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    原位PCR與PCR的區別

    PCR是提取細胞或組織中的DNA進行基因擴增反應,而原位PCR是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增,不但可以檢測到靶DNA,而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中,更有利于探討靶DNA與細胞之間的關系。 PCR所采用的反應體系能否應用于原位PCR PCR與原位PCR所采用的反應體系中都包括Taq聚合酶緩沖液、Mg2+、K+、4×dNTP、一對特異性引物和Taq聚合酶。但是由于組織細胞間質會吸附Mg2+,所以原位PCR中采用的Mg2+濃度要比PCR的要高,采用4.5-5.5mM可以保證有足夠的Mg2+進行反應。另外由于原位PCR中的基因擴增過程中,各反應成分須經過滲透到靶DNA處才能進行擴增,所以建議將反應循環數增加到35 個。......閱讀全文

    四種常見PCR儀的區別及運用

    普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀、 熒光定量PCR儀的區別及運用 PCR:即合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction),利用DNA在體外95℃時解旋(變性),55℃時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合(退火),再調溫度至72℃左右,DNA聚合酶沿

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    常用的分子生物學基本技術

    核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的

    血液分子生物學檢驗技術及臨床應用

    血液分子生物學檢驗技術主要包括PCR技術、DNA測序技術、限制性片段長度多態性(RFLP)、轉基因技術及基因芯片(DNA-chip)技術等分子生物學技術。目前這些技術已應用于血液病基因分析、基因診斷、白血病分型、指導治療、判斷預后和微小殘留病檢測等方面。(1)核酸分子雜交技術原理和方法1)South

    常用的分子生物學基本技術2

    IS PCR的技術特點 (1)既具有PCR的特異性與高靈敏性,又具有原位雜交的定位準確性;(2)測到低于2個拷貝量的細胞內特定DNA序列,甚至可檢測出單一細胞中的僅含一個拷貝的原病毒DNA;(3)有助于細胞內特定核酸序列定位與其形態學變化的結合分析;(4)可用于正常或惡性細胞,感染或非感染細胞的鑒定

    血液分子生物學檢驗技術及臨床應用

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    各種熱循環儀的結構特點

        熱循環儀也叫PCR儀,是實驗室中常見的反應儀器,而目前實驗室中應用的基因擴增儀主要可以分為普通基礎PCR儀,梯度PCR儀,實時熒光定量PCR儀和原位PCR儀。這些熱循環儀雖然都是用于熱循環的儀器,原理有很多相似的地方,但是在功能上會有所區別,這主要是因為它們的結構和配件

    多聚酶鏈式反應技術(PCR技術)

    多聚酶鏈式反應即PCR(polymerase chain reaction)技術,應用這一技術可以將微量目的基因(DNA片段)擴增一百萬倍以上。PCR反應理論的提出和技術的完善對于分子生物學的發展具有特殊的意義,它以敏感度高、特異性強、產率高、重復性好以及快速簡便等優點迅速成為分子生物學研究中應用最

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    石蠟包埋組織的DNA提取及其應用

    近10年來,現代分子生物學技術越來越廣泛地被用于人類疾病研究的諸領域,為了解病理狀態下基因組DNA的變化積累了新資料。目前認為,人類基因組并非人們想像的那樣穩定,諸如基因重排、擴增、缺失,突變和DNA甲基化類型改變等時有發生,這些改變對于基因表達和調控,以及疾病過程的發展與轉歸等方面均具有重要意義。

    PCR儀的基本原理與分類

    簡單的說,PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定

    RT-PCR之我見

    本文討論的范圍包括RNA酶保護分析,northernblot,原位雜交,半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol,是因為各種書籍和kit說明書上都有,主要說一些原則,而且大部分是失敗和成功的經驗,還有小組討論結果以及各種書里七零八落看的內容,希望對大家有用。 基因

    幽門螺桿菌感染診斷方法評價

    一、Hp感染主要診斷方法Hp感染的診斷有多種較為可靠的方法,可從檢測原理、檢測意義以及對人體有無創傷等多角度進行各種不同分類。一般依據對人體有無創傷分為侵入性和非侵入性診斷方法。侵入性診斷方法主要是依賴胃鏡活檢的方法,包括:快速尿素酶試驗(RUT)、胃黏膜直接涂片革蘭染色鏡檢、胃黏膜組織切片染色鏡檢

    日益為人們所關注,伴隨診斷行業現況如何?

      伴隨診斷是一種體外診斷技術,能夠提供有關患者針對特定治療藥物的治療反應的信息,有助于確定能夠從某一治療產品中獲益的患者群體,從而改善治療預后并降低保健開支。  伴隨診斷行業概況  隨著個性化醫療和精確治療時代的到來,伴隨診斷(companion diagnostics,CDx)日益為人們所關注。

    什么是PCR陰性?

    舉乙肝的例子來說:通過酶免的方法查乙肝兩對半和通過熒光定量PCR的方法學查乙肝DNA小明得了肝炎,但他不知道自己得了肝炎,有一天身體不舒服或者正常體檢(比如入職體檢),他去看醫生,臨床醫生懷疑他得了肝炎(肝炎有很多種比如病毒性肝炎,也就是病毒傾入他體內后由于人體的三道防線沒能把病毒消滅掉,導致病毒在

    微生物學檢驗基本技術(2)

    第六節 自動化技術在微生物檢驗中的應用  微生物鑒定的自動化技術近十幾年得到了快速發展。數碼分類技術集數學、計算機、信息及自動化分析為一體,采用商品化和標準化的配套鑒定和抗菌藥物敏感試驗卡或條板,可快速準確地對臨床數百種常見分離菌進行自動分析鑒定和藥敏試驗。目前自動化微生物鑒定和藥敏分析系統已在世界

    微生物學檢驗基本技術(九)

    3.16S rRNA同源性分析(1) rRNA-DNA雜交:變性rRNA與變性DNA混合時,rRNA與其互補的DNA鏈形成雜交雙鏈,rRNA分子與異源DNA雜交時,也能在其同源區形成互補雙鏈,這種雜交雙鏈的穩定性與其同源性成正相關,適于細菌屬及屬上水平的分類研究。現最常用的是硝酸纖維膜結合法。(

    微生物學檢驗基本技術(2)

    第六節 自動化技術在微生物檢驗中的應用   微生物鑒定的自動化技術近十幾年得到了快速發展。數碼分類技術集數學、計算機、信息及自動化分析為一體,采用商品化和標準化的配套鑒定和抗菌藥物敏感試驗卡或條板,可快速準確地對臨床數百種常見分離菌進行自動分析鑒定和藥敏試驗。目前自動化微生物鑒定和藥敏分析系統已

    微生物學檢驗基本技術(六)

    二、沉淀反應可溶性抗原(如細菌的培養濾液、含細菌的患者血清、腦脊液及組織浸出液等)與相應抗體相混合,在比例適合和適量電解質的存在等條件下,形成肉眼可見的沉淀物,稱沉淀反應。利用沉淀反應進行血清學試驗的方法稱為沉淀試驗。沉淀反應有環狀、絮狀和瓊脂擴散法3種基本類型。1.環狀沉淀試驗將已知的抗血清加于內

    實時熒光定量PCR技術在分子生物學和醫學研究等領域的...

      定量PCR是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied biosystems公司推出,它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用對熒光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。該

    常用基因診斷技術

       當細胞的基因組DNA用特定的內切酶如Eco RⅠ切割時,凡有GAATTC的地方都被切開,得到許多長度一定但互不相等的片段,需要分析、分離的基因或DNA片段就在其中某一特定的的片段上。  然而許多長短不同的DNA片段混合在一起是很難分析的。因此首先必需將它們按大小(長短)分離

    骨髓活檢的臨床應用

     1.骨髓活檢與骨髓穿刺的區別 骨髓活檢和骨髓穿刺在臨床的應用(見圖2-4-1)各有優勢,骨髓穿刺比較常用。骨髓穿刺骨髓活檢取材方式用骨髓穿刺針抽骨髓液后涂片瑞-姬染色后備檢用骨髓活檢針取得一條骨髓組織,固定包埋切片后行姬姆薩等染色后備檢優點1.操作較簡便 2.涂片中細胞分布均勻,胞體舒展,染色

    基因芯片技術簡介和應用展望(一)

    基因芯片(Gene Chip)通常指DNA芯片,其基本原理是將指大量寡核苷酸分子固定于支持物上,然后與標記的樣品進行雜交,通過檢測雜交信號的強弱進而判斷樣品中靶分子的數量。基因芯片的概念現已泛化到生物芯片(biochip)、微陣列(Microarray)、DNA芯片(DNA chip),

    基因表達之RT-PCR之我見

    在論壇上看到不停地有人在問RT-PCR的問題,實際上在以前的帖子中各位香主和eeflying(我為什么總是提他們?因為還是很佩服的哦,生怕自己說錯了,被他們指出來哦)都談到了很多,鄙人也充大頭答了一些問題,但是還是有各種問題,由于的基因表達還有點實戰經驗(但也技止此而),所以想些點東西給大家參考,計

    分子標記

    內容:一、遺傳標記 二、DNA分子標記 三、染色體原位雜交 四、DNA分子標記的應用 長期以來,植物育種中選擇都是基于植株的表型性狀進行的,當性狀的遺傳基礎較為簡單或即使較為復雜但表現加性基因遺傳效應時,表型選擇是有效的。但水稻的許多重要農藝性狀為數量性狀,如

    激光顯微切割系統應用于腫瘤組織的切片研究

    胰腺導管腺癌(PDAC)是第四大癌癥相關死因的癌癥,診斷后具有5年存活率的病人僅有3%。造成如此之差預后的原因,主要是因為局部的高復發率和對治療的多因素的抵抗。在胰腺癌中,85%的病人診斷后處在惡性程度很高的階段,主要的特征是浸潤近端的淋巴結和血管結構,也伴隨轉移到肝和腹膜。吉西他濱作為首選藥能夠產

    現代城市污水水質檢測方法分析

    一、前言某城市市政污水管網晴天、雨天差異不夠明顯,且由于排水系統結構性缺陷及外來工業污水交叉流動,導致該城市污水處理廠普遍進水水體中COD、TN、TP等元素濃度較低,對整體城鎮供水質量造成了嚴重的影響。為了進一步確定該城鎮污水處理廠進水水質菌群組織架構,本文對該城鎮片區納污范圍內居民小區化糞池出水及

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