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實驗材料 感受態細胞試劑、試劑盒 質粒DNA抗生素儀器、耗材 Ep管水浴鍋LB平板實驗步驟 1、取新制備的一管感受態細胞。 2、取0．03 ml感受態細胞轉和4 ng質粒DNA混勻，置冰浴30min 3、將 Ep管置于42 ℃水浴中熱沖擊2分鐘，立即置于冰上1分鐘。 4、在 Ep管中加70 ul LB培養基混勻，37 ℃培養30min 5、涂在含適當濃度抗生素的LB平板上。 6、37 ℃培養過夜，長出的菌斑既為陽性克隆。......閱讀全文
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
實驗概要本實驗包括大腸桿菌質粒DNA的提取，質粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定，大腸稈菌感受態細胞的制備及質粒DNA高頻轉化大腸桿菌。實驗步驟1. 大腸桿菌質粒DNA的提取堿裂解法：此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：
實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態
實驗材料 帶 mutS 表型（例如BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態試劑、試劑盒 退火緩沖液貯存液合成緩沖液噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4DNA 聚合酶或測序酶單一位點的限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變引物選擇引物質粒 DNA儀器、耗材 70°C
本方法中，兩條寡核苷酸引物雜交到變性重組質粒 DNA 雙鏈的同一條鏈上。一條引物（誘變引物）攜帶一個擬引進靶 DNA 序列的突變，第二條引物攜帶一個能破壞質粒單一限制酶位點的突變。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶 mutS 表型（
本方案和方案 4 是以變性質粒 DNA 為模板，使用兩條寡核苷酸和高保真聚合酶引導 DNA 合成。本方案中，經多輪熱循環全長雙鏈質粒 DNA 將以線性形式擴增，產生一種 DNA 雙鏈上帶交錯缺口的突變質粒（Hemsleyetal.1989)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
實驗材料 帶 hsdR17 基因型的感受態大腸桿菌菌株 試劑、試劑盒 AT
實驗方法原理 大腸桿菌中異源性的 RNA-BP 與靶 RNA 的結合會抑制靶基因的翻譯。此方法已成功地應用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在內的多種 RNA-BP 的研究中。實驗材料 質粒菌株試劑、試劑盒 X-Gal 儲液IPTG 儲存液lacZ 緩沖液ONPG 溶液碳酸鈉
實驗方法原理 大腸桿菌中異源性的 RNA-BP 與靶 RNA 的結合會抑制靶基因的翻譯。此方法已成功地應用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在內的多種 RNA
實驗材料 帶 hsdR17 基因型的感受態大腸桿菌菌株試劑、試劑盒 ATP含有四種 dNTF 的混合溶液誘變緩沖液NaOHNaACTE噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4 多核苷酸激酶DpnI 限制性內切酶熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠寡核苷酸引物質粒 DNA儀器、耗材 帶障蔽的自動微量移液器用
實驗方法原理大腸桿菌中異源性的 RNA-BP 與靶 RNA 的結合會抑制靶基因的翻譯。此方法已成功地應用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在內的多種 RNA-BP 的研究中。實驗材料質粒菌株試劑、試劑盒X-Gal 儲液IPTG 儲存液lacZ 緩沖液ONPG 溶液碳酸鈉溶液β
病毒感染細胞實驗 實驗方法原理 病毒包裝的原理質粒DNA為能轉錄出慢病毒遺傳物質（RNA），但不能
實驗材料 宿主細胞 質粒或λ噬菌體表達載體 包裝提取物 電轉化感受態大腸桿菌
現在較常用的質粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質粒（＞15Kb）。 堿裂解法是一種廣泛使用的制備質粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質粒DNA，染色體DNA為線狀
病毒感染細胞實驗可以用于：（1）將目的基因整合到大多數真核細胞。（2）將目的基因包裝成病毒來感染細胞，從而得到表達滿足實驗需求。實驗方法原理病毒包裝的原理質粒DNA為能轉錄出慢病毒遺傳物質（RNA），但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質粒，其同時連有目的基因和報告基因，psPAX2為能表達慢病
實驗材料 宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體包裝提取物電轉化感受態大腸桿菌試劑、試劑盒 限制性內切核酸酶緩沖液限制性內切核酸酶通過 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文庫含適當抗生素的 Terrific 球脂平板含適當抗生素的 Terrific 肉湯培養基儀器、耗材 cDNA 合成試劑盒實驗步驟
實驗材料 載體和酵母菌 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 SD
質粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或者表達的重要媒介，這種基因運載工具在基因工程中具有極廣泛的應用價值，質粒提取是分子生物學最常見的實驗之一。目前質粒提取實驗大多借助試劑盒來完成，那么關于質粒提取的原理，您的了解足夠深入嗎？ 目前，質粒提取試劑盒最常用的方法是堿裂解法。堿裂解法原理：根據共價閉合環狀D
類似方案 1、方案 2 描述了在真核表達載體上進行 cDNA 文庫構建與篩選的方法, 流程分為以下兩個階段：1. 在真核表達載體上構建 cDNA 文庫；2. 在真核表達載體上構建的 cDNA 文庫的篩選。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。實驗材料宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體
一、目的1.了解感受態細胞生理特性及制備條件，掌握大腸桿菌感受態細胞制備方法。2.掌握質粒DNA 轉化大腸桿菌的方法，了解轉化的條件和利用半乳糖苷酶基因插入失活選擇重組質粒DNA 的原理。二、原理（一）大腸桿菌感受態細胞制備的原理所謂感受態，是指細菌生長過程中的某一階段的培養物，只有某一生長階段中的
質粒是存在于細菌染色體外的一個或多個能獨立復制并穩定遺傳的小型環狀雙鏈DNA分子，其分子量一般在0.2-10KD范圍內。由于質粒分子小，便于分離和提取，可以攜帶目的基因進入細菌、動物細胞或植物體內進行擴增與表達。 質粒提取方法即去除 RNA，將質粒與細菌基因組 DNA分開，去除蛋白質及其它雜質
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
摘要： 下文介紹大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化. 1、感受態細胞的概念重組 DNA 分子體外構建完成后,必須導入特定的宿主(受體)細胞,使之無性繁殖并高效表達外源基因或直接改變其遺傳性狀,這個導入過程及操作統稱為重組DNA分子的轉化.
酵母雙雜交系統的實驗步驟 1. 將報告基因p8op-LacZ轉化酵母EGY48菌株，用培養基SD/-Ura篩選。2. 同時構建DNA文庫，并純化足夠的質粒以轉化酵母細胞。3. 構建DNA-BD/靶蛋白質粒pLexA-X，作為釣餌（bait）。4. 將
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
離心機和轉子Sorvall RT6000 離心機，H1000B MPC 和 H6000A MPC 轉子（離心微量滴定板用）專用設備玻璃珠（直徑 0.45 mm, 無菌；Sigma)微量滴定板（24 孔或 96 孔 [可選])重復用移液管可選，請參見步驟 1。附加試劑此方案的步驟 2 需要第 1 章方
實驗材料 酵母菌實驗步驟 1. 用含LEU 2作為選擇標志的酵母菌DNA文庫轉化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培養，依據插入片段的大小，篩選2 000~20 000個Leu+轉化體。 2. 影印平板轉化體，將其轉印到預熱的選擇性平板，
實驗材料酵母菌實驗步驟1. 用含LEU 2作為選擇標志的酵母菌DNA文庫轉化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培養，依據插入片段的大小，篩選2 000~20 000個Leu+轉化體。 2. 影印平板轉化體，將其轉印到預熱的選擇性平板，并于37℃培養篩選
耐藥質粒 DNA轉化實驗 本實驗學習將質粒DNA分子轉入大腸桿菌的方法及如何篩選帶有質粒DNA的細胞克隆，即轉化子。 【原理】 受體菌Ecoli RRI 在低溫條件下經Ca++ 處理，可改變細胞膜的通透性，利于受體菌對DNA的攝取，這種經Ca++ 處理的細菌稱感受態菌。pBR322 質粒