溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞） 基本方案 溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞） SDS煮沸法裂解細胞 &nb
組成型表達FLAG標記 條件性表達FLAG標記 變化起始材料和洗脫條件 用P11離子交換層析柱
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 實驗材料 培養細胞
實驗方法原理 首先通過逆轉錄病毒介導的轉基因（用于組成型表達）或四環素調控的系統（用于可誘導表達）建立表達抗原決定簇標記的蛋白復合體亞基的穩定細胞系。然后用抗原決定簇特異的單克隆抗體偶聯的小珠進行免疫親和純化，以沉降抗原決定簇標記的多亞基蛋白復合體。最后在中性 pH 或生理條件下洗脫回收，即可用
本實驗介紹了用 32P 標記和裂解培養細胞，以用于蛋白質免疫沉淀分析。這種方法適用以 32P 標記任何細胞成分，可用于各種貼壁或不貼壁培養的昆蟲、鳥類和哺乳類細胞。實驗材料待標記的培養細胞試劑、試劑盒37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris
實驗材料培養細胞試劑、試劑盒DMEMHClTBSTris儀器、耗材微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟1. 培養待標記的細胞至適當的生長期。 對于貼壁細胞： 2a. 吸去培養液，用37℃的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸
實驗材料待標記的培養細胞試劑、試劑盒37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性吸管橡皮細胞刮子So
實驗方法原理首先通過逆轉錄病毒介導的轉基因（用于組成型表達）或四環素調控的系統（用于可誘導表達）建立表達抗原決定簇標記的蛋白復合體亞基的穩定細胞系。然后用抗原決定簇特異的單克隆抗體偶聯的小珠進行免疫親和純化，以沉降抗原決定簇標記的多亞基蛋白復合體。最后在中性 pH 或生理條件下洗脫回收，即可用于功能
實驗材料 新鮮組織、培養的細胞、來自細胞或組織的蛋白成分試劑、試劑盒 細胞勻漿緩沖液細胞重懸緩沖液細胞淋洗緩沖液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚：氯仿磷酸鹽緩沖液聚乙烯醇終止液組織勻漿液組織重懸緩沖液臺盼藍染料DNA 酶 I
實驗方法原理 離心機和轉頭，沸騰的水浴鍋， Dounce 勻漿器，晶型塑料或超明亮型吊桶式離心管，聚丙烯管，刀片，預設到 30°C 的振蕩水浴，預設到 4°C 和 65°C 的水浴實驗材料 非重組質粒載體含感興趣 cDNA 或基因的重組質粒培養細胞或新鮮組織試劑、試劑盒 氯仿DNA變性溶液乙醇甘油貯
實驗材料 培養細胞試劑、試劑盒 DMEMHClTBSTris儀器、耗材 微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟 1. 培養待標記的細胞至適當的生長期。 對于貼壁細胞： 2a. 吸去培養液，用37℃的含血清
實驗方法原理 實驗材料 保存于細菌中的克隆純的、已測序確證的人 EST 序列
(12) RNA 洗脫緩沖液：20 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.6)，0.5 mol/L NaCl，10 mmol/L EDTA，2% ( V/V ) 苯酚（Tris EDTA 或 NaAc-EDTA 平衡），4°C 保存。(13) 7.5 moI/L 乙酸銨（NH4Ac）：用 0
實驗概要本實驗介紹了細菌的局限性轉導實驗的原理、材料和實驗步驟。實驗原理轉導是由噬菌體為媒介將一個細胞的遺傳物質轉移給另一個細胞的過程。隨著分子遺傳學的發展，轉導已成為基因精細結構分析的常用方法。轉導可分為局限性轉導和普遍性轉導二大類。本實驗試圖用局限性轉導為例，用噬菌體（λ）專一性轉導半乳糖發酵基
相互作用克隆 實驗方法原理 它需要一種編碼誘餌蛋白的基因和用噬菌體表達載體，如 λgt 11 構建
實驗材料 對數生長期的 HcLa 細胞與所使用啟動子相對的 RNA 聚合酶酵母 tRNA經超盧斷裂鮭精 DNAS1 核酸酶 KlenowDNA 聚合酶儀器、耗材 MWCO3500(1 ml cm) 透析袋Dounce 勻漿器 Gorrex 離心管15 mlFalcon 或 Corning 離心管Ec
代謝標記 X射線片放射自顯影檢測32P標記的蛋白質 實驗材料 細胞
實驗方法原理 它需要一種編碼誘餌蛋白的基因和用噬菌體表達載體，如 λgt 11 構建的適當的表達文庫。編碼誘餌蛋白的基因常用于在中合成重組融合蛋白。重組融合蛋白使用具放射性的 [32P] 作標記。由于 cAMP 依賴蛋白質激酶（蛋白質激酶 A，PKA）的識別位點被引入重組融合蛋白質，從而可通
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
實驗方法原理 流程圖 實驗材料 溶液和緩沖液 原位雜交
實驗方法原理實驗材料永生化淋巴細胞株試劑、試劑盒青霉素谷氨酰胺胎牛血清植物血球凝集素胸苷秋水仙胺KCl甲醇冰乙酸檸檬酸鈉SSC甘油生物素-16-dUTP地高辛-11- dUTP10 XdNTP 混合物儀器、耗材超凈臺細胞培養瓶Nunc 管培養基相差顯微鏡染色缸加熱板裝有Pinkel濾光片輪的CCD顯
DNA 酶 I 足跡法對 DNA 上的蛋白質結合位點作圖實驗 實驗材料 新鮮組
實驗方法原理 離心機和轉頭，沸騰的水浴鍋， Dounce 勻漿器，晶型塑料或超明亮型吊桶式離心管，聚丙烯管，刀片，預設到 30°C 的振蕩水浴，預設到 4°C 和 65°C 的水浴