一、經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。含有乙二醛-DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳,因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H+梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率(Miller,1987),但用含有乙二醛-DMSO的凝膠對RNA進行分級離,通常Northern雜交所顯示的RNA條帶更為銳利。1、在滅菌的微理離心管內,混勻下列液體:6mol/L乙二醛 5.4ulDMSO 16.0ul0.1mol/L磷酸(pH7.0) 3.0ulRNA(多達10ul)5.4ul市售乙二醛通常為40%溶液(6mol/L)。由于接觸空氣的后乙二醛易于氧化,所以使用前需通過混合床樹脂(Bio-Rad AG 501-X8 對乙三醛溶液進行去離子處理,直至溶液pH值大于5.0為止,然后可分裝在小份,用蓋緊的小管貯存于-20℃。每......閱讀全文
Northern blot 是一種通過檢測RNA的表達水平來檢測基因表達的方法,通過northernblot的方法可以檢測到細胞在生長發育特定階段或者脅迫或病理環境下特定基因表達情況。Northern blot 首先通過電泳的方法將不同的RNA分子依據其分子量大小加以區分,然后通過與特定基因
實驗方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物(RNP,核糖核蛋白顆粒)的方法,無論是對于粗提物還是提純后的樣品,對分析 RNP 的結構域的結構都非
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。 蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾
動物總RNA的提取與電泳 I. 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II. 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物
動物總RNA的提取與電泳I.實驗目的與要求A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。II. 實驗原理和背景知識A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物大分子,如mRNA,它攜帶了DNA的全部編碼信息。
實驗方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物(RNP,核糖核蛋白顆粒)的方法,無論是對于粗提物還是提純后的樣品,對分析 RNP 的結構域的結構都非常有效。實驗材料 蛋白酶 KAMV 反轉錄酶試劑、試劑盒 緩沖液DNase ⅠDNase Ⅰ 緩沖液酚氯仿溶液乙酸鈉R
寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物(RNP,核糖核蛋白顆粒)的方法,無論是對于粗提物還是提純后的樣品,對分析 RNP 的結構域的結構都非常有效。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法原理寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
RNA一度被認為僅僅是DNA和蛋白質之間的“過渡”,但越來越多的證據清楚的表明,RNA在生命的進程中扮演的角色遠比我們早前設想的更為重要。RNA 干擾(RNA interference)的發現使得人們對RNA調控基因表達的功能有了全新的認識,更因為可以簡化/替代基因敲除而成為研究基因功能的有力工具,
總RNA提取可以:(1)獲得高純度、高質量的總RNA;(2)可以滿足生物學下游實驗Northern Blot、核酸酶保護實驗、RT-PCR、qRT-PCR 和陣列分析所需。實驗方法原理一些公司推出的總RNA 提取試劑盒,可以用來制備高質量的可用于建庫的RNA 。該總RNA 純化系統采用兩種著名的RN
分析測試百科網訊 2020年11月16日,慕尼黑上海分析生化展(analytica China)于上海拉開帷幕。上海易孛特光電技術有限公司開展首日便獲得不少關注,主要得益于公司在展會上正式推出的全球首款接觸式無損定量WESTERN BLOT成像設備。此款設備一經面世就斬獲德國紅點設計大獎,并在2
Northern blot技術 Northern Blot 實驗方法原理 將RNA樣品通
Northern blot 可用于:(1)檢測不同組織、器官;(2)生物體不同發育階段以及脅迫環境或病理條件下特定基因的表達樣式。如northern blot被大量用于檢測癌細胞中原癌基因表達量的升高及抑癌基因表達量的下降,器官移植過程中由于免疫排斥反應造成某些基因表達量的上升,Northern b
實驗方法原理 Northern blot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離,再轉移至尼龍膜等固相膜載體上,用放射性或非放射性標記DNA或RNA特異性探針對固定于固相膜上的mRNA進行雜交,洗膜去除非特異性結合雜交信號,經放射自顯影或現色反應,對雜交信號進行分析。將雜交的m
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被
生物芯片概論 DNA分子在大多數生物體中是以雙股的型態存在(少數病毒、噬菌體除外)。在某些特殊生理狀態下,例如:細胞分裂、基因表現等,雙股DNA會解開變成單股,然后再回復成雙股。而生物學家很早就把這單股DNA利用氫鍵結合成雙股DNA分子的特性應用在生物相關的研究,稱之為雜合反應(Hybridizat
Northern Blot Northern Blot 試劑、試劑盒
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。 與Southern Blo
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展,新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上,一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展,新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上,一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
非編碼RNA是近年來轉錄組學研究的熱點,其中,long non-coding RNA(lncRNA),microRNA,circularRNA是大家研究的非常多的非編碼。其實,在small non-coding RNAs世界,除了我們熟知的microRNA之外,還包括piwi-interacti
接下來,Northern blot實驗也驗證了其中上調的tRNAVal(CAC)和tRNAGly(GCC)來源片段。此外,qPCR分析也表明,這些small RNAs在缺血后24hr,48hr和72hr時都顯著提高。為了進一步探究脅迫誘導的
一、顯微切割技術出現的背景 在分子病理學研究中,常常遇到兩個比較棘手的問題: 一是選取的研究材料需要在某一方面具有相同的特征,即具有一定程度的同質性。我們人體的各種組織絕大多數是由多種不同細胞組成的異質性的細胞群,這種選取同質性的研究材料問題在對人體組織的深入研究中常常遇到卻又不易解