放射性同位素標記的DNA序列測定分析
測定DNA 的核苷酸序列是分析基因結構與功能關系的前提。從小片段重疊法到加減法、雙脫氧鏈終止法、化學降解法、自動測序,DNA 測序技術發展很快。目前在實驗室手工測序常用Sanger雙脫氧鏈終止法。Sanger法就是使用DNA 聚合酶和雙脫氧鏈終止物測定DNA 核苷酸序列的方法。它要求使用一種單鏈的DNA 模板或經變性的雙鏈DNA 模板和一種恰當的DNA 合成引物。其基本原理是DNA 聚合酶利用單鏈的DNA 模板,合成出準確互補鏈,在合成時,某種dNTP換成了ddNTP,這時,DNA 聚合酶利用2’,3’-雙脫氧核苷三磷酸作底物,使之摻入到寡核苷酸鏈的3’末端,導致3’末端無3'-OH,從而終止DNA 鏈的生長,雙脫氧核苷酸的種類不同,摻入的位置不同就造成了在不同的專一位置終止的長度不同的互補鏈。通過摻入放射性核苷酸和聚丙烯酰胺凝膠電泳,即可讀出模板DNA 的互補鏈序列。一、 試劑準備1. 硅化液:四氯化碳......閱讀全文
放射性氣溶膠的放射性氣溶膠
固體或液體放射性微粒懸浮在空氣或氣體介質中形成的分散體系。氣溶膠的基本特性是不穩定,小于0.1微米的微粒在氣體中作布朗運動,不因重力作用而沉降;1~10微米的微粒沉降緩慢,懸浮在空氣中較久。放射性氣溶膠的電離效應高、濃度低、微粒上易帶電(由放射性衰變產生)。放射性氣溶膠是造成人體內照射的主要威脅。
核酸基因分子探針
從化學和生物學的意義上理解,探針是一種已知特異性的分子,它帶有合適的標記物供反應后檢測。探針和靶的相互反應如抗原-抗體、血凝素-碳水化合物、親合素-生物素、受體和配體,以及核酸與其互補核酸間的雜交等反應均屬此類。用核酸探針與待檢標本中核酸雜交,形成雜交體,再用呈色反應顯示。此方法用于疾病的診斷,稱為
基因探針的標記方法
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
基因探針的標記方法介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
放射性碘標記
在RIA中,標記抗原質量的優劣,直接影響測定結果,必須制備比放射性強、純度高的標記抗原,并保持免疫活性不受喪失。 一、同位素的選擇 同位素有穩定性和放射性兩種。放射性同位素可利用其衰變時放出的放射線進行測量,這種測量較靈敏而方便,故多用放射性同位素。標記抗原,常用的放射性同位素有3H、14C、1
熒光原位雜交的方法介紹
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光原位雜交的技術特點
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光原位雜交的概念
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
關于熒光原位雜交的基本信息介紹
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
?-熒光原位雜交的原理和意義
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光原位雜交的原理
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光原位雜交技術簡介
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術,是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光光譜法fluorography
熒光光譜法?fluorography?在用凝膠電泳分離以放射性同位素標記的蛋白或核酸時,使閃爍劑滲在凝膠中,閃爍劑由放射性輻射所激發出光,通過?x光膠片進行檢查,此方法稱為熒光光譜法。此方法對檢查?3?H、?14?C、?35?S等β射線能量低,不易使?x光膠片感光劑直接感光的放射性同位素是有效的。也
Southern-Blotting實驗原理、操作步驟和注意事項1
對于大的基因組,DNA酶切圖譜憑肉眼是分辨不開的(EB染色),因為大小不等的分子呈現彌散分布,只有借助靈敏的放射性同位素(或其他化學發光物質),將靶DNA在凝膠上(膜上)的帶型通過特定的探針與之雜交,轉換成X光片上直觀的帶型,才能進行相關分析。另外如果需要鑒定或尋找與已知DNA同源的 DNA片段
化學發光標記法的目的和用途
為鑒定和檢測目的將標記物(如放射性同位素、熒光素或酶)共價連接到另一種化合物上,通過被標記化合物與待檢測物之間的特異性反應形成多元復合物,經與未結合的標記物分離后,即可用較簡易的方法鑒定和檢測待檢測物。放射性同位素標記技術廣泛用于研究帶標記的物質、在體內的代謝過程及其代謝產物。
放射免疫分析的介紹
放射免疫技術為一種將放射性同位素測量的高度靈敏性、精確性和抗原抗體反應的特異性相結合的體外測定超微量(10-9~10-15g)物質的新技術。廣義來說,凡是應用放射性同位素標記的抗原或抗體,通過免疫反應測定的技術,都可稱為放射免疫技術,經典的放射免疫技術是標記抗原與未標抗原競爭有限量的抗體,然后通
如何診斷放射性腸炎?
本病的診斷一般不困難。有放療史結合臨床表現和有關檢查,可以確定病變的性質和部位,即可明確診斷。放射性腸炎的晚期表現和癌腫的復發與轉移需做X線鋇劑檢查、腸系膜血管造影、內鏡檢查、活組織檢查以資鑒別。在鑒別診斷時應考慮其他疾病,如非特異性潰瘍性結腸炎、Crohn病、腸結核、腸道脂代謝障礙綜合征(Wh
如何預防放射性腸炎?
應避免進食纖維素多或對腸壁有刺激的食物,宜食用少渣、低脂及產氣少的食物。如胡蘿卜、菠菜等,既潤腸又補充維生素。還應注意保持肛門及會陰部清潔,穿寬松內褲。癥狀嚴重者,可暫停放療,并大劑量應用維生素、輸液補充各種靜脈營養及應用腎上腺皮質激素、抗生素,以減輕局部炎癥反應,促進恢復。
放射性肺炎的癥狀
癥狀詳細描述 輕者無癥狀,多于放射治療后2~3周出現癥狀,常有刺激性、干性咳嗽、伴氣急、心悸和胸痛,不發熱或低熱、偶有高熱。氣急隨肺纖維化加重呈進行性加劇、容易產生呼吸道感染而加重呼吸道癥狀。并發放射性食管炎時出現吞咽困難。若放射損傷肋骨,產生肋骨骨折,局部有明顯壓痛。體檢見放射部位皮膚萎縮、
放射性腸炎的介紹
放射性腸炎是盆腔、腹腔、腹膜后惡性腫瘤經放射治療引起的腸道并發癥。可分別累及小腸、結腸和直腸,故又稱為放射性直腸、結腸、小腸炎。根據腸道遭受輻射劑量的大小、時間的長短、發病的緩急,一般將放射病分為急性和慢性兩種。又根據射線來源放置的體內外位置的不同將其分為外照射放射病和內照射放射病。在早期腸黏膜
放射性腸炎的病因
1.照射劑量、時間 盆腔區放療4~4.5周照射量低于4200~4500rad時,發病率逐步上升;如再加大照射劑量,發病率迅速增加。一般估計,在5周內照射量超過5000rad時,發病率約為8℅。 2.腸道的不同部位對照射的敏感性不同 其耐受性依次為:直腸>小腸、結腸>胃。 3.腸道的不同部
放射性腸炎的診斷
本病的診斷一般不困難。有放療史結合臨床表現和有關檢查,可以確定病變的性質和部位,即可明確診斷。放射性腸炎的晚期表現和癌腫的復發與轉移需做X線鋇劑檢查、腸系膜血管造影、內鏡檢查、活組織檢查以資鑒別。在鑒別診斷時應考慮其他疾病,如非特異性潰瘍性結腸炎、Crohn病、腸結核、腸道脂代謝障礙綜合征(Wh
放射性腸炎的檢查
1.直腸指診 放射性腸炎的早期或損傷較輕者指診可無特殊發現。也可只有肛門括約肌痙攣和觸痛。有的直腸前壁可有水腫、增厚、變硬、指套染血。有時可觸及潰瘍、狹窄或瘺道,有3%嚴重直腸損害者形成直腸陰道瘺。同時做陰道檢查可助于診斷。 2.內鏡檢查 在開始的數周內可見腸黏膜充血、水腫、顆粒樣改變和脆
什么是放射性污染?
在自然界和人工生產的元素中,有一些能自動發生衰變,并放射出肉眼看不見的射線。這些元素統稱為放射性元素或放射性物質。在自然狀態下,來自宇宙的射線和地球環境本身的放射性元素一般不會給生物帶來危害。50年代以來,人的活動使得人工輻射和人工放射性物質大大增加,環境中的射線強度隨之增強,危機生物的生存,從而產
放射性腎炎的介紹
放射性腎炎(radiationnephritis)是大量接受放射性照射之后發生的慢性間質性腎炎,引起發病的照射量常在2500rad(25Gy)以上,屬于非炎癥性緩慢進行的腎臟疾病放射性腎炎是在1952年由Kunkler等發現青年、單腎切除等病因引起的腎肥大個體、異位腎個體是放射性損傷的易感者。本
放射性顆粒的定義
尺寸一般在毫米到納米之間范圍內,具有特定形狀的幾何體,它的某些元素的原子通過核衰變自發地放出α射線或β射線(有時還放出γ射線),這種幾何體稱為放射性顆粒。
放射性皮炎的治療
一般治療 一旦發病應及時停止放射線照射,并注意保護,避免外界刺激。 局部治療 ⑴急性放射性皮炎1.2度紅斑水腫明顯時可用爐甘石洗劑或3%硼酸溶液濕敷。無水腫滲出的急性皮炎及慢性皮炎可選用溫和無刺激性霜劑、軟膏,如維生素E霜、10%魚肝油軟膏及其它護膚霜等,亦可選用皮質激素類霜劑或軟膏。
RNA-放射性標記
實驗材料 [α32P]UTP 或 CTP(800Ci ml10mCi ml) UTP 或 CTP T4 多核苷酸激酶(γ32P)ATP 牛小腸磷酸酶T4RNA 連接酶 [32P]pCpATP2Oumol L 無 tRNA 酶的牛血清白蛋白試劑、試劑盒 10XT4 多核苷酸激酶緩沖液 DEPC 處理的
放射性腎炎的診斷
根據臨床分型、實驗室檢查及腎區接受放射線照射病史可做出本病診斷。 1、急性放射性腎炎 (1)潛伏期:接受放射線照射后6~12個月兒童患者可短于6個月。 (2)前驅期:血壓升高、貧血、心臟擴大,檢查可發現蛋白尿。 (3)臨床期:一旦癥狀出現,即迅速發展為極度疲乏食欲不振水腫,頑固性貧血、高
如何診斷放射性腎炎?
根據臨床分型,實驗室檢查及腎區接受放射線照射病史可做出本病診斷。臨床分期如下: 1.急性放射性腎炎 (1)潛伏期接受放射線照射后6~12個月,兒童患者可短于6個月。 (2)前驅期血壓升高,貧血,心臟擴大,檢查可發現蛋白尿。 (3)臨床期一旦癥狀出現,即迅速發展為極度疲乏,食欲不振,水腫,