純合克隆篩選
1．融化雜合突變ES細胞 ，ES/LIF培養液培養，每2～3天傳代，實驗開始把細胞 接種到三個100mm鋪有凝膠碟皿中，每皿接種1～2×106 細胞 。為篩選需用一個以上的ES雜合突變細胞系，因不同細胞系的轉化效率不全相同，另外對檢測細胞表型也需如此。 2．每皿細胞分別加入1.0～2.0mg/ml的G418（終濃度，pH7.4）；應用neo和hyg基因作為篩選標記效果都很好，用hyg時濃度為1.0～2.0mg/ml的hygromycin-β的ES/LIF培養液。 3．培養細胞7～10天，每天換液，仍用含有適當濃度G418的ES/LIF培養液，培養至出現很多單個克隆為止；如細胞已長滿而未出現單個克隆 時，應重復2，并加大G418濃度。 4．按前述雜合突變所述15～21步篩選法進行克隆篩選；在出現有雜交片段表示在純合突變細胞中不存在無改變的靶基因。典型情況下，應有50％為純合的，這是因為此過程是隨機的，......閱讀全文
純合克隆篩選
純合克隆篩選 1．融化雜合突變ES細胞，ES/LIF培養液培養，每2～3天傳代，實驗開始把細胞接種到三個100mm鋪有凝膠碟皿中，每皿接種1～2×106細胞。為篩選需用一個以上的ES雜合突變細胞系，因不同細胞系的轉化效率不全相同，另外對檢測細胞表型也需如此。 2．每皿細胞分別加入1.0～2.0
純合克隆篩選
1．融化雜合突變ES細胞 ，ES/LIF培養液培養，每2～3天傳代，實驗開始把細胞 接種到三個100mm鋪有凝膠碟皿中，每皿接種1～2×106 細胞 。為篩選需用一個以上的ES雜合突變細胞系，因不同細胞系的轉化效率不全相同，另外對檢測細胞表型也需如此。 2．每皿細胞分別加入1.0～2.0m
使用QPix400系統自動篩選顏色克隆——藍白克隆篩選
在分子克隆過程中，篩選含有插入基因片段的重組質粒轉化子是一項必不可少的工作。一種稱為“藍白斑篩選”的顏色報告基因可以根據克隆顏色快速區分出重組和非重組的克隆。盡管藍白篩選提供了一個直觀的辨別重組克隆的方法，但是，在克隆挑取過程中，過多的人工操作過程存在主觀、速度慢、易出錯等問題。 Molecular
陽性克隆篩選方法匯總
——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法近幾年來，基因重組的技術層出不窮，包括TALEN和CRISPR/Cas9在內的重組技術給基礎研究提供更為方便和快捷的分子生物學工具。關于這些技術的具體原理和操作細節，這里不做展開介紹，主要談一談在用這些技術進行細胞株構建的過程中，如何做才
陽性克隆篩選方法匯總
陽性克隆篩選方法匯總 ——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法 近幾年來，基因重組的技術層出不窮，包括TALEN和CRISPR/Cas9在內的重組技術給基礎研究提供更為方便和快捷的分子生物學工具。 關于這些技術的具體原理和操作細節，這里不做展開介紹，主要
單克隆篩選的原理
細胞單克隆篩選細胞單克隆篩選是根據細胞所具有的特性將單個細胞從混合的細胞樣品中分離出來的一種技術,是抗體制備細胞株優化、穩轉細胞株構建、藥物靶點篩選等應用中重要的一環,優質的單克隆細胞能夠更好地為不同領域科學研究和藥物研發提供支持。通俗的講:就是將混合細胞通過3D打印技術（更精準高效）/直接用96孔
染色體的純合性
中文名稱純合性英文名稱homozygosity定 義同源染色體的相對位置上具有相同基因的狀態。應用學科遺傳學（一級學科），細胞遺傳學（二級學科）
轉化克隆的篩選和鑒定——快速PCR篩選法
實驗材料重組大腸桿菌試劑、試劑盒LB培養基氨芐青霉素乙醇質粒提取試劑盒引物Taq酶PCR緩沖液甘油硫酸鎂dNTP蒸餾水瓊脂糖儀器、耗材試管記號筆酒精燈冰箱牙簽旋渦混合器微量移液取樣器移液器吸頭離心管雙面微量離心管架制冰機恒溫搖床超凈工作臺搖菌管PCR儀培養皿凝膠電泳儀
轉化克隆的篩選和鑒定
1．目的學會用酶切法或PCR法篩選重組質粒轉化成功的克隆菌。?2．原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片斷的克隆菌落。?3．器材旋渦混合器，小鑷子，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml 微量離心管，雙面微量離心管架，干式恒溫
轉化克隆的篩選和鑒定
1．目的學會用酶切法或PCR法篩選重組質粒轉化成功的克隆菌。2．原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。3．器材旋渦混合器，小鑷子，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml 微量離心管，雙面微量離心管架，干式恒溫氣浴
轉化克隆的篩選和鑒定
實驗概要本實驗介紹了轉化克隆的篩選和鑒定方法，有助于學會用酶切法或PCR法篩選重組質粒轉化成功的克隆菌。實驗原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。主要試劑1. LB培養基(加抗菌素)2. PCR用試劑3. 引物4
克隆的篩選和快速鑒定
實驗概要掌握快速細胞破碎法測定大小不等的眾多的質粒DNA；和菌落PCR快速鑒定克隆。實驗原理在這個實驗方法中，只需配制一種細胞緩沖液（它可以在室溫下保存，長期使用）。利用破碎細胞緩沖液中的陰離子去污劑---SDS在37℃溶解膜蛋白，使細胞破裂，并解聚核蛋白，SDS還能與蛋白質結合形成復合物，使得蛋白
重組克隆篩選（酶切鑒定）
【實驗目的】1.掌握質粒提取的基本方法的原理；2.學習和掌握限制性內切酶的使用方法。【實驗原理】重組克隆的篩選和鑒定是基因工程中的重要環節之一。不同的克隆載體和相應的宿主系統，其重組克隆的篩選和鑒定方法不盡相同。從理論上說，重組克隆的篩選是排除自身環化的載體、未酶解完全的載體以及非目的DNA片斷插入
純合分型細胞技術的定義
中文名稱純合分型細胞技術英文名稱homozygous typing cell technique;HTC technique定 義一種HLA細胞學分型技術。即用已知HLA-Dw型別的(滅活)純合子細胞(刺激細胞)和受檢者細胞(反應細胞)進行單向混合淋巴細胞培養，若不發生或僅發生弱的增殖反應，表明受
純合分型細胞技術的概念
中文名稱純合分型細胞技術英文名稱homozygous typing cell technique;HTC technique定 義一種HLA細胞學分型技術。即用已知HLA-Dw型別的(滅活)純合子細胞(刺激細胞)和受檢者細胞(反應細胞)進行單向混合淋巴細胞培養，若不發生或僅發生弱的增殖反應，表明受
如何篩選動物單克隆抗體
單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.第一次篩選的原理與方法：細胞融合后,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍采用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A
如何篩選動物單克隆抗體
單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.第一次篩選的原理與方法：細胞融合后,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍采用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A
轉化克隆的篩選和鑒定實驗
實驗原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。實驗試劑1. LB培養基(加抗菌素)2. PCR用試劑3. 引物4. 質粒提取用試劑5. 酶切需要的限制性內切酶及其緩沖液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/L Mg
單克隆篩選的幾種方法
單克隆篩選是新一代細胞克隆篩選和挑取技術，細胞克隆篩選系統能夠更少時間里，自動化篩選并挑取更高水平表達的細胞克隆，擁有5組熒光通道，可以同時使用3組，細胞克隆篩選系統避免有限稀釋，快速高效篩選挑取雜交瘤克隆，建立穩定細胞株，干細胞及特殊表面標記細胞挑取及昆蟲細胞篩選挑取。 單克隆篩選方法有有限
陽性重組克隆的構建和篩選
實驗概要構建并篩選含有目的基因的候選陽性重組克隆。有助于理解目的基因與克隆載體的連接、轉化和篩選原理及流程。實驗原理1. 連接反應：利用經過限制性內切酶消化的線形載體與目的基因兩端暴露出的平末端或相同的粘性末端，使用T4 DNA 聚合酶將二者連接起來形成重組載體。2. 轉化過程：感受態細胞通過溫度敏
純合分型細胞技術特點和應用
中文名稱純合分型細胞技術英文名稱homozygous typing cell technique;HTC technique定 義一種HLA細胞學分型技術。即用已知HLA-Dw型別的(滅活)純合子細胞(刺激細胞)和受檢者細胞(反應細胞)進行單向混合淋巴細胞培養，若不發生或僅發生弱的增殖反應，表明受
擬南芥突變體純合植株的獲得
實驗概要本實驗利用農桿菌轉化侵染野生型擬南芥獲得變體純合植株。實驗材料擬南芥(Arabidopsis thaliana, Col-0)，培養條件，長日照為16h光照/8h黑暗，22oC；短日照為8h光照/16h黑暗，22oC。實驗步驟1. 擬南芥基因組的小量提取??? 1) 取0.2 g擬南芥葉片，
小量細菌克隆的雜交法篩選實驗
實驗方法原理 主瓊脂板上和覆蓋于另一塊瓊脂板表面的硝酸纖維濾膜或尼龍膜上的細菌克隆可以被定位， 經過一段時間，已經在濾膜上生長的克隆可以被原位裂解以備雜交之用。同時，主瓊脂板可置于 4℃ 保存，直到篩選的結果出來為止。實驗材料 E.coli試劑、試劑盒 LB 或 SOB 瓊脂板儀器、耗材 硝酸纖維素
大量細菌克隆的雜交方法篩選實驗
這一方法由 Hanahan 和 Meselson (1980, 1983)報道，主要用來處理由質粒 cDNA 文庫轉化的細菌。將轉化菌的混合物或者一份擴增的 cDNA 文庫直接置于不含洗滌劑的硝酸纖維素膜或尼龍膜上，復制膜用膜-膜接觸的方法制備。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方
大量細菌克隆的雜交方法篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方法由 Hanahan 和 Meselson (1980, 1983)報道，主要用來處理由質粒 cDNA 文庫轉化的細菌。將轉化菌的混合物或者一份擴增的 cDNA 文庫直接置于不含洗滌劑的硝酸纖維素膜或尼龍膜上，復制
單克隆酶免疫色度分析篩選方法
單克隆酶免疫色度分析篩選方法 AOAC 方法：986.35，987.11，993.0均為單克隆酶免疫色度分析篩選方法。現以 AOAC 公定方法 AOAC993.08《SalmonelIa-Tek）》為例做一介紹。 該方法陽性的檢測結果應是客觀的，必須用配有450nm 濾光片的光度計來
重組片段的轉化及克隆和篩選
一、目的與原理轉化是指以質粒DNA或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。轉化技術在基因工程領域中占有極重要的地位。目前用得較多的轉化技術為將人工構建的重組質粒到如受體細胞，使重組質粒在受體細胞中穩定地復制和表達。二、材料和方法1.材料：大腸桿菌2.儀器：離心機，恒溫搖床，恒溫水浴，超凈工作臺，冰柜
小量細菌克隆的雜交法篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主瓊脂板上和覆蓋于另一塊瓊脂板表面的硝酸纖維濾膜或尼龍膜上的細菌克隆可以被定位， 經過一段時間，已經在濾膜上生長的克隆可以被原位裂解以備雜交之用。同時，主瓊脂板可置于 4℃ 保存，直到篩選的結果出來為止。
大量細菌克隆的雜交方法篩選實驗
實驗方法原理 這一方法由 Hanahan 和 Meselson (1980, 1983)報道，主要用來處理由質粒 cDNA 文庫轉化的細菌。將轉化菌的混合物或者一份擴增的 cDNA 文庫直接置于不含洗滌劑的硝酸纖維素膜或尼龍膜上，復制膜用膜-膜接觸的方法制備。采用這一方法，每塊 150
實驗九－轉化克隆的篩選和鑒定
1．目的學會用酶切法或PCR法篩選重組質粒轉化成功的克隆菌。2．原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。3．器材旋渦混合器，小鑷子，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml 微量離心管，雙面微量離心管架，干式恒溫氣浴